固相杂交的基本程序
固相杂交的基本程序是：①准备待测样本；②制备和标记探针；③固相载体的处理；④预杂交、杂交、漂洗；⑤杂交信号检测；⑥结果判断及分析。......阅读全文
固相杂交的基本程序
固相杂交的基本程序是：①准备待测样本；②制备和标记探针；③固相载体的处理；④预杂交、杂交、漂洗；⑤杂交信号检测；⑥结果判断及分析。
常用的固相杂交方法介绍
常用的固相杂交方法有斑点杂交法、夹心杂交法和原位杂交法等。下面简单介绍几种常用的核酸分子固相杂交方法。①斑点杂交法（dot blot hybridization）：最常用的杂交模式．将样品DNA直接点在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，在严格的条件下杂交后进行检测。斑点杂交法简单、迅速，不需要限制性核酸内切酶
常用电镜原位杂交技术的基本程序
原位杂交技术自创立以来，为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病理学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料，发挥了其他技术难以取代的作用。但不论是使用放射性核素探针，还是非放射性探针，大部分研究工作都还限于光镜水平。为了对检测的靶核酸进行更精确的亚细胞定位，以及能
杂交瘤技术基本程序与方法9
（1） 有限稀释法 材料： a、96孔细胞培养板等； b、HT培养基； c、活力强的杂交瘤细胞； d、小鼠腹腔细胞。 方法： a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。 b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞3中不同的稀释度。 c、
杂交瘤技术基本程序与方法1
一、杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月
杂交瘤技术基本程序与方法6
③全菌抗原的ELISAS a、新鲜培养的细菌用蒸馏水或PBS悬浮，并调整细菌浓度至1×108个/ml。必须指出，对于人畜共患病病原体需注意安全操作，最好是灭活处理。 b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（0.1mol/L NaHCO3 95ml+25%戊二醛溶液5ml），37℃作用2小时，蒸馏水洗
杂交瘤技术基本程序与方法7
⑦Dot-ELISA试验 免疫斑点试验（Dot-ELISA）是以硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜为固相载体，进行抗原抗体反应的免疫检测手段。该法采用不溶性底物（如DAB，或4-氯萘酚或AgNO3等），其与相应标记物（HRP、AP、胶体金）作用形成不溶性产物，呈现斑点状着色，从而易于判定结果。根据所用的标
杂交瘤技术基本程序与方法3
⑥7.5% NaHCO3溶液 称取分析纯NaHCO3 7.5g，溶于100ml超纯水或四蒸水中，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），盖紧瓶塞，4℃保存。 ⑦HEPES溶液（1mol/L） 称取23.83g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N，-2-ethanesu
杂交瘤技术基本程序与方法4
4）饲养细胞（Feeder cells）的制备 在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖，这种被加入的活细胞称为饲养细胞。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了，一般认为它们可能释放非种属特异性的生长
杂交瘤技术基本程序与方法8
（3）间接血凝试验 间接血凝试验又称被动血凝试验（PHA），是目前应用较广的检测方法之一。本试验是以包被可溶性抗原的红细胞作为指示系统，当被检抗体与包被在红细胞上的抗原产生特异性反应时，导致红细胞呈凝集现象。可见，该法具有灵敏、快速、容易操作和无需昂贵仪器等优点，而且经改用醛化红细胞以后，克服原来重
杂交瘤技术基本程序与方法11
（A）免疫扩散法 这种方法简便、准确，最常用。被检的McAb样品通常为杂交瘤细胞培养上清液，由于其中单抗的浓度较低，应先将其浓缩10-20倍左右再检测。小鼠腹水中的单抗浓度虽很高，但也含有小鼠本身的各类Ig，它们也会与相应抗血清发生反应，使鉴定结果出现混乱，即使将腹水稀释10-20倍后再检测也不能完
杂交瘤技术基本程序与方法10
（2）杂交瘤细胞的复苏 杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞或其他细胞在液氮中保存，若无意外情况时，可保存数年至数十年。复苏时融解细胞速度要快，使之迅速通过最易受损的 -5℃?0℃，以防细胞内形成冰晶引起细胞死亡。 通常情况下，冻存时细胞数量多，生长状态好的杂交瘤细胞系以及其他细胞的复苏可采用以下方法，这也是各个
杂交瘤技术基本程序与方法5
下面简要介绍几种常用的抗体检测方法 （1）免疫酶技术 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。 ①器材和试剂 a、包被缓冲液： 碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mo
杂交瘤技术基本程序与方法2
2、细胞融合 （1）主要试剂的配制 ①细胞培养基杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640或DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配制方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um），分装，4℃保存。 •不完全RPMI-1640培
固相萃取基本步骤
典型的固相萃取一般分为以下五个基本步骤：①根据检测量的大小以及待检物质的化学、物理性质，选择合适的吸附柱。②活化填料。有利于吸附剂和目标物质相互作用，提高回收率。一般采用甲醇来活化，另外甲醇还能起到除杂的作用。每一活化溶剂的用量为（1～2）m/100mg固定相。③进样。使样品流经吸附柱并被吸附。为了
固相杂交反应的特点、问题及解决办法
杂交反应的条件类似于传统的Southern或Northern杂交。具体的选择视研究目的而定，例如，进行多态性分析或杂交测序时，要求能够区分单个碱基的变异，所以需要较高的杂交严谨性；而用于表达谱检测的芯片为了提高检测的特异性、保证较高的灵敏度，需要较长的杂交时间，高的严谨性、高的样品浓度、较低的杂
固相萃取技术的基本步骤
SPE实质上是一种液相色谱分离，所用的吸附剂也与液相色谱固定相相同，只是在粒度上有所区别。SPE的一般做法是：利用选择性吸附与选择性洗脱的色谱分离原理，使液体样品通过吸附剂，保留其中的分析物，用适当强度溶剂洗除杂质，然后用少量溶剂洗脱分析物，达到快速分离净化与浓缩的目的。也有选择性吸附干扰杂质
固相萃取仪基本操作
固相萃取仪基本操作： 1.活化 萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml溶剂冲洗滤膜使SPE填料保持湿润，因为填料干燥会降低样品保留值，而各小柱的干燥程度不一，也会影响回收率的重现性。先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料，因为甲醇能润湿吸附剂表面，并渗透到非极性的硅胶键合相中，使硅胶更容易被
原位杂交的主要程序
1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/
原位杂交的主要程序
1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/
固相萃取装置基本操作步骤
1.固相萃取柱（1）SPE小柱关于固相萃取小柱：a.常见的固相萃取柱分为三部分：医用聚丙烯柱管，多孔聚丙烯筛板（20μm）和填料（多为40-60μm，80-100μm）b.常见规格：100mg/1ml,200mg/3ml,500mg/3ml,1g/6ml等。以100mg/1ml为例，其中100mg为
固相萃取正相固相萃取
正相固相萃取所用的吸附剂都是极性的.取决于目标化合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间相互作用，其中包括了氢键，π—π键相互作用，偶极-偶极相互作用和偶极-诱导偶极相互作用以及其他的极性-极性作用。
简述固相萃取的基本原理
固相萃取是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相萃取分离原理,即生物样品通过含有吸附剂的固定相,保留其中某一组分,再选用适当的溶剂洗去杂质,然后用少量洗脱液迅速洗脱,从而达到分离、净化与浓缩的目的。这要求待测物质与固定相之间的作用力要大于待测物质与基质之间的作用力。待测分子与固定相之间的作用力包括:偶
固相萃取的基本原理说明
固相萃取（Solid Phase Extraction,简称SPE）是从八十年代中期开始发展起来的一项样品前处理技术。由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来。主要用于样品的分离，纯化和富集。主要目的在于降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。固相萃取法的萃取剂是固体，其工作原理基于：水样中欲测组分与共存干
固相萃取的基本原理简介
固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE）是从20世纪80年代中期开始发展起来的一项样品前处理技术。由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来。主要用于样品的分离，纯化和富集。主要目的在于降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。 SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、
固相萃取反相固相萃取
反相固相萃取反相固相萃取所用的吸附剂和目标化合物通常是非极性的或极性较弱的，主要是靠非极性-非极性相互作用，是范德华力或色散力。
固相萃取固相萃取活化的目的
活化的目的是创造一个与样品溶剂相容的环境并去除柱内所有杂质。通常需要两种溶剂来完成上述任务，个溶剂（初溶剂）用于净化固定相，另一个溶剂（终溶剂）用于建立一个合适的固定相环境使样品分析物得到适当的保留。每一活化溶剂用量约为1-2ml/100mg固定相。终溶剂不应强于样品溶剂，若使用太强的溶剂，将降低回
固相萃取固相萃取仪的分类
固相萃取装置的分类1.正相固相萃取正相固相萃取所用的吸附剂都是极性的.取决于目标化合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间相互作用，其中包括了氢键，π—π键相互作用，偶极-偶极相互作用和偶极-诱导偶极相互作用以及其他的极性-极性作用。2.反相固相萃取反相固相萃取所用的吸附剂和目标化合物通常是非极
固相萃取装置及基本操作步骤
一、固相萃取概念及基本原理：固相萃取仪是从八十年代中期开始发展起来的一项样品前处理技术。由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来。固相萃取仪是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的（即样品的分离，净化和富
固相萃取固相萃取柱
固相萃取柱（英文, 简称SPE column，或Solid Phase extraction Cartridges，简称SPE cartridges）是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。主要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。固相萃取技术