293细胞培养(cellculture)技术
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。3、293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。4、复苏 293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的 70%～80......阅读全文
293细胞培养(cell－culture)技术
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，
七个293T细胞培养的注意事项
培养293细胞应注意以下几个方面：1.用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养
如何养293、293T系列的细胞
将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，
人胚肾细胞293A细胞培养的基本技术（三）无菌操作
三、无菌操作 无菌操作是防止污染、决定培养是否成功的首要条件。由于体外培养细胞缺乏抗感染能力，在一切操作中要努力做到z大限度的无菌。工作前对手部需清洗消毒，进无菌操作室时戴K罩和穿工作服。不能用手直接触及已消毒器皿内部。打开培养瓶前或封闭瓶口前须火焰烧灼瓶口等。
Culturing－HEK－293－Cells
ReagentsMedium:500 ml Dulbecco’s Modified Eagle Medium (Gibco #41966-029)55 ml FCS (10 %)2.8 ml Gentamycin Solution (Sigma G-1272, 10 ml))TrypsinTryps
293fectin™－Transfection
实验概要293fectin™ is a proprietary, cationic lipid-based formulation for transfection of DNA into eukaryotic cells. 293fectin™ is optimized for transfe
Transient－transfection－into－293T－cells
PurposeTransient transfection into 293T cells is a convenient way to overexpress and obtain both cellular and extracellular (secreted or membrane) pro
293细胞的大规模培养
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤，心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞 293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293
293细胞的大规模培养
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善293细胞的
293T细胞的培养
包装细胞293T细胞的培养一、293T细胞的冻存1. 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。3. 倒去细胞上清液，加入D-Hank's液洗去残留的培养基
Generating－stable－cell－lines－in－HEK293
Generating stable cell lines in HEK293Prior to transfection, it is recommended that you linearize your pcDNA gene construct. Linearizing will decrease
Generating－stable－cell－lines－in－HEK293
Generating stable cell lines in HEK293Prior to transfection, it is recommended that you linearize your pcDNA gene construct. Linearizing will decrease
使用CO2恒温摇床解决人胚肾－293－(HEK293)－细胞结团问题
人胚肾 293 (HEK293) 细胞在重组蛋白表达中是最常见的宿主细胞。 这类细胞能够表达大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶联受体 (GPCR) ，是无法在最常见的生物制药生产宿主，如：中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中作表达。 HEK293 虽然是蛋白表达的极好宿主，然而 HEK293 细胞
CO2恒温摇床解决人胚肾－293－(HEK293)－细胞结团问题（一）
人胚肾 293 (HEK293) 细胞在重组蛋白表达中是最常见的宿主细胞。 这类细胞能够表达大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶联受体 (GPCR) ，是无法在最常见的生物制药生产宿主，如：中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中作表达。 HEK293 虽然是蛋白表达的极好宿主，然而 HEK293 细胞
CO2恒温摇床解决人胚肾－293－(HEK293)－细胞结团问题（二）
Lysate preparation and western blottingProtein lysates were created by harvesting the cells from confluent T-flasks or from suspension cultures at h
293长满六孔板的细胞量
6000万个。正常情况下，六孔板的每个孔长满约有100万个细胞，也就是293长满需要6000万个细胞量。293细胞是人肾上皮细胞系，有多种衍生株，比如HEK293，293T/17等，来源都是人胚胎肾细胞，其极少表达细胞外配体所需的内生受体。
Growth,－Maintenance－and－Transfection－of－Suspension－Adapted－293EBNA－cells
ProcedureI. INTRODUCTIONThe 293 EBNA cell line is established from primary embryonal human kidney cells transformed with sheared human adenovirus type
如何优化LipoD293转染试剂？
LipoD293DNA转染试剂是脂质体DNA转运工具的升级版本。我们实验室使用LipoD293DNA转染试剂成功转染了HepG2，LNCaP，CHO及HEK293细胞。接下来，我们乐意就如何提高转染效率，降低毒性等方面的小技巧同大家分享。1、LipoD293/DNA的比率。尽管合适的比率由细胞类型决
磷酸钙法转染HEK293T细胞
磷酸钙法 实验方法原理 常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可
磷酸钙法转染HEK293T细胞
磷酸钙法转染HEK293T细胞可应用于：（1）研究转染哺乳动物细胞的机理；（2）基因工程。实验方法原理常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子
细胞转染技巧及常见问题分析
1. Freestyle™ 293-F细胞的培养：在37℃，125rpm，8% CO2的摇床培养箱中培养；转染当天Freestyle™ 293-F细胞密度达到1.5-2.5×106个/ml时可以进行转染，但细胞存活率需>95%；可以使用生产的台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(C0011)进行细胞存活率
内蒙古呼和浩特新增阳性病例293例
10月5日，记者从呼和浩特新冠肺炎疫情防控新闻发布会上了解到，10月4日0到24时，呼和浩特市新增新冠肺炎确诊病例54例(含34例无症状感染者转确诊)、无症状感染者239例。 截至10月4日24时，呼和浩特市现有确诊病例319例、无症状感染者453例。本次疫情来势凶猛，快速、隐匿性传播特点明显，
磷酸钙法转染HEK293T细胞介绍
一.试剂配制无菌水ddw： 高温灭菌； 分装；2XHBS： 280mM NaCl10mM KCl1.5 mM Na2HPO412 mM glucose50 mM HEPESAdjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, t
293T细胞贴壁慢，抱团生长，该怎么办
1.细胞单用Trypsin消化，消化下来的细胞容易成团并且吹打后也不容易成为单细胞，并且消化时间要掌握好，很容易漂起来；2.用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution消化，感觉应该在用秒计的时间就消化下来，处理要迅速，我曾经弃Trypsin溶液后，就几乎看
腺病毒体外在293细胞中大量扩增的方法
在293 细胞中大量扩增腺病毒一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗
细胞培养实验——悬浮细胞培养
实验材料冻存 HeLa S3 细胞试剂、试剂盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶／EDTA仪器、耗材旋转瓶完全培养基-525 cm2 组织培养瓶C02 培养箱Sorvall H-6000A 转子100 ml 或 200 ml 通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖实验步骤1. 将含有冻存 HeLa S3 细胞的安
用于人诱导多能干细胞的逆转录病毒制备
实验概要用于人诱导多能干细胞的逆转录病毒制备主要试剂0.25%Trypsin、1 mg/mL PDL、Lipo LTX、Opti-MEM、Polybrene、293T培养液主要设备35 mm培养皿、4孔培养板，0.45 µm滤器，2mL、5mL、10mL、25mL、15mL、50mL离心管、倒置显微
动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。
细胞的真核转染及共聚焦显微镜观察
实验概要本实验介绍了细胞瞬时转染与传代、细胞的裂解及共聚焦显微镜观察。主要试剂1. 裂解缓冲液配方：1%NP-40，100mM NaCl，20mM TRis pH8.0，5mM EDTA，5mM MgCl2，10% Glycerol。2. 细胞培养液成分：RPMI1640基本培养液 10%胎牛血清
动物细胞培养——细胞培养介绍
实验方法原理目的细胞培养的评判性检查。应用检查常规维持的一致性；在复苏、传代、冻存前培养状况的评估；对新的或实验性情形反应的评估；确认明显的污染物。训练目标熟悉不同类型和不同密度的细胞培养的外观；数码或胶片相机的使用；灭菌物品和污染物间的区别，健康的和不健康的培养物间的区别；培养物生长阶段的评估。监