如何充分脱蜡?

(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温 10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果魁伟更好。总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。......阅读全文

胶体铁染色的检查过程

  (1) 组织切片脱蜡入水,0.01mol/L pH7.4 PBS洗  (2) 用4%正常羊血清封闭组织37℃,30min。  (3) 分别以第一抗体孵育组织,4℃24h,PBS振洗10min×3  (4) 用胶体铁标记的第二抗体37℃孵育30min或用桥抗联接胶体铁标记物  (5) 蒸馏水洗  

免疫组化主要步骤

免疫组化主要步骤1.        洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上

石蜡切片免疫组化染色

实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理     1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱

免疫组化SABC法操作流程

1、洗载玻片将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37 oC温箱中,将多聚赖氨

石蜡切片免疫组化染色

实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理     1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱

免疫组化SABC法操作流程

 1、洗载玻片将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37 oC温箱中,将多

免疫组化染色方法(SP法和SABC法)

SP法1)脱蜡、水化;2)PBS洗2~3次各5分钟;3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上,室温静置10分钟;4)PBS洗2~3次各5分钟; 5)抗原修复;6)PBS洗2~3次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗50μl,室温静置1小时或者4℃过夜或者

关于放线菌的开发利用介绍

  放线菌是一类极其重要的微生物资源。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切,广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂(蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等)、维生素(B12)和有机酸等。弗兰克菌属(Frankia)为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。此外,放线菌

免疫组化的操作流程

实验概要本文介绍了免疫组织化学实验操作流程,主要有:脱蜡和水化,抗原修复及免疫组织化学染色等步骤。实验原理免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位

免疫组化的操作流程

实验概要本文介绍了免疫组织化学实验操作流程,主要有:脱蜡和水化,抗原修复及免疫组织化学染色等步骤。实验原理免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位

脂肪及结缔组织的染色方法

实验概要掌握脂肪及结缔组织的染色方法。脂肪的染色方法:脂肪染色常用脂溶性色素,如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、油红O等。这类染料既能溶于有机溶剂如乙醇、丙酮,又能溶于脂肪。由于该类染料在脂质中溶解度较大,染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质呈染液的颜色。主要用于显示组织脏器的脂肪变性和类脂质的异常沉着

免疫组化操作规程

(一)、仪器设备   1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;    2)水浴锅(二)、试剂     1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。    2)0.01mo

石蜡切片免疫组化染色步骤

1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1

石蜡切片免疫组化染色方法

1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1

免疫组化操作规程

  (一)、仪器设备    1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;    2)水浴锅   (二)、试剂    1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。

免疫组化操作规程

免疫组化操作规程(一)、仪器设备   1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;    2)水浴锅(二)、试剂     1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。   

免疫组化操作规程

  (一)、仪器设备    1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;    2)水浴锅   (二)、试剂    1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。

免疫组化的实验试剂及实验步骤

一、试剂(1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。(2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。(3)0.

荧光免疫染色和DAPI染色实验步骤

免疫染色实验方法和步骤免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)、免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等,可以参考如下步骤进行操作。 1. 样品准备(Sample

石蜡切片(paraffin-sections)免疫组化染色步骤

1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:(1)APES:现用现配。将洗净的玻片

免疫组化实验原理和步骤(一)

实验原理:抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部

特染:-结缔组织染色

一、Mallory三色染色法1. 试剂配制(1)重铬酸钾液 重铬酸钾2.5g,醋酸5ml,蒸馏水95ml(2)苯胺蓝桔黄G液 苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100ml(3)酸性复红液 酸性复红0.5g,蒸馏水100ml2.染色步骤(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。(2

细胞凋亡检测:形态学特征的检测方法1

一、普通光学显微镜观察方法(一)苏木素-伊红染色(HE 染色法)石蜡组织切片的HE染色1、取材组织块,经固定后,常规石蜡包埋,4μm切片。2、切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇

胶体铁染色的注意事项及检查过程

  注意事项  由于各实验室的实验条件不同,参考值范围有差异,应以本实验室的参考值范围为准。  检查过程  (1) 组织切片脱蜡入水,0.01mol/L pH7.4 PBS洗  (2) 用4%正常羊血清封闭组织37℃,30min。  (3) 分别以第一抗体孵育组织,4℃24h,PBS振洗10min×

病理制片技术——常规染色

苏木精(hematoxylin)和伊(eosin)染色方法,简称HE染色方法,是生物学、细胞学与组织学最广泛应用的染色方法。在病理科称为常规染色 方法。病理学的诊断都是以HE方法为基础的。染色的目的是把组织切片或细胞涂片等浸入染料及其他染色剂配成的染色液中,经过适当的时间和处理,

免疫组化具体步骤中的一些问题

问:我现在刚开始做石蜡切片免疫组化,具体操作过程中有些问题想要咨询一下1.脱蜡至水:二甲苯I II 各10分钟后 100% 95% 85% 75%酒精各多久呢(因看各个版本的介绍都不同) 弱弱的问:只搞一个浓度的酒精如95%时间稍微长一些可以吗2.抗原修复:可以枸橼酸加热至沸腾再放入切片保温5-10

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA

            试剂、试剂盒 R N A 消化液 β-巯基乙醇 蛋白酶 K(20 mg ml) 水平衡苯酚 氯仿 糖原 TE

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA

试剂、试剂盒 R N A 消化液 β-巯基乙醇 蛋白酶 K(20 mg ml) 水平衡苯酚 氯仿 糖原 TE 缓冲液异丙醇无水乙醇乙醇 DEPC 水实验步骤 一 材料与设备1)RNA 消化液:每 100ml 包含 40ml 4mol/L 硫氰酸胍,3mllmol/L Tris-HC(PH7.6),2

罗氏为FFPE样品推出两款新工具

  罗氏诊断应用科学部近日宣布推出两款新产品:High Pure FFPET RNA Isolation Kit和RealTime ready cDNA Pre-Amp Master & Primer Pools,适用于福尔马林固定和石蜡包埋的组织(FFPET)。   据估计,现有超过10亿个

关于二氯乙烷的应用介绍

  1.主要用作氯乙烯;乙二醇;乙二酸;乙二胺;四乙基铅;多乙烯多胺及联苯甲酰的原料。也用作油脂;树脂;橡胶的溶剂,干洗剂,农药除早菊素;咖啡因;维生素;激素的萃取剂,湿润剂,浸透剂,石油脱蜡,抗震剂,还用于农药制造以及药物灭虫宁;哌哔嗪的原料。在农业上可用作粮食;谷物的熏蒸剂;土壤消毒剂等。  2