杂交瘤技术基本程序与方法3
⑥7.5% NaHCO3溶液 称取分析纯NaHCO3 7.5g，溶于100ml超纯水或四蒸水中，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），盖紧瓶塞，4℃保存。 ⑦HEPES溶液（1mol/L） 称取23.83g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N，-2-ethanesulfonic acid，N-2-羟乙基哌嗪- N，-2-乙基磺酸，MW 238.3）溶于100ml超纯水或四蒸水中，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），4℃保存。 ⑧8-氮鸟嘌呤贮存液（100×） 称取200mg 8-氮鸟嘌呤（8-azaguanine，MW 152.1），加入4mol/L NaOH 1ml，待其溶解后，加入超纯水或四蒸水99ml，过滤除菌；分装小瓶，-20℃冻存。使用时按1%浓度加入到培养液中（即终浓度为20ug/ml）。 ⑨50% PEG&nbs......阅读全文
环境监测的基本程序
根据监测目的，进行现场调查，收集相关信息和资料（水文、气候、地质、地貌、气象、地形、污染源排放情况、城市人口分布等）→根据监测技术路线，设计并制定监测方案（包括监测项目、监测网点、监测时间与频率、监测方法等）→实施方案（布点采样、样品预处理、样品分析测试等）→制定质量保证体系→数据处理→环境质量评价
固相杂交的基本程序
固相杂交的基本程序是：①准备待测样本；②制备和标记探针；③固相载体的处理；④预杂交、杂交、漂洗；⑤杂交信号检测；⑥结果判断及分析。
基因治疗的基本程序
(一)治疗性基因的获得(二)基因载体的选择(三)靶细胞的选择(四)基因转移方法(五)转导细胞的选择鉴定(六)回输体内
杂交瘤细胞系的产生与筛选
脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶
杂交瘤技术的原理及具体步骤
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，
与一般的细胞融合相比，杂交瘤技术有什么特殊地方
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序（一）
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序（二）
4、竞争ELISA 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检
蛋白质提取与纯化技术3
1、减压加温蒸发浓缩 通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液，表面不断通过空气流；或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室，用电扇对准吹风
基本操作技术：提取与过滤
当需要以植物药材为原料制剂备浸出制剂时，一般均择适宜的浸出方法和溶媒，将药材中有效成分可有效发提取出来，然后将取液过滤以作进一步处理。一、提取又称浸提。浸提过程一般分为三个阶段：浸润渗透一解吸溶解一扩散及溶剂置换。影响浸提的因素有：药材粉碎度、温度、时间、浓度差（即细胞内外浓度）以及溶媒的PH值等。
杂交瘤的克隆化及冻存与复苏
杂交瘤克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。因为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体（特异性抗体）分泌细胞和其它无关抗体的分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开就需要克隆化。克隆化的原则是，
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
抗体酶的杂交瘤技术制备法介绍
经体内免疫后再进行细胞融合是制备抗体酶的一种传统方法。杂交瘤技术的基本原理是用不能在培养液中生长的但能产生抗体的脾脏细胞，与能在培养液中生长的骨髓瘤细胞进行融合，融合得到的杂交细胞既能产生抗体又能在体外培养，通过选择培养，以获取能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。再把这些细胞单克隆化，即繁殖成母体的同
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
简述杂交瘤技术选择培养基的应用
细胞融合是一个随机的物理学过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬液中，经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中仅存活5～7d，无需特别筛选；细胞的多聚体形式
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞
单克隆抗体杂交瘤细胞筛选技术介绍
1986年，美国FDA批准了第一个单克隆抗体药物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超过40个治疗用抗体药物被批准上市，每年实现超过600亿美元的销售额。在国际及国内形成了抗体药物开发热潮。巨大的市场前景和现存的技术问题及壁垒并存的现实不可避免地引发抗体药物新一轮技术革命。而其结果又将毫无疑问地改
电子天平程序与设定
电子天平的内设程序应分以下几步来完成：1.关掉天平开关。2.同时按电子天平的去皮键和开关键，并马上松开电子天平的开关键，继续按住电子天平的去皮键不放。3.待电子天平的显示器出现“CH5”时，再松开电子天平的去皮键。4.此时电子天平的显示器上，依次出现电子天平内设程序的页码，如L1、L2和L0后开始循
杂交瘤培养基推荐使用方法
虽然，杂交瘤细胞的生长依赖于外源性营养物质的补充，如：血清、白蛋白、水解产物、蛋白质等，但是，仍可应用化学合成的TurboDoma培养基进行细胞培养。总之，你目前使用的培养基中营养补充成分越少，细胞从这种蛋白依赖型培养基过渡到适应TurboDoma完全无蛋白培养基的速度就会越快。本文威正翔禹/缔一
杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发
Part 1前言ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点，1.待测
HIV核酸检测：定性与定量检测方法及程序的区别
随着生物技术的发展,核酸检测得到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。简单的说就是病毒感染人体后，一般情况下可通过一系列检测被发现，而最早能被检测到的是病毒核酸。现有的酶联免疫等血清学检测方法检测的是抗原或抗体，而
药物质量检测的基本程序
药物质量检测工作是按照一定的程序逐步完成的,任何一个环节出现问题或偏差,都会对检品的检测结果造成严重的影响。所以,药物质量检测工作者者应认真执行检测标准操作规程,保证检测结果的准确性。药物质量检测工作的基本程序如下。1.送检样品的取样送检样品的取样应遵循均匀、合理的原则,随机、客观地从大量的样品中取
药物质量检测的基本程序
药物质量检测工作是按照一定的程序逐步完成的,任何一个环节出现问题或偏差,都会对检品的检测结果造成严重的影响。所以,药物质量检测工作者者应认真执行检测标准操作规程,保证检测结果的准确性。药物质量检测工作的基本程序如下。1.送检样品的取样送检样品的取样应遵循均匀、合理的原则,随机、客观地从大量的样品中取
药物质量检测的基本程序
药物质量检测工作的基本程序如下。1.送检样品的取样送检样品的取样应遵循均匀、合理的原则,随机、客观地从大量的样品中取出少量样品,并应保证所取的样品具有科学性、真实性和代表性。药品应按生产批号进行检测,即每批药品生产完毕后,生产车间应填写成品请验单。每批原敷料进厂后也应由仓库填写原辅料请验单,并通知质
RNA干扰（RNAi）实验原理与方法（3）
3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法，
无DMSO、无血清干细胞冻存技术与使用（非程序降温）
含DMSO的冻存液DMSO是最常用的渗透性冷冻保护剂，广泛应用于细胞的冷冻保存。在细胞水平，DMSO除了是一种DNA致畸因子外，还可渗入细胞内，分子中S=O键可能与细胞内蛋白发生化学反应，致使蛋白变性。因此，有些细胞和组织细胞对DMSO敏感，使用含DMSO的细胞冷冻液会降低细胞复苏后活性，进而影响细
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌