体外哺乳类细胞基因突变(HGPRT)试验原理及注意事项1
In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test【试验原理】体外哺乳动物细胞基因突变试验是利用培养的哺乳动物细胞作指示生物的体外遗传毒理学试验,可用于检测有化学物质诱导的基因突变,适用的细胞系包括小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y),中国仓鼠肺细胞(V79),中国仓鼠卵巢细胞(CHO),人类淋巴母细胞(TK6)等。这些细胞系,最常用的遗传学终点是检测胸苷激酶(TK)图标,次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶(HPRT/HGPRT)图标,黄嘌呤转磷酸核糖激酶(XPRT)基因突变。TK、HPRT/HGPRT、XPRT突变试验可以检测不同的遗传事件谱。细胞在正常情况下,能产生HGPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶),在含有6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine,6-TG)的选择性培养液中,HGPRT催化产生核苷-5,-单磷酸(NMP),NMP掺入DNA中致细胞死亡。在致癌和(或)致突变物作用下,某些细胞X染......阅读全文
癌症相关的基因突变类型及临床解释YY1AP1
编码的基因产物可能与yy1蛋白相互作用,但其确切功能尚不清楚。选择性剪接导致编码不同亚型的多个转录变体。
紫外老化试验箱的原理及注意事项
紫外老化试验箱采用荧光紫外灯为光源,通过模拟自然阳光中的紫外辐射和冷凝,对材料进行加速耐候性试验,以获得材料耐候性的结果。可模拟自然气候中的紫外、雨淋、高温、高湿、凝露、黑暗等环境条件,通过重现这些条件,合并成一个循环,并让它自动执行完成循环次数。 紫外老化试验箱适用于非金属材料的耐阳光和
IL1的体外诱生实验
实验概要IL-1主要由活化的单核/巨噬细胞产生,具有广泛的生物学活性。IL-1包括IL-1α和IL-1β,两者分子量相近,且均能与IL-1R结合,故具有相似的生物学活性,常用的IL-1生物活性检测法对两者均适用。常用的IL-1生物活性检测法包括:小鼠胸腺细胞增殖法、L929细胞增殖法、D10G4.1
体外血栓形成试验的正常值及临床意义
正常值 长度12.02--22.48。 湿重40.58~63.2。 干重8.70~21.30。 临床意义 异常结果 血液中途粘附血栓管壁而相对静止不流动,提示可能患有冠心病、脑血栓、癌症转移、中风类型、心肌梗塞等疾病。 需要检查人群 有心绞痛,有肢体发麻,运动不灵、言语不清、眩晕
体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法!
在加入或不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试样品中。用中期分裂象阻断剂(如秋水仙素)处理,使细胞停止在中期分裂象,随后收获细胞、制片、染色、分析染色体畸变。通过检测受试样品诱发体外培养的哺乳动物细胞染色体畸变的能力,从而评价受试样品的致突变性及其强度。 一、材料⒈受试样品固体受
体外诊断中的核酸提取纯化的方法及原理
目前,新冠疫情在全球席卷开来,对于如何确认是否感染,使用体外诊断核酸检测方法仍是不可或缺的手段。体外诊断,是指在人体之外,通过对人体样本(血液、体液、组织等)进行检测而获取临床诊断信息,进而判断疾病或机体功能的产品和服务。而检测人体样本的关键步骤之一,即是样本中的核酸(DNA和RNA)纯化。核酸纯化
哺乳类无菌动物技术
实验概要本实验介绍了哺乳类无菌动物的制备流程。无菌动物在自然界并不存,必须用人为的方法养育而成。一般将临产前的健康动物用麻醉药品或拉断颈椎处死后,立即浸泡在37℃灭菌液中,送进无菌室(或无菌隔离器),按无菌手术进行剖腹,切除带胎子宫(子宫内首先应无菌),将其浸入消毒液里并立即输送到另一只隔离器中,切
THP1细胞体外培养时健康的标准或主要特点
通常通过提高MOI值来提高病毒的转染效率,必要时可以在培养基中加入polybrene(5-10 μg/ml)来提高病毒的感染效率。同时,目的细胞良好的生长状态是获得正常感染效率的保证。
体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏1
一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及
红细胞渗透脆性试验原理
红细胞渗透脆性试验原理:检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中,当水渗透其内部达一定程度时,红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况,通过红细胞表面积与容积的比值,反映其对低渗盐溶液的抵抗性。比值愈小,红细胞抵抗力愈小,渗透脆性增加。反之抵抗力增大。
自身红细胞凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体能与任何种血型的红细胞结合,但不引起凝集反应,这种抗体与另一特异性抗体(或抗原)连接成检测标本中的抗原(或抗体)。该反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞,因此反应中的标本为受检者的全血。自身红细胞凝集可用于HIV抗体、HBsAg的检测。
t细胞增殖试验的原理
又称T细胞转化试验。T细胞在体外经某种物质刺激,细胞代谢和形态相继变化,在24~48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加,产生一系列增殖的变化,如细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等,由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此,这种淋巴细胞增殖又叫淋巴细胞转化。据此可判断出淋巴细胞对有关刺激
红细胞渗透脆性试验原理
红细胞渗透脆性试验原理:检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中,当水渗透其内部达一定程度时,红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况,通过红细胞表面积与容积的比值,反映其对低渗盐溶液的抵抗性。比值愈小,红细胞抵抗力愈小,渗透脆性增加。反之抵抗力增大。
红细胞渗透脆性试验原理
检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中,当水渗透其内部达一定程度时,红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况,通过红细胞表面积与容积的比值,反映其对低渗盐溶液的抵抗性。比值愈小,红细胞抵抗力愈小,渗透脆性增加。反之抵抗力增大。
T细胞转化试验的临床意义及注意事项
临床意义 E花环值减低: ①见于免疫缺陷病(如Digeorge综合征,Wiskott-Aldrich综合征,Nezelof综合征)以及原发性细胞和体液免疫同时缺乏性疾病。上述这些病当用胸腺素等治疗后,EaRFC可明显增高。 ②某些恶性肿瘤、麻疹、麻疹脑炎、腮腺炎、带状疱疹、系统性红斑狼疮、
红细胞滚动试验的注意事项及检查过程
注意事项 不合宜人群:无。 检查前禁忌:检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天 的晚八时以后,应禁食。 检查时要求:抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。 检查过程 用末梢血主要有耳垂取血和指尖取血两个部位
T细胞转化试验的临床意义及注意事项
临床意义 E花环值减低: ①见于免疫缺陷病(如Digeorge综合征,Wiskott-Aldrich综合征,Nezelof综合征)以及原发性细胞和体液免疫同时缺乏性疾病。上述这些病当用胸腺素等治疗后,EaRFC可明显增高。 ②某些恶性肿瘤、麻疹、麻疹脑炎、腮腺炎、带状疱疹、系统性红斑狼疮、
红细胞滚动试验的临床意义及注意事项
临床意义 异常结果:滚动红细胞大于0.20(20%),球形红细胞异常增多,可见于遗传性球形红细胞增多症。红细胞膜缺陷性溶血性贫血也有可能出现该结果。 需要检查的人群:有贫血、黄疸和脾大症状的人群。 注意事项 不合宜人群:无。 检查前禁忌:检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒
原代细胞体外培养现状
原代细胞自然生长有两种方式,锚定依赖或非锚定依赖,这主要取决于它们在体内的组织来源:外周血(非锚定依赖)或固体组织器官(锚定依赖)。原代细胞一旦分离后,24-48h内需要进行贴壁或起始,开始培养。 广义地说,所有的哺乳动物细胞,无论其类型或来源,都需要在与人类生理条件(即37°C,5%CO2)
体外培养贴壁细胞特点
贴附并伸展,是多数体外培养细胞的基本生长特点。细胞贴壁的过程使形态发生很大变化,细胞形态改变是细胞内骨架(真核细胞中的蛋白纤维网架体系,由微管、微丝及中间纤维组成的体系)本身和细胞外基质共同作用的结果。培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样,当与底物贴附后,细胞将逐渐伸展而形成一定的形态,呈成纤维
体外培养细胞包括了什么
在这里对于体外培养细胞所有情况则包括了初代培养与各种细胞系的培养,则就是说当体外培养细胞生长达到一定的密度后,则都是需要进行传代处理的。而在这里我们所说的传代的频率与培养液体的性能性质,以及接种的细胞数量与增殖速度是相关的。这就是说接种的细胞数量越大则细胞基数就越大,而在相同的增殖速度下细胞数量增加
成骨细胞的体外培养
成骨细胞的来源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外组织。及人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。Robey(1985)采用胶原酶处理松质骨骨块以除去结缔组织和骨髓造血组织,再将处理过的骨块进行培养来获得更纯净的成骨细胞。将人胚胎颅骨中所获得的成纤维样细胞通过加入β-甘油磷酸钠诱导分化后培养3周
常见体外肝细胞损伤模型
1.四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h(贴壁良好)后,置培养皿于一密闭的塑料盒,内置四氯化碳0.4M容积,37度90min,造成肝细胞损伤的模型,后转入正常培养,进行下一步实验。(即熏蒸法)肝细胞培养12h后,吸弃上清,更换培养液并加入CCL4 8mM(事先用DMSO溶解,
体外培养细胞的形态特征
体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞,常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。1、成纤维型细胞在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时,皆可称之为成纤维细
淋巴细胞分离液的原理及使用注意事项
淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。可用于体外分离外周淋巴血细胞,也可以从其他来源中分离单核细胞,包括脐带血细胞和骨髓细胞,适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞,在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。 淋巴细胞分离液的原
肿瘤细胞体外传代培养及保种
实验材料 肿瘤细胞试剂、试剂盒 液氮EDTA保种液仪器、耗材 恒温水浴锅低温离心机方瓶CO2培养箱-70度冰箱弯管显微镜离心管滤膜实验步骤 一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3
肿瘤细胞体外传代培养及保种
肿瘤细胞体外传代培养及保种可应用于:(1)研究癌变机理;(2)抗癌药检测;(3)癌分子生物学研究。实验方法原理肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,是比较容易培养的细胞。癌细胞形态不规则,细胞界限清晰,对营养要求不高,在体外培养可无限制传代而不凋亡。体外培养的细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列细胞生物
视神经少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定
1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液(亚硒酸钠40μg·L-1,腐胺16.2 mg·L-1,转铁蛋白100 mg·L-1,胰岛素234U·L-1,甲状腺素0.4μg·L-1,黄体酮0.62 mg·L-1,谷氨酰胺3g·L-1)。DMEM/F12培养基、小牛血清购自Hy
关于盐酸文拉法辛片的毒理研究介绍
1、盐酸文拉法辛片的遗传毒性 文拉法辛及O-去甲基文拉法辛Ames试验、CHO/HGPRT哺乳动物细胞正向基因突变试验结果均为阴性。文拉法辛BALB/c-3T3小鼠细胞转化试验、CHO细胞姐妹染色体交换试验、大鼠微核试验结果均为阴性。O-去甲基文拉法辛CHO染色体畸变试验结果为阴性,大鼠微核试
揭示VAV1基因突变导致小鼠患上T细胞肿瘤
生命是成长和变化的精致编曲,通过相互制衡来微调复杂的内在和外在的相互作用。白细胞是有机体抵御疾病和入侵的免疫防御系统中不可或缺的一部分;不幸的是,这些机制可能会出错,导致功能失调的细胞数量不受控制地增加,从而形成肿瘤。如今,在一项新的研究中,来自日本筑波大学的研究人员在实验小鼠中揭示了一种名为VAV