Southern杂交技术
SOUTHERN BLOT1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a ruler adjacent to the molecular weight markers as a reference.3. Alkali transfer buffer = 0.5M NaOH (20g/lt), 1.5M NaCl (87.66 g/lt). Prepare 1 litre for one gel and another 750ml for each additional gel. BEWARE This buffer is very dangerous,......阅读全文
Southern杂交技术
SOUTHERN BLOT1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a r
Southern－杂交技术1
Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位，可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA在原位变性，并从凝胶转移至固相膜
Southern－杂交技术2
三：操作(一)转膜1电泳2切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分3脱嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤）4变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3
分子杂交技术Southern杂交的相关介绍
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3)预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。
分子杂交技术Southern杂交的操作步骤
(1) 约50μl体积中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在琼脂糖凝胶中电泳12-24小时(包括DNA分子量标准物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙锭,将凝胶放置其中染色30分钟, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液处理凝胶,并轻微摇动: 500ml 0.2m
Southern杂交
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性
Southern杂交
实验概要本实验介绍了Southern杂交的基本流程。主要试剂细菌基因组DNA抽提试剂盒，限制性内切酶，变性溶液，中和溶液，10 X SSC，杂交缓冲液(200mM磷酸钠缓冲液，PH7.2，1 mM EDTA，50%甲酞胺，1% BSA，7% SDS)，随机引物标记试剂盒，洗脱缓冲液(2 X SSC，
Southern－杂交鉴定
1） 取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A． 将凝胶浸没入30mL 0.25mol
Southern杂交步骤
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:(1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。(2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。(4) 让探针与
Southern杂交技术的方法和步骤
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:(1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。(2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。(4) 让探针与
Southern－blot杂交鉴定
1）取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A.将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L H
Southern杂交实验1
[实验原理] Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。
Southern杂交实验2
③转移按凝胶的大小剪裁NC膜或尼龙膜并剪去一角作为标记，水浸湿后，浸入转移液中5min。剪一张比膜稍宽的长条Whatman 3mm滤纸作为盐桥，再按凝胶的尺寸剪3-5张滤纸和大量的纸巾备用。按下图所示进行转移。（转移过程一般需要8-24hr，每隔数hr换掉已经湿掉的纸巾。转移液用20×SSC。注
Southern印迹杂交
实验原理核酸分子杂交技术是分子生物学领域中zui常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为
southern杂交与northern杂交的区别
研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上。
southern杂交与northern杂交的区别
研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上。
southern杂交分析的作用
由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序
分子杂交——Southern基因检测
实验概要将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技
小麦Southern杂交分析方法
预杂交液的制备：根据要杂交的膜的数量配制预杂交液，每25 ml预杂交液（1~2张膜）的成分组成如下： H2O 15 ml 20×SSPE 6
Southern杂交的结果分析
在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题：转膜必需充分，要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深，洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质，必需注意环保及安全。 （1）出现斑点 解决方法：①加热至合适的温度；离心或过滤除去颗粒。②
关于Southern杂交的预杂交的介绍
将固定于膜上的DNA片段与探针进行杂交之前，必须先进行一个预杂交的过程。因为能结合DNA片段的膜同样能够结合探针DNA，在进行杂交前，必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭，这就是预杂交的目的。预杂交是将转印后的滤膜置于一个浸泡在水浴摇床的封闭塑料袋中进行，袋中装有预杂交液，使预杂交液不断在
Southern印迹及基因组DNA杂交技术实验
实验材料 基因组 DNA试剂、试剂盒 限制性缓冲液仪器、耗材 琼脂糖凝胶实验步骤 1. 7~20 μg 基因组 DNA 稀释到 500 μl 合适的限制性缓冲液中。4℃ 过夜。2. 每管加 10~20 单位限制性酶。孵育 4~6 小时。10 μl 消化液在小琼脂糖凝胶上电泳检测消化的程度。如果需要，
Southern印迹及基因组DNA杂交技术实验
放射性标记的探针与固定化核酸进行杂交试剂、试剂盒预杂交液SSCSDS仪器、耗材硝酸纤维素滤膜实验步骤1. 准备适合即将进行的工作的杂交溶液。每平方厘米硝酸纤维素滤膜或尼龙膜大约需要 0.2 ml 预杂交液。预杂交液：用于检测低丰度序列：或者6x SSC ( 或 6x SSPE)5 x Denhard
Southern印迹及基因组DNA杂交技术实验
Southern 印迹 放射性标记的探针与固定化核酸进行杂交 实验方法原理 硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Southern杂交一般操作
一 酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入：25 μl DNA样品（约10μg），3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖, 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖
Southern－杂交一般操作
一 基因组酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入：25 μl DNA样品(约10μg)，3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖, 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的