一文了解nc膜生产条件

酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),是蛋白印迹广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。NC膜是生物学试验中重要的耗材之一。 硝酸纤维素NC膜的使用很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在去离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;硝酸纤维素 NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到硝酸纤维素NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途,因为经不起多次“折磨”。 选择硝纤NC膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议......阅读全文

蛋白质印迹与探测(Western-Blot)实验原理、方法与步骤(1)

【实验原理】Western Blot(蛋白质印迹或免疫印迹)技术,以蛋白质为检测对象,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将样品蛋白质分离,再转移到固相载体(PVDF尼龙膜或NC膜)上;固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活

吸热膜和反射膜的区别

吸热膜的吸热胶可以将热能(太阳光谱中的红外线)吸收,但是吸热胶吸收的热量很容易达到饱和,当吸热胶吸收的热量饱和以后,吸热胶会将吸收是热量重新以远红外的方式辐射到车内,使人感觉到更加燥热。而反射膜是将红外线反射到车外,不存在二次辐射的问题,从而在根本上解决隔热的问题。

LB膜多功能拉膜机

产品详细介绍LB膜多功能拉膜机JML04C2JML04 LB膜多功能拉膜机(又称膜天平 FILM BALNCE)是测定极性有机物(两亲分子)物理化学特性的精密测量仪器。它可以动态地研究各种有机极性物质(蛋白质、脂质、高聚物等)的单分子层表面膜,记录膜的分子表面积(A)与表面张力(r)或表面压力(π)

如何区别吸热膜和反射膜?

方法一:可以从测试方法上鉴别。由于反射型隔热膜本身不存在热量饱和的问题,所以反射型隔热膜无论用多大功率的碘钨灯(最少500W,最好是1000W)照射多长时间都不会影响隔热效果,而吸热膜则不能用大功率碘钨灯照射太长时间,所以很多的吸热型隔热膜的经销商的测试用碘钨灯功率不会很大,而且严格限制测试时间,因

如何区别吸热膜和反射膜?

方法一:可以从测试方法上鉴别。由于反射型隔热膜本身不存在热量饱和的问题,所以反射型隔热膜无论用多大功率的碘钨灯(最少500W,最好是1000W)照射多长时间都不会影响隔热效果,而吸热膜则不能用大功率碘钨灯照射太长时间,所以很多的吸热型隔热膜的经销商的测试用碘钨灯功率不会很大,而且严格限制测试时间,因

LB膜多功能拉膜机

LB膜多功能拉膜机是测定极性有机物(两亲分子)物理化学特性的精密测量仪器。可以动态地研究各种有极性有机物质(蛋白质,脂质,高聚物等)的单分子层表面膜,记录膜的分子表面积( A)与表面张力( r)或表面压力(π)之间的函数关系,著名的生物膜脂质双层结构假说以及肺内可能存在一种表面活性物质,都是采用膜天

吸热膜和反射膜的区别

吸热膜的吸热胶可以将热能(太阳光谱中的红外线)吸收,但是吸热胶吸收的热量很容易达到饱和,当吸热胶吸收的热量饱和以后,吸热胶会将吸收是热量重新以远红外的方式辐射到车内,使人感觉到更加燥热。而反射膜是将红外线反射到车外,不存在二次辐射的问题,从而在根本上解决隔热的问题。

有机膜与无机膜的比较

人们习惯根据膜元件的材质将人工合成的膜产品分为高分子聚合物膜——有机膜,和无机材料膜——无机膜。有机膜的材质非常广泛,有纤维素衍生物类、聚砜类、聚酰胺类、聚酰亚胺类、聚酯类聚稀烃类、含硅聚合物、含氟聚合物等等。无机膜分为多孔膜和致密膜两大类。致密膜主要用于气相分离,多孔膜的孔径从5微米到2纳米甚至2

不能很好的将大分子量蛋白转移到膜上,转移效率低怎...

不能很好的将大分子量蛋白转移到膜上,转移效率低怎么解决?可以考虑,转移缓冲液中加入20%甲醇,因为甲醇可以降低蛋白质洗脱效率,但可增加蛋白质和NC膜的结合能力,甲醇可以防止凝胶变形,甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间;转移缓冲液中加入终浓度0.1%SDS,也是为了增加转移效率;用优质的转移膜,或使用

Northern杂交分析操作步骤

【操作】1.RNA的提取见前。2.变性胶的制备:取琼脂糖0.2g,加入 DEPC H2O 12.4ml,加热熔化,冷却至 60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后,置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。3.样品制备 取总RNA4.5 ,加入5

关于Southern杂交的转膜的介绍

  即将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上。而此过程最重要的是保持各DNA片段的相对位置不变。DNA是沿与凝胶平面垂直的方向移出并转移到膜上,因此,凝胶中的DNA片段虽然在碱变性过程已经变性成单链并已断裂,转移后各个DNA片段在膜上的相对位置与在凝胶中的相对位置仍然一样,故而称为印迹(blot

钢丝绳磷化膜膜重与膜厚大致换算方法

锰系磷化涂层钢丝绳,磷化膜膜重在3—60克/平米之间,采购时在合同注明磷化膜种类及膜重,如锰系磷化膜,膜重15_30克/平米,较大磷化膜膜重有利于提高使用寿命,与生产商约定磷化膜膜重并写入合同比较稳妥。

核酸探针杂交检测技术介绍

一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交

膜天平

上海中晨数字技术设备有限公司出品的JML04C系列多功能LB膜分析仪(拉膜机/膜天平),是测定极性有机物(两亲分子)物理化学特性的精密测量仪器。可以动态地研究各种有极性有机物质(蛋白质,脂质,高聚物等)的单分子层表面膜,记录膜的分子表面积( A)与表面张力( r)或表面压力(π)之间的函数关系,著名

免疫印迹技术的检查过程

  (1) 蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。  (2) 电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。  (3) 转移:(半干式转移)  ① 电泳结束后

免疫印迹(Western-blotting)实验原理、试剂和操作步骤

(一)原理Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素(NC)膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后,将蛋白转移至膜上,再与特异性抗体孵育,洗去游离的抗体,然后和酶标记的二抗孵育,再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好,亲合力高,Western blot检测的灵敏度较高,尤其是采用

免疫印迹法试验操作步骤

一蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。三转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平

免疫印迹法的操作步骤有哪些

  一蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000r离心15min。取上清液作为样品。  二电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。  三转移:(半干式转移)  1、电泳结束后将胶条割至合适大小

免疫印迹法实验的操作步骤

一蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。三转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平

DNA(基因)检测-Southern-Blot

DNA(基因)检测-Southern BlotDNA吸印转移1.室温下将电泳后的琼脂糖凝胶浸入500ml溶液A中,摇动30分钟后换500ml新鲜溶液A再摇30分钟,使DNA双链碱变性。溶液A:5M NaCl     300.0ml10M NaOH    50.0mlH2O         650.0

多功能LB膜拉膜机介绍

多功能LB膜拉膜机(拉膜机/膜天平),是测定极性有机物(两亲分子)物理化学特性的精密测量仪器。可以动态地研究各种有极性有机物质(蛋白质,脂质,高聚物等)的单分子层表面膜,记录膜的分子表面积( A)与表面张力( r)或表面压力(π)之间的函数关系。多功能LB膜拉膜机主要功能和特点1、操作过程和数据采集

NC多功能氮吹仪基于加热器吹扫组合而成的实验设备

NC多功能氮吹仪基于加热器吹扫组合而成的实验设备  NC多功能氮吹仪是基于加热器、吹扫组合而成的实验设备。可用于批量样品的浓缩制备,代替常用的旋转蒸发仪对大批量的样品进行浓缩,使样品制备时间大为缩短。NC多功能氮吹仪通常采用惰性气体对加热样品进行吹扫,使待处理样品迅速浓缩,快速分离、纯化从而达到样品

Southern杂交分析原理和操作

【原理】Southern杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。一.基因组DNA的限制

免疫印迹(Western-Blot)不同蛋白的转膜条件

蛋白来源:RAW264.7 总蛋白蛋白名称:一些转录因子蛋白分子量:40~70 KDWB 用膜类型、孔径:0.45 NC转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流 400 mA转膜时间:60~90 minPS. 其实吧,以我的经验来看,除非目的蛋白特别小,或者特别大,不然转膜时间真的不是那么重要, 曾经因为

Western-bloting-综述

摘要:本文主要是针对Western bloting的原理及操作进行了简单的阐述,Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或底片

免疫印迹技术的检查过程及相关疾病

  检查过程  (1) 蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。  (2) 电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。  (3) 转移:(半干式转移)  ①

蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤

实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western  Blot(蛋白质印迹或免疫印迹)技术,以蛋白质为检测对象,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将样品蛋白质分离,再转移到固相载体(PVDF尼龙膜或N

体外诊断之侧向层析技术

  侧向层析技术是20世纪90年代在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术,具有快速、简便、单人份检测、经济的优点,现已广泛应用于医学检测、食品质量监测、环境监测、农业和畜牧业、出入境检验检疫、法医定案等领域。  侧向层析技术以大孔径的微孔滤膜(NC膜、硝

蛋白质印迹(westernblot)

实验原理印迹法一般由凝胶电泳;样品的印迹和固定化;各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。生物大分子凝胶电泳分离 蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳,使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。2.分子区带的转移和固定 第二步就是反凝胶电泳已分

电泳做Western免疫印迹操作步骤

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。1、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶