地高辛配基随机标记DNA探针试剂盒成份
1．无标记对照DNA1 此管内有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分别用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化，它们的混合比例为2：3：3，共有16个Pbr328片段，这些片段的大小分别为：4907，2176，1766，1230，1033，653，517，453，298，234，234，220和154×2bp。 2．无标记对照DNA2 此管内有20μl pBR328 DNA200μg/ml，已用EcoRⅠ线性化。 3．DNA稀释缓冲液 有两管，每管1ml[成分为：Tris-HCl(10mmol/L),EDTA(1mmol/L),pH8.0(20℃)]内含鲑鱼精DNA（50μg/ml）。 4．标记对照DNA 此管内有50μl线性化pBR328DNA，按标记方法已标记有地高辛配基dUTP,含20μg模板DNA，每毫升含5μg合成的标记DNA。 5．六聚核苷......阅读全文
地高辛配基随机标记DNA探针试剂盒成份
1．无标记对照DNA1 此管内有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分别用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化，它们的混合比例为2：3：3，共有16个Pbr328片段，这些片段的大小分别为：4907，2176，1766，1230，1033，653，517，453，
地高辛配基随机标记DNA探针试剂盒成份
1．无标记对照DNA1 此管内有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分别用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化，它们的混合比例为2：3：3，共有16个Pbr328片段，这些片段的大小分别为：4907，2176，1766，1230，1033，653，517，453，
地高辛配基随机标记DNA探针
1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3μg线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。 （1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。 （2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂：
非放射性地高辛标记DNA探针法
实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。 实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连
随机引物法介绍DNA探针的标记方法
变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段，作为引物，当后者与单链DNA多个部位互补结合后，按碱基互补原则不断在其3'-OH端添加同位素标记的单核苷酸，这样也可以获得放射性比活性很高的DNA探针。
地高辛对探针的标记
实验概要本实验拟通过随机引物及PCR方法，将DNA探针片段用DIG标记，进一步掌握探针的标记技术。实验原理带有地高辛标记的dUTP（图1）通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛，进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应，使探针上带有AP等分钟，进一步能催
随机引物法标记探针
实验概要本实验探针标记采用TAKARA公司的随机引物标记试剂盒Ver.2。实验步骤1．于1.5ml离心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。2．充分混匀，98°C 3分钟。3．离心1秒钟，将离心管盖上的汽化水甩下。4．加入2.5μl dNTPs(各2.5m
随机引物合成法双链DNA探针标记法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活
随机引物法标记－DNA
实验方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互补物将以同样
随机引物法标记－DNA
实验方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互补物将以同样的频率掺入产物。实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Kl
随机引物法标记－DNA
利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互补物将以同样的频率掺入产物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法
地高辛标记cRNA探针实验方法
1．组织前处理在组织制片中以冷冻切片（厚10～30μm）最佳。切片贴在预先清洁，高温处理并涂以粘附剂载玻片上，先在37℃预干燥4h，然后置于37℃烤箱中过夜。经过上述处理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存数月之久，有报告可保存数年之久的。但仍以新鲜制片为好。如为石蜡包埋切片，应脱
地高辛标记探针的化学发光检测实验
地高辛系统是过提供的另一种非同位素标记方法，其检测方法是通过偶联上一种或数种荧光染料或酶的抗地高辛抗体，或用间接免疫荧光来测定。实验材料DNA试剂、试剂盒抗体实验步骤1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约
地高辛标记探针的化学发光检测实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 抗体实验步骤 1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约20 min。
地高辛标记探针的化学发光检测实验
化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
杂交信号的放大实验——地高辛标记探针的信号
实验材料杂交信号试剂、试剂盒地高辛SSCBSA荧光素仪器、耗材加湿盒水浴锅培养箱实验步骤1. 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片（见“荧光原位杂交实验”基本方案步骤1~6）。 2. 加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜，
双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切
DNA探针的标记实验
探针标记法 实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
DNA探针的标记实验
实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。
末端标记DNA探针技术
现以Klenow片段标记3'末端为例说明末端标记的方法。1、材料：待标记的双链含凹缺3'末端的DNA。2、设备：高速台式离心机，水浴锅等。3、试剂：(1)3种不含标记的dNTP各为200mmol/L。(2)合适的限制酶。(3)[α-32P] dNTP:3000Ci/mmol, 10m
常用DAN探针制备的方法介绍随机引物标记
随机引物标记(random primer labeling)是利用单链 DNA 与六核苷酸(hexamer)退火结合,以六核苷酸为引物,加入4种 dNTP,其中1种标有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成带有标记的互补 DNA 链,标记率高而且不受琼脂糖影响。该法不适于标记 RNA。Fei
PCR法DNA探针生物素标记试剂盒产品说明
PCR法DNA探针生物素标记试剂盒产品特点：一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验
DNA探针标记常用试剂的配制
（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。 （2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl,pH7.4； 11mmol/L
双链DNA探针标记法介绍
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记，只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针，因为携带的标记分子较少，所以标记比活性不高。
非同位素探针进行原位杂交实验地高辛标记探针信号放大
试剂、试剂盒10μg ml 羊抗地筒辛抗体 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (组分V)地高辛信号放大溶液：3. 5〜7. 0 ug ml荧光素标记的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (组分 V)仪器、耗材Parafilm 膜玻片实验步骤1) 用
总cDNA探针的同位素随机标记及点杂交
实验概要本实验方法介绍了总cDNA探针的同位素随机标记及点膜杂交技术。实验步骤1. 总cDNA探针的同位素随机标记参照Promega公司试剂盒说明书提供的实验流程进行。 1) 将除Klenow大片段外的所有药品，在冰上溶化； 2) 取25ng总cDNA作为模板，100℃，l0min，立即冰上
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直