结核杆菌PCR鉴定

从痰等临床标本直接诊断结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌也称直接扩增试验(Direct Amplification Test,DAT),主要是利用PCR技术特异性地扩增核酸片断达到鉴定结核分枝杆菌的目的。RocheLight Cycler 荧光定量PCR仪,从标本处理、核酸扩增到产物鉴定都有配套的试剂和设备,基本是自动化过程,检测质量容易控制。扩增靶基因可以是DNA,也可以是RNA,商用试剂一般多用结核分枝杆菌的特异性片断,如16SRNA、插入序列IS6110、编码38KD磷酸结合蛋白的PAB基因等。 核酸扩增技术可在数小时内完成,可以鉴别结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,同时具有很高的敏感性,可以少到检出标本中的10个结核分枝杆菌,与涂片抗酸染色相比,具有很大的优势。在痰涂片抗酸染色阳性的标本,DAT的敏感性为95%,特异性为98%;在涂片阴性而培养阳性的痰标本,其敏感性为48~53%,特异性为9......阅读全文

结核杆菌PCR鉴定

   从痰等临床标本直接诊断结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌也称直接扩增试验(Direct Amplification Test,DAT),主要是利用PCR技术特异性地扩增核酸片断达到鉴定结核分枝杆菌的目的。RocheLight Cycler 荧光定量PCR仪,从标本处理、核酸扩增到产物鉴定

PCR技术应用十二:结核杆菌诊断

  结核杆菌可以导致全身性疾病,特别是在发展中国家,其发病率较高,危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大,对抗痨药物的耐药性增加,从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断,但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接种虽特异性较高,但因时间较长

PCR产物的电泳鉴定

一、准备工作1、实验器具与材料:(1)移液枪:10ul(2)吸头:20ul(3)吸头台:放置200ul和20ul的吸头一个(4)三角烧瓶:50ml一个(5)琼脂糖2、实验器具的处理与准备(1) 塑料制品:(包括吸头等)送至高压3次,试验前将枪头放入吸头台。(2)电泳板及电泳槽:用自来水冲洗干净备用3

PCR产物的电泳鉴定

一、准备工作1、实验器具与材料:(1)移液枪:10ul(2)吸头:20ul(3)吸头台:放置200ul和20ul的吸头一个(4)三角烧瓶:50ml一个(5)琼脂糖2、实验器具的处理与准备(1) 塑料制品:(包括吸头等)送至高压3次,试验前将枪头放入吸头台。(2)电泳板及电泳槽:用自来水冲洗干净备用3

临床化学检查方法介绍结核杆菌基因检测(PCR)介绍

结核杆菌基因检测(PCR)介绍:  结核分枝杆菌在体外培养周期长,阳性检出率不高,因此对临床的早期诊断和确定药物治疗都带来一定的困难,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分枝杆菌,能大大提供结核分枝杆菌的检出率和检出特异性,有利于临床即使治疗。标本采自患者的痰、支气管分泌物、脑脊液、心包积液、胸腔

DNA的化学检测项目介绍结核杆菌基因检测(PCR)

结核杆菌基因检测(PCR)介绍:  结核分枝杆菌在体外培养周期长,阳性检出率不高,因此对临床的早期诊断和确定药物治疗都带来一定的困难,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分枝杆菌,能大大提供结核分枝杆菌的检出率和检出特异性,有利于临床即使治疗。标本采自患者的痰、支气管分泌物、脑脊液、心包积液、胸腔

PCR扩增产物的鉴定

实验概要PCR扩增产物可以通过酶切分析、凝胶电泳(琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳、毛细管电泳等)、Southern杂交、克隆、测序等方法分析,电泳前还可以应用紫外分光光度计定量DNA。当采用凝胶电泳时也有溴化乙锭显色、银染法、荧光显色等不同的显色方法。本实验室采用的是非变性连续缓冲系统聚丙烯酰胺凝胶垂直

PCR扩增产物的鉴定

实验原理生物大分子如蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中.它们的净电荷取决于介质的H 浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移.迁移的方向取决于它们带电的符号.这种迁移现象即谓电泳。迁移的方式目前可以根据分子尺寸大小、分子所带的电荷或分子的生物学与化学特性分为三类

PCR扩增产物的鉴定

PCR扩增产物的鉴定实验原理生物大分子如蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中.它们的净电荷取决于介质的H 浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移.迁移的方向取决于它们带电的符号.这种迁移现象即谓电泳。迁移的方式目前可以根据分子尺寸大小、分子所带的电荷或分子的生物学与化学

菌落PCR,快速鉴定重组质粒

质粒快速鉴定    试剂: Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl, pH8.0                    0.33ml/1.0M        5mM EDTA                                0.1ml/0.5M     

PCR扩增产物的鉴定

实验原理生物大分子如蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中.它们的净电荷取决于介质的H 浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移.迁移的方向取决于它们带电的符号.这种迁移现象即谓电泳。迁移的方式目前可以根据分子尺寸大小、分子所带的电荷或分子的生物学与化学特性分为三类。如

PCR扩增产物鉴定与纯化

实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DNA制

PCR扩增产物鉴定与纯化

  实验原理  琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)  本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DN

PCR扩增产物鉴定与纯化

实验概要通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,并对获得的产物进行割胶纯化回收,为接下来的DNA重组和转化实验提供外源DNA片段。实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验) 本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purifi

PCR扩增产物鉴定与纯化

  实验原理  琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验)  本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统,结合DN

结核杆菌简介

  结核分枝杆菌(M.tuberculosis),俗称结核杆菌(tubercle bacillus),是引起结核病的病原体。1882年由德国细菌学家郭霍(Robert Koch,1843-1910)发现并证明为人类结核病的病原菌,该菌可侵犯全身各器官,但以引起肺结核最多见。结核病是一种古老的疾病,全

结核杆菌介绍

结核分枝杆菌,俗称结核杆菌,是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官,但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。据WHO报道,每年约有800万新病例发生,至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万,居各种疾病死亡原因之首,建国后人民生活水平提高,卫生状态改善,特别是开展

结核杆菌介绍

  结核杆菌(Mycobecterium Tuberculosis)引起结核病。对人类致病的有人型结核杆菌和牛型结核杆菌,非典型分枝杆菌也可引起类似结核样病变,但少见。  一、生物学性状  (一)形态染色  结核杆菌细长略弯曲,端极钝园,大小约1~4×0.4um ,呈单个或分枝状排列,无荚膜、无

全基因组测序鉴定非洲结核杆菌病原体早期感染情况

  最近,发表在《PNAS》杂志上的一项研究检查了南非地区爆发的广泛耐药结核病流行株LAM4 / KZN的进化和流行病学历史。  该菌株首次报道于2005年在夸祖鲁-纳塔尔省的图格拉渡轮,此后已在全省广泛传播。这项新研究确定了促进XDR-TB菌株疫情爆发的关键宿主,病原体和环境因素,以及可以采取的早

PNAS:全基因组测序鉴定非洲结核杆菌病原体早期感染

  最近,发表在PNAS的一项研究检查了南非地区爆发的广泛耐药结核病流行株LAM4 / KZN的进化和流行病学历史。  该菌株首次报道于2005年在夸祖鲁-纳塔尔省的图格拉渡轮,此后已在全省广泛传播。这项新研究确定了促进XDR-TB菌株疫情爆发的关键宿主,病原体和环境因素,以及可以采取的早期发现和遏

数字PCR在基因型鉴定的应用

PCR也可以用于检测一个生物中是否存在某特定DNA序列,这被称为基因型鉴定。例如,基因型鉴定可通过发现样品中是否存在某种群特异性序列来判断样本的真实性。基因型鉴定还可用于法医分析判断在现场发现的DNA样品是否和嫌疑人的吻合,令凶手无处遁形。

结核杆菌的检测

结核杆菌与麻风杆菌是分枝杆菌属中的主要病原菌。 结核杆菌菌体细长略带弯曲,有分枝生长趋势。 菌体含脂量高,与其抗酸特性、抵抗力特性、致病性与免疫  性等都有密切关系。 该菌营养要求高,生长缓慢,形成“菜花状”菌落。一、结核杆菌检验程序 结核病人病灶中查到结核杆菌,是病原学诊断的重要

结核杆菌标本留取

当你怀疑有肺结核就诊时,首先要进行胸部透视,医生若发现你的肺内有异常阴影,就会给你作痰液检查.查痰,就是用显微镜查找结核 杆菌,痰内一旦发现结核菌,肺结核的诊断便可确定,查痰是诊断肺结核,发现传染源最准确的方法.另外,病人在治疗过在中医生也会 要求你定期查痰,用以考核和评价治疗效果.痰菌阳性

什么是结核杆菌?

  结核分枝杆菌(M. tuberculosis)简称为结核杆菌(tubercle bacilli),是人类结核病的病原体。是专性需氧的一类细菌,抗酸染色阳性。无鞭毛,有菌毛,有微荚膜但不形成芽孢,其细菌壁既没有革兰阳性菌的磷壁酸,也没有革兰阴性菌的脂多糖。德国细菌学家郭霍(Robert Koch,

数字PCR在甲基化含量鉴定的应用

作为表观遗传学研究中重要的一个研究方向——甲基化程度分析,现阶段有不同的方法或技术来进行研究:如传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序法、抗体检测法、定量PCR检测法等受限于方法学的问题,不能获得甲基化程度的精确定量,而数字PCR系统通过对样品的微液滴处理及目标分子的绝对拷贝数定量,为甲基化程度的精确定量

cDNA文库组标准流程七:快速鉴定、菌落PCR

1.质粒快速鉴定  试剂:Protoplasting buffer:30mM Tris-HCl, pH8.0                   0.33ml/1.0M      5mM EDTA                               0.1ml/0.5M      50mM

骨碎补PCR鉴定试剂盒特点及样品制备

聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合...”骨碎

中药快速PCR鉴定方法被纳入广东药检平台

  由博奥晶典联合中国中医科学院中药资源中心开发的蛇类PCR快检试剂盒被纳入广东省药品检验所平台,标志着中药分子快速检测方法的应用取得阶段性成果。中药快速PCR鉴定方法是中国中医科学院资源中心多年研究成果,并被即将出版的《中药材快速鉴别手册》第二册收载。  博奥晶典与中国中医科学院中药资源中心在中药

Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法

模板的处理:1.平板上的菌落长到肉眼可见时(约12小时);2.将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好,并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物,或者一条使用载体上的引物,一条使用基因的特异性引物(这样做可以鉴定非定向克隆的方向);3.用半根灭菌的牙签(节约,而且好用)挑取菌落,在PCR

中药快速PCR鉴定方法被纳入广东药检平台

  由博奥晶典联合中国中医科学院中药资源中心开发的蛇类PCR快检试剂盒被纳入广东省药品检验所平台,标志着中药分子快速检测方法的应用取得阶段性成果。中药快速PCR鉴定方法是中国中医科学院资源中心多年研究成果,并被即将出版的《中药材快速鉴别手册》第二册收载。  博奥晶典与中国中医科学院中药资源中心在中药