高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体
从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。 一、原理 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。 二、试剂和器材 1、tsk deae spw离子交换层析柱（75mm×7.5mm，bio rad） 2、高效液相色谱仪（包括控制系统、溶剂传递系统、高压加压活门和紫外280nm监测系统） 3、PBS，缓冲液a和b。 三、操作步骤 腹水离心10000 g，10min，除去细胞和杂质，在4℃下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40%饱和硫酸铵 ↓搅拌20～30min 离心，沉淀用40%饱和硫酸铵洗涤2次后溶于P......阅读全文
高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体
从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。 一、原理 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的
用高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验概要本实验介绍了高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体的原理及操作步骤。实验原理从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。根据离子
高效液相色谱（HPLC）常见问题
1、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法样品量不足：解决办法为增加样品量样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器检测器衰减太多：调整衰减即可。检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。检测池
高效液相色谱（HPLC）常见问题
1、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足：解决办法为增加样品量样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器检测器衰减太多：调整衰减即可。检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。检测
免疫球蛋白纯化技术——纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验方法原理根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。实验材料PBS试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材层析柱高效液相色谱仪实验步骤1. 腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使
高效液相色谱技术(HPLC)的技术原理
尽管二维凝胶电泳（2-DE）是常用的对全蛋白组的分析方法，但其存在分离能力有限、存在歧视效应、操作程序复杂等缺陷。对于分析动态范围大、低丰度以及疏水性蛋白质的研究往往很难得到满意的结果。Chong等使用HPLC/质谱比较分析恶性肿瘤前和癌症两种蛋白质差异表达。利用HPLC分离蛋白质，并用MALDI-
高效液相色谱技术(HPLC)的技术原理
尽管二维凝胶电泳（2-DE）是常用的对全蛋白组的分析方法，但其存在分离能力有限、存在歧视效应、操作程序复杂等缺陷。对于分析动态范围大、低丰度以及疏水性蛋白质的研究往往很难得到满意的结果。Chong 等使用HPLC/ 质谱比较分析恶性肿瘤前和癌症两种蛋白质差异表达。利用HPLC 分离蛋白质，并用MAL
高效液相色谱(HPLC）流动相的性质要求
高效液相色谱(HPLC)流动相溶剂具有粘度低、与检测器相容性好、产品易得、毒性低等特点。选择填料（固定相）后，强溶剂对填料表面溶质的吸附降低，相应的容量因子K降低。然而，较弱的溶剂增加了溶质在填料表面的吸附，相应的容量因子k也增加了 因此，k值是流动相组成的函数 塔板数n通常与流动相的粘度成反比
离子色谱与高效液相色谱（HPLC）有什么不同
离子色谱和HPLC本质上是一样的，结构几乎一样，只是离子色谱用于测试阴阳离子，液相色谱用于测试有机物，色谱分离系统有些差异，IC用离子交换柱，LC用吸附柱。
离子色谱与高效液相色谱（HPLC）有什么不同
离子色谱和HPLC本质上是一样的，结构几乎一样，只是离子色谱用于测试阴阳离子，液相色谱用于测试有机物，色谱分离系统有些差异，IC用离子交换柱，LC用吸附柱。
土霉素的高效液相色谱HPLC检测方案
简介:高效液相色谱HPLC检测土霉素的方法，首页要了解土霉素是什么和分子式等，然后通过制定高效液相色谱检测方案，最后通过仪器与试剂等硬性条件进行土霉素检测。【土霉素】土霉素：抗菌谱和应用与四环素相同。本品对肠道感染，立克次体病，包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、落基山热、恙虫病和Q热，支原体属感染
高效液相色谱（HPLC）柱子的清洗和再生
1． 柱子的清洗 即使样品和流动相已做过前处理，也仍难以完成避免柱子受到污染，因此必须对柱子行清洗。清洗应定期进行，如果在短期内分析许多样品，则以每日清洗一次为宜，至少也应一周一次，防止有太多的杂质在柱上堆积。 反相柱的常规洗涤办法是：分别取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱体积（既对于一根4
简介高效液相色谱(HPLC）流动相的性质要求
（1）流动不会相应地改变填料的任何性质 低交联度离子交换树脂和排斥色谱填料有时会遇到一些有机相的膨胀或收缩，从而改变色谱柱填料床的性能。碱性流动相不能用于硅胶柱体系中，酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附柱体系中。 （3）必须与探测器配套。当使用紫外检测器时，所用的流动相在检测波长上不应吸收
Alliance－HPLC高效液相色谱溶剂管理是如何的？
Alliance HPLC高效液相色谱该单元的溶剂管理系统最多对四路色谱溶剂进行脱气并以精确的比例混合，并无脉动地平稳输送溶剂； Alliance HPLC高效液相色谱有下述特征： 仅配备两个入口阀的串行流路可降低复杂性，并大程度缩短故障停机时间 自动化溶剂压缩性（无错溶剂
Alliance－HPLC高效液相色谱溶剂管理是如何的？
Alliance HPLC高效液相色谱该单元的溶剂管理系统最多对四路色谱溶剂进行脱气并以精确的比例混合，并无脉动地平稳输送溶剂； Alliance HPLC高效液相色谱有下述特征： 仅配备两个入口阀的串行流路可降低复杂性，并大程度缩短故障停机时间 自动化溶剂压缩性（无错溶剂
高效液相色谱(High－Performance－Liauid－Chromatography，HPLC)
Martin 和 Synge在1941年就提出高效相色谱的设想，然而直到六十年代后期，由于各种技术的发展，高效液相色谱才付诸实现。这种色谱技术曾被称为高速液相色谱（HighSpeed Liquid Chromatography），高压液相色谱（High Parss-ure Lipuid
Alliance－HPLC高效液相色谱溶剂管理是如何的？
Alliance HPLC高效液相色谱该单元的溶剂管理系统最多对四路色谱溶剂进行脱气并以精确的比例混合，并无脉动地平稳输送溶剂； Alliance HPLC高效液相色谱有下述特征： 仅配备两个入口阀的串行流路可降低复杂性，并大程度缩短故障停机时间 自动化溶剂压缩性（无错溶剂
高效液相色谱HPLC操作流程及注意事项
高效液相色谱HPLC使用前期准备工作：1. 始终保持高效液相色谱仪器包括内在系统的清洁。2. 室内温度始终保持恒定，因为室温的变化对高效液相色谱检测器有影响。3. 所有溶液、试剂、样品、标准溶液、注射剂等都应事先准备好。4. 最好提前准备好备用电源防止停电。高效液相色谱HPL
高效液相色谱之高效反相液相色谱（一）
反相色谱（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色
高效液相色谱之高效排阻液相色谱
高效液相色谱（High Rerformance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方
高效液相色谱之高效反相液相色谱（二）
附：色谱柱操作说明，（以迪马公司Diamonsil(TM)柱为例）1. 色谱柱常规参数订货号：Catalog.No. 产品ZL号 Serial No.出厂日期 Date填料 Column Paking 如，Diamonsil(TM)钻石C18 5цm柱规格 Col
液相色谱（HPLC）入门（二）
什么是色谱图?色谱图表示发生在高效液相色谱系统中的化学[色谱]分离。一系列从基线出现的峰以时间为坐标。每个峰代表对不同化合物的检测器反应。色谱图由计算机数据站描绘。[如图 H].Figure H: How Peaks Are Created图H中，黄色谱带完全通过了检测器流通池；产生的电信号被送到计
液相色谱（HPLC）入门（一）
什么是液相色谱?历史概述和定义液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 Mikhail S. 茨维特提出的。他最先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物[树叶色素]。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品[混匀植物叶
液相色谱（HPLC）入门（五）
正相高效液相色谱在植物提取物的分离过程中，茨维特成功运用极性固定相[玻璃柱中的粉笔末； 如图A]和弱极性[非极性]流动相。这种经典的色谱模式被称为正相。图 S -1: 正相色谱法图 S -1 代表三个染料混合物的正相色谱分离。极性的固定相最强地保留了极性的黄色染料。相对非极性的蓝色染料在非极
液相色谱（HPLC）入门（四）
高效液相色谱分离模式总的来说，化合物的三种主要的性质可以用来产生高效液相色谱分离。它们是：· 极性· 电荷· 分子大小首先，让我们考虑极性和根据这一特性的两种主要分离模式：正相和反相色谱。基于极性的分离一个分子的结构、活性和物化性质由组成它的原子和化学键决定。在一个分子内部，决定了其特殊性质和可预测
液相色谱（HPLC）入门（三）
高效液相色谱量级 [分析，制备和工程]我们已经讨论了高效液相色谱如何提供分析数据，用于定性和定量样品中的化合物。然而，高效液相色谱也可以用来纯化和收集所需的每一个化合物，在流通池下游使用组分收集器。这个过程被称为制备液相[如图 K].在制备液相中，科学家可以收集每个流出色谱柱的组分[例如：在本例中，
高效液相色谱原理
以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。构造可分为高压输液泵，色谱柱，进样器，检测器以及数据获取与处理系统等部分。与气相色谱法相比，液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要求把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物，不稳定的天然产物以
高效液相色谱技术
高效液相色谱（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。国际市场
高效液相色谱柱
一、怎样选择色谱柱 现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。 （1）硅胶基质填料： 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团（NH2，APS）和氰基团（
高效反相液相色谱
实验方法原理 反相色谱（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高