定量PCR仪引物长度设定
① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来,决定引物退火温度(Tm值)最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时:[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时:62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃ 另外有许多软件也可以对退火温度进行计算,其计算原理会各有不同,因此有时计算出的数值可能会有少量差距。为了优化PCR反应,使用确保退火温度不低于54℃的最短的引物可获得好的效率和特异性。 总的说来,每增加一个核苷酸引物特异性提高4倍,这样,大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关。由于熵的原因,引物越长,它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越小。 ② GC含量 一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%,一对引物......阅读全文
实时荧光定量pcr仪的PCR优势
样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值(限制点的循环数)。域值应设定在使指数期的扩增效率为最大,这样可以获得最准确,可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品,线性回归分析将产生一条标准曲线,可以用来计算未知样品的浓度。
PCR技术要素引物
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
PCR引物是什么
聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可
PCR引物设计技巧
自从1985年美国PE—Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PCP0 以来,PCR已经成为了分子生物学领域zui基本也是zui重要的技术手段之-[ I。然而能否找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使其有效地扩增模板DNA序列,无疑决定着PCR的成败。现在动
PCR引物设计原则
实验概要PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。本Protocol对于PCR引物设计中的一些基本原则给予阐述,希望能对广大研究人员的研究工作带来方便。实验步骤首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ,再次引物与引物之间避
PCR引物设计原则
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在
PCR引物设计原则
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可
PCR引物设计技巧
自从1985年美国PE—Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PCP0 以来,PCR已经成为了分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之-[ I。然而能否找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使其有效地扩增模板DNA序列,无疑决定着PCR的成败。现在动物遗传育
PCR引物设计原则
实验步骤首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ,再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物设计应注意如下要点:1.引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp。2.引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性
PCR引物设计原则
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那
PCR引物设计技巧
自从1985年美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PCP) 以来,PCR已经成为了分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之一 。然而能否找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使其有效地扩增模板DNA序列,无疑决定着PCR的成败。现在动物遗
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR:聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。PCR原理示意图:PCR仪的种类有:常规的普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类!1、普通PCR仪一般把一次PCR
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR:聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意图: 1589863475231958.jpg PCR仪的种类有:常规的普通PCR仪,梯度P
PCR反应程序如何设定
程序:94℃预变性 5~10min94℃变性30s~2min退火 30s~2min72℃延伸1~5min72℃延伸5~10min中间三步循环,具体时间依自己的模板和引物情况而定。
如何区分荧光定量PCR仪与普通PCR仪
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的功能
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的
如何区分荧光定量PCR仪与普通PCR仪
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如何区分荧光定量PCR仪与普通PCR仪
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的功
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别有哪些? 上海巴玖实业有限公司小编给您讲解如下 荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的功能不
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别 荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般
普通PCR梯度PCR-原位PCR-荧光定量PCR仪的区别
普通PCR仪: 一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪,也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如;(ABI 2720) 梯度PCR仪: 一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称
实时荧光定量pcr仪优势
样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值(限制点的循环数)。域值应设定在使指数期的扩增效率为最大,这样可以获得最准确,可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品,线性回归分析将产生一条标准曲线,可以用来计算未知样品的浓度。
荧光定量PCR分析仪
荧光定量PCR分析仪是一种用于生物学、预防医学与公共卫生学领域的分析仪器,于2006年11月15日启用。 技术指标 热循环系统:新型半导体,96个样品孔,可以升级到96孔快速热循环样品基座 光学系统:5色激发光源,5色荧光滤光片和超低温CCD成像系统(包括:FAM™/SYBR® Green
荧光定量PCR仪的应用
荧光定量PCR仪可用于医疗,新药研发,诊断检验试剂研发等领域。 在医疗方面,具体可用于病原体检测;产前诊断以防止各类遗传性疾病的发生;药物疗效考核,例如对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示:病毒量与某些药物的疗效关系;肿瘤基因检测。 在新药开发研究中,实时荧光定量PC
如何选择荧光定量PCR仪?
荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天,也许对你来说,最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,更要详细研究各种极富诱惑力的宣传
荧光定量PCR仪的应用
荧光定量PCR仪可用于医疗,新药研发,诊断检验试剂研发等领域。 在医疗方面,具体可用于病原体检测;产前诊断以防止各类遗传性疾病的发生;药物疗效考核,例如对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示:病毒量与某些药物的疗效关系;肿瘤基因检测。 在新药开发研究中,实时荧光定量PCR
定量PCR仪选择宝典2
MJ的Option系列是在MJ原来的常规PCR仪基础上改造,采用LED光源PMT光电倍增管荧光检测器。96个单色LED光源对应96孔板,但是单色LED激发波长范围较窄。Option是单道单个光电倍增管荧光检测器,升级的Option2是双PMT光电倍增管荧光检测器,PMT灵敏度高但一次只能扫描一个样品
定量PCR仪选择宝典3
此外动态检测范围达10个数量级,而无须将样品稀释;具有熔点曲线分析功能可以鉴别基因型、检测点突变、检测非特异性扩增,具多种检测模式如Taqman探针、荧光染料SYBR Green I检测、序列特异杂交探针等;探针及引物设计方便,杂交探针及引物设计的限制少,而且亦可方便地选用合适大小的扩增子(100~