如何充分脱蜡?
(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温 10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果魁伟更好。总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。......阅读全文
免疫组化方法的即用型二步法步骤简介
1)脱蜡、水化组织切片。 2)根据所应用的一抗的特殊要求,对组织切片进行预处理。 3)0.3%或3%H2O2去离子水孵育5分钟-30分钟,以阻断内源性过氧化物酶,PBS或TBS冲洗。 4)滴加一抗,室温或37℃孵育30~60分钟,或4℃过夜,PBS或TBS浸洗3分钟×5次。 5)滴加en
免疫组化的操作规程
实验概要本实验介绍了免疫组化的操作规程。主要试剂1. PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。 2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬
免疫组化的经验总结(2)-操作规程
(一)、仪器设备 1)450px不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉; 2)水浴锅(二)、试剂 1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。 2)0.0
免疫组化染色方法大汇总
免疫组化的方法很多,新方法层出不穷,如二步法,要不断更新,与时俱进。虽然这些方法各有其特色,但总的来说,只要应用恰当均可获得较为满意的结果。方法的选择并不是影响免疫组化结果的主要因素。问题在于一个单位应常规地、固定地使用一种方法,不宜交替使用不同的方法或经常更换方法。一旦选定一种方法,应务必使其标准
免疫组化的操作规程
实验概要本实验介绍了免疫组化的操作规程。主要试剂1. PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。 2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬
免疫组化操作
(一)、仪器设备1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2. 水浴锅(二)、试 剂1. PBS缓冲液(pH7.2―7.4)2.0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液(CB,pH6.0,1000ml)3. 3%甲醇―H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制4. 风裱剂:a. 甘油和0.5mm
TUNEL检测的实验方法
a. PBS或HBSS洗涤一次。b. 如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d. 用PBS或HBSS洗涤一次。e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分钟。f. 转步骤5。 a.
TUNEL检测的实验方法
a. PBS或HBSS洗涤一次。b. 如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d. 用PBS或HBSS洗涤一次。e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分钟。f. 转步骤5。 a.
荧光原位杂交(FISH)和用引物介导的原位标记(PRINS)...
荧光原位杂交(FISH)和用引物介导的原位标记(PRINS)操作规程设备 1、 医用微波炉; 2、 水浴锅; 3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜; 4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。FISH试剂 (1)1×PBS:由10×PBS溶液稀释而成,储存
2.1.8-从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA
从病理科取来的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织可用于RNA 表达分析.常规固定和石蜡包埋后,从活组织、手术、尸体组织中分离出来的 RNA 并不完全降解.并且即使在切除后未立即固定,富含 RNase 的器宫如胰腺内仍存在大约 100 个碱基或更长的 RNA碎片。下面介绍一种从 6〜8 um 组织切片中提
荧光原位杂交和用引物介导的原位标记(PRINS)操作规程
仪器设备 1、 医用微波炉; 2、 水浴锅; 3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜; 4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。 FISH试剂 (1)1×PBS:由10×PBS溶液稀释而成,储存于4℃; (2)20×SSC(pH7.0
SPA-在免疫组化中的应用——间接法
实验方法原理由于 SPA 能结合 IgG 的 Fc 段,因此就成为天然的抗 IgG,酶标记的 SPA 可代替酶标记的 IgG 抗血清,从而测定和定位组织内的 IgG 或免疫复合物。实验材料石蜡切片试剂、试剂盒H2O2TBS第一抗体SPA-HRPDAB二甲苯乙醇树胶实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水。
SPA-在免疫组化中的应用
实验方法原理 由于 SPA 能结合 IgG 的 Fc 段,因此就成为天然的抗 IgG,酶标记的 SPA 可代替酶标记的 IgG 抗血清,从而测定和定位组织内的 IgG 或免疫复合物。实验材料 石蜡切片试剂、试剂盒 H2O2TBS第一抗体SPA-HRPDAB二甲苯乙醇树胶实验步骤 1. 石蜡切片常规脱
常规切片制备的注意事项(二)
6. 包埋 用包埋剂来支持组织的过程称包埋。最常用的是石蜡包埋法。包埋的关键一是平整,二是方位。要求在包埋时,应采用镊子轻压组织块拱起部份,使之平贴于底部,通常采用组织的最大面包埋。囊壁、管腔组织应竖直包埋。小块多颗组织,应尽量放在一起,并保证在一个平面上。修去两边的余蜡(所谓的两边,
免疫组化的操作步骤
一 免疫组化(SP法)操作步骤1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2.缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次。5. 滴加
免疫组化的具体步骤
一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2. 缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次
免疫组化的具体步骤
一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2. 缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次
免疫组化的操作步骤
一 免疫组化(SP法)操作步骤1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2.缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次。5. 滴加
免疫组化的操作步骤
一 免疫组化(SP法)操作步骤 1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行 2.缓冲液洗 3min/2 次。 3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。 4. 缓冲液洗 5min/
免疫组化的具体步骤
免疫组化操作步骤一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2. 缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗
石蜡切片免疫组化实验
实验方法原理 根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入底物显色。实验材料 石蜡切试剂、试剂盒 PBS柠檬酸盐缓冲液蒸馏水增强剂酶标抗鼠 兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐酸二氨基联苯胺仪器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头
免疫组化的具体步骤
一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2. 缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次
放线菌门的作用
放线菌主要能促使土壤中的动物和植物遗骸腐烂。放线菌中也有致病菌,如牛放线菌,在口颊、齿龈等部位发生损伤时能侵入组织内 ,引起放线菌病。最主要的致病放线菌是结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌,可导致人类的结核病和麻风病。 放线菌最重要的作用是可以产生、提炼抗菌素,目前世界上已经发现的2000多中抗菌素中
关于病理切片的染色和封片的介绍
病理切片常用的染色方法是苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin)染色法,简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色,如细胞核中的染色质等;伊红是一种酸性染料,可使组织中的嗜酸性物质染成红色,如多数
润滑油的凝点和倾点有什么差别
润滑油:润滑油的凝点是指试油在规定条件下冷却至停止移动时的最高温度称为凝点,以℃表示。凝点是评价油品低温性能的一项指标。润滑油的凝点越高说明其低温流动性就越差,反之则亦然。油品的凝点与蜡含量有直接关系,油品中的蜡含量越多,凝点越高。因此凝点在石油产品加工工艺中可以指导脱蜡工艺操作。艾润克润滑油:润滑
几种多聚螯合物酶法
实验概要本文介绍了三种多聚螯合物酶法:PowerVision法,ELPS法和EPOS法。实验原理1. PowerVision系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,
石蜡切片免疫组化实验4
实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从
管式离心机简介
管式离心机有GF、GQ两大系列,典型的如GQ系列澄清型管式离心机、GF系列液、液分离型管式离心机。 GF—分离型:主要用于分离各种难分离的乳浊液,特别适用于二相密度差甚微的液、液分离(比重差大于0.1%),以及含有少量杂质的液、液、固三相分离。油品类的分离,变压器油 ,食用油脱水及脱蜡,透平油
组织切片标本制作的基本原理
最为广泛应用的方法:石蜡切片 不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺
神经组织染色实验
实验方法原理 神经元细胞核周含有尼氏小体,在一定条件影响下或神经元受到损伤时,尼氏小体可减少或消失。常用 olszwski 法能够较好地显示尼氏小体。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 焦油紫乙酸钠蒸馏水冰醋酸二甲苯乙醇树胶实验步骤 焦油紫染色液:焦油紫 1 g,乙酸钠 2.2 g,蒸馏水 97 m