杂交瘤技术基本程序与方法3
⑥7.5% NaHCO3溶液 称取分析纯NaHCO3 7.5g，溶于100ml超纯水或四蒸水中，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），盖紧瓶塞，4℃保存。 ⑦HEPES溶液（1mol/L） 称取23.83g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N，-2-ethanesulfonic acid，N-2-羟乙基哌嗪- N，-2-乙基磺酸，MW 238.3）溶于100ml超纯水或四蒸水中，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），4℃保存。 ⑧8-氮鸟嘌呤贮存液（100×） 称取200mg 8-氮鸟嘌呤（8-azaguanine，MW 152.1），加入4mol/L NaOH 1ml，待其溶解后，加入超纯水或四蒸水99ml，过滤除菌；分装小瓶，-20℃冻存。使用时按1%浓度加入到培养液中（即终浓度为20ug/ml）。 ⑨50% PEG&nbs......阅读全文
典型PCR操作程序与优化方法
一、 试剂(1)引物根据待扩增DNA不同，引物亦不同，引物的设计见http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm。(2)耐热DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温(93—100c)，不同耐热DNA聚合酶的特性详见本章第
典型PCR操作程序与优化方法
一、 试剂(1)引物根据待扩增DNA不同，引物亦不同，引物的设计见(2)耐热DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温(93—100c)，不同耐热DNA聚合酶的特性详见本章第4节。 Perkin—E1mer—cetus公司、N、F、Bio1ab、PharMacia公司、国内华美公司、复旦
常用电镜原位杂交技术的基本程序
原位杂交技术自创立以来，为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病理学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料，发挥了其他技术难以取代的作用。但不论是使用放射性核素探针，还是非放射性探针，大部分研究工作都还限于光镜水平。为了对检测的靶核酸进行更精确的亚细胞定位，以及能
平衡溶解度实验基本程序和技术要求
本文介绍了平衡溶解度的概念及WHO平衡溶解度项目，详细说明了平衡溶解度实验的基本程序和技术要求，分析研究了影响溶解度测定的因素，旨在为科研人员对溶解度实验方案的设计和实施提供参考，规范平衡溶解度实验在BCS分类和生物等效性豁免中的应用。 一、 溶解度的概念 根据国际纯粹与应用化学联合会(IU
免疫PCR[ImPCR,－Immuno－PCR]基本原理、试验程序和操作方法3
3)抗原抗体反应:用释释液1:8000稀释单克隆抗BSA抗体，每孔加50μl，室温(～22℃)下45min，洗板孔15次×10min，去除未结合的抗体分子。4)链亲合一蛋白A结合反应:每孔加入50μl用稀释液稀释的已与生物素-pUC19结合的链亲合素-蛋白A嵌合体，室温(～22℃)50min，使得嵌
竞争ELISA基本程序
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结
电泳的基本程序
该凝胶通常由琼脂糖制成,琼脂糖是一种多糖,在缓冲溶液中加热后会形成半固体,微孔凝胶。在一端,凝胶形成微小的凹痕,称为孔,研究人员将研究中的DNA样品与已知长度的参考样品(称为DNA阶梯)放置在一起。阶梯片段的长度已经通过另一种方法例如X射线晶体学来预定。当凝胶浸入导电溶液中并施加电压时,碎片开始迁移
杂交瘤细胞的保存与复苏
（一）保存 当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后，必须将一部分杂交瘤细胞保存，否则在连续传代的过程中，可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中，难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下： 1．材料 （1） 细胞：取对数生长期的细
关于杂交瘤技术的应用介绍
单克隆抗体不仅在生物学和免疫学基础研究中具有重要的价值，而且在实践中的应用范围亦极为广泛。在医学中，单克隆抗体已用于疾病的诊断，其优点是诊断准确，无交叉反应。例如，单克隆抗体诊断乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒，则很少发生假阴性的漏诊。单克隆抗体还可作为治疗疾病的药物载体。单克隆抗体对靶组织有专一亲
简述杂交瘤技术的产生背景
科勒和米尔斯廷于1975年发明了淋巴细胞杂交瘤技术，终于使制备纯一抗体的难题获得了解决。杂交瘤技术是由细胞融合技术发展而来。抗体是由免疫的B淋巴细胞分泌的球蛋白，各个淋巴细胞分泌的抗体各不相同。因而，要获得一种纯一的抗体只有从一个B淋巴细胞产生的细胞群制取。然而，B淋巴细胞在体外不能长期存活，分
鲍蕾：化学分析方法的验证技术与AOAC标准验证程序
2014年7月31日，第二届国际检验检测技术与装备博览会在北京国家会议中心隆重召开（以下简称检博会）。本届博览会以“高端技术，服务民生”为主题，以“质检、科技、国际”为特色，秉着“搭建国际平台，服务检测市场”的宗旨，为科技服务水平提升、检验检测行业和谐发展、科技成果交流与合作、检验检测仪器拓展市
基因扩增技术的具体方法和程序
试剂（1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。（2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。（3）10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH8.4,20℃)
基本无菌化技术3
PREPARATION OF THE ANIMALThe animals should be prepared in a n area separate from where surgery will be performed. Preparation is facilitated by first
双夹心ELISA基本程序
① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 2
涂片实验的基本程序
在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层，为避免因菌数过多聚成集团，不利观察个体形态，可在载玻片之一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层，若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的
基因检测的基本程序
基因检测是如何进行的呢？用专用采样棒从被测者的口腔黏膜上刮取脱落细胞，通过先进的仪器设备，科研人员就可以从这些脱落细胞中得到被测者的DNA样本，对这些样本进行DNA测序和SNP单核苷酸多态性检测，就会清楚的知道被测者的基因排序和其他人有哪些不同，经过与已经发现的诸多种类疾病的基因样本进行比对，就可以
鉴定细菌的基本程序
细菌鉴定的基本程序： ①细菌形态学检查； ②细菌生长特性； ③生物化学试验； ④抗原构造及血清学诊断； ⑤噬菌体及药物敏感试验； ⑥毒力测定及动物试验。
食品样品采样基本程序
采样基本程序采样基本程序可参考图。
杂交瘤细胞怎么筛选分离方法
第一次用加入氨基蝶呤的选择培养基选择出融合正确的杂交瘤细胞第二次用抗原抗体反应选择出可以产生抗体的杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞的制作方法
1） 瘤细胞培养（无特殊要求）骨髓瘤细胞呈悬浮或轻微附着形式生长， 如附着性生长的细胞多时， 用吸管轻轻吹打或轻轻 叩击培养容器即可分离下来。 通常要维持细胞于指数生长期 （细胞培养时间为 15~20 小时） ， 5 6 每 3~5 天取细胞 0.2~1ml 移入到 10ml 新培养液中， 其最大细
生物杂交瘤技术平台的优化策略
杂交瘤技术仍然是单克隆抗体发现的主要技术，尤其是在治疗性抗体药物治疗领域，相比噬菌体、酵母等非天然文库，具有成药性好、特异性强等特点。由于杂交瘤获得的单克隆抗体，系经过哺乳动物细胞自然进化筛选获得的序列，因此其通常不会遇到表达困难、产量低、非特异性结合等问题。 杂交瘤技术具有以下挑战：1. 对于免疫
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
1、直接ELISA试剂盒本法首要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，直接ELISA的操作程序如下：(1) 资料① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参阅血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要，因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。 在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，最好使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。 酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原
基因工程技术程序包括的基本内容
（1）外源目标基因的分离、克隆以及目标基因的结构与功能研究。这一部分的工作是整个基因工程的基础，因此又称为基因工程的上游部分。（2）适合转移、表达载体的构建或目标基因的表达调控结构重组。（3）外源基因的导入。（4）外源基因在宿主基因组上的整合、表达及检测与转基因生物的筛选。（5）外源基因表达产物的生
噬菌体抗体库技术的基本原理和程序
将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体，在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。基本原理和程序：构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程：1.从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴
MK3酶标仪定量程序编辑
1．打开仪器后部电源开关，等待自检。 2．先点“转换”键再点“输入”键进入“程序模块”通过按“↑”，“↓”键选择“曲线定量”。 3．点“输入”键确定，然后继续等待自检。 酶标板设置： 4．点“测量模式”键后按“↑”“↓”键选择试剂所要求的检测方法（如单波长检测/双波长检测）点“输入”键确
杂交瘤细胞系的产生与筛选
脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶