双链DNA探针切口平移法
当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,用放射性核苷酸代替原先无放射性的核苷酸，将放射性同位素掺入到合成新链中。最合适的切口平移片段一般为50-500个核苷酸。切口平移反应受几种因素的影响: (a) 产物的比活性取决于[α-32 P]dNTP的比活性和模板中核苷酸被置换的程度。(b) DNA酶Ⅰ的用量和E.coli DNA聚合酶的质量会影响产物片段的大小。(c) DNA模板中的抑制物如琼脂糖会抑制酶的活性, 故应使用仔细纯化后的DNA。 材料： 待标记的DNA。 设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。 试剂： (1......阅读全文
DNA测序——双脱氧链末端终止法
实验方法原理DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3'-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3'-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3'-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，
分子杂交技术
分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总R
分子生物学常用实验技术（十二）
第九章分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总D
单链DNA探针技术简介
用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种:(1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2)
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA
双链DNA的结构特点
中文名称双链DNA英文名称double-stranded DNA;dsDNA定 义由两条DNA单链通过碱基互补作用而构成的DNA分子。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
DNA双链末端的概念
中文名称平端英文名称blunt end定 义DNA双链末端平齐而无突出单链。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
双链互补DNA的定义
中文名称双链互补DNA英文名称double-strand cDNA;dscDNA定 义以双链互补DNA为模板合成的双链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇双链DNA
中文名称：双链DNA英文名称：double-stranded DNA;dsDNA定 义：由两条DNA单链通过碱基互补作用而构成的DNA分子。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
双链DNA的结构特点
中文名称双链DNA英文名称double-stranded DNA;dsDNA定 义由两条DNA单链通过碱基互补作用而构成的DNA分子。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
分子杂交技术－－1
互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方
DNA探针检测法的原理
原理：碱基互补配对。。探针：DNA单链－化学连接的标记基团探针和目标DNA（经过加热，分成单链）混合，探针结合的目标DNA就会被标记
解旋酶打开DNA双链过程破解
美国温安洛研究所近日发布公告称，该所科学家和洛克菲勒大学合作，成功破解CMG解旋酶参与真核生物内DNA（脱氧核糖核酸）复制的结构过程，并首次观察到其与DNA间的相互作用。这项发表在美国《国家科学院学报》上的最新研究，为生命繁殖之谜提供了全新注解。 温安洛研究所教授李慧琳（音译）从酵母生物体内提
细胞化学词汇DNA双链体
中文名称：DNA双链体英文名称：DNA duplex定 义：两条以3′，5′-磷酸二酯键相连而成的反向多核苷酸链通过沿着其轴向的互补碱基对的氢键交联在一起形成的双链DNA，通常形成双螺旋的结构。可以共价闭合成环状分子，形成超螺旋DNA。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学
解旋酶打开DNA双链过程破解
美国温安洛研究所近日发布公告称，该所科学家和洛克菲勒大学合作，成功破解CMG解旋酶参与真核生物内DNA（脱氧核糖核酸）复制的结构过程，并首次观察到其与DNA间的相互作用。这项发表在美国《国家科学院学报》上的最新研究，为生命繁殖之谜提供了全新注解。 温安洛研究所教授李慧琳（音译）从酵母生物体内提
细胞化学词汇双链互补DNA
中文名称：双链互补DNA英文名称：double-strand cDNA;dscDNA定 义：以双链互补DNA为模板合成的双链DNA。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
抗双链DNA抗体(aniDNA)的简介
抗DNA抗体包括抗双链DNA抗体、抗单链DNA抗体和抗zDNA抗体。 检验中一般是指与双链DNA和单链DNA都反应的抗双链DNA抗体。 抗双链DNA抗体阳性是系统性红斑狼疮的标志，阳性率达90%以上，有较高的特异性，因而抗双链DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断和治疗监控极重要。抗双链DNA抗体在其
什么是抗双链DNA抗体测定
抗双链DNA抗体测定是对抗双链DNA抗体的测定。抗双链DNA抗体又称为抗天然DNA抗体，是抗核抗体的一种类型，几乎所有红斑狼疮病人都有该抗体的升高。目前认为，它在红斑狼疮的发病中起一定的作用，在一些病人中，DNA的大分子可存在于循环血液中或者粘附于多种器官的微血管上，如肾脏、肺和脑组织，与血液中
分子遗传学词汇双链DNA
中文名称：双链DNA英文名称：double-stranded DNA;dsDNA定 义：由两条DNA单链通过碱基互补作用而构成的DNA分子。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
抗双链DNA抗体参考值
健康人血清1：10稀释为阴性（绿蝇短膜虫法）。 健康人结合率≤20%（放射免疫分析法Farr试验）。 一般以待测血清A值/阴性对照A值（P/N）≥2.1为阳性，正常人P/N值＜2.1（ELISA法）。 正常人为阴性（NC膜上不出现着色点）（滴金免疫渗滤试验）。
细胞化学词汇双链DNA结合域
中文名称：双链DNA结合域外文名称：dsDNA-binding domain定 义：双链DNA结合域，DNA结合蛋白中与双链DNA结合的结构域。作 用：双杂交系统的基础是在一些转录因子上发现的模域(modular domains)：一个DNA结合域，它可以结合一段特异的DNA
DNA双链体的结构和功能
中文名称DNA双链体英文名称DNA duplex定 义两条以3′，5′-磷酸二酯键相连而成的反向多核苷酸链通过沿着其轴向的互补碱基对的氢键交联在一起形成的双链DNA，通常形成双螺旋的结构。可以共价闭合成环状分子，形成超螺旋DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
限制酶切割双链DNA的方式
限制酶切割双链DNA的方式有两种，产生的末端也有两种：第一种是交错切割，即两条链的切点不在同一水平而是相隔数个碱基，故断口产生两小段自身互补的单链，这种末端容易互补连接，称为粘性末端（cohesive terminus）；第二种为平整切割。
抗双链DNA抗体的检测方法
检测抗DNA抗体的方法有多种，如ELISA、IIF、金标法、免疫印记法、放免法等。其中最特异敏感的是应用锥虫或血鞭毛虫（如绿蝇短膜虫）作基质测定抗dsDNA抗体。因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其他抗原干扰；在阳性结果时，可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。因此该试验用于测定抗
介绍DNA探针的同位素标记方法
1.缺口平移法(nick translation)缺口平移法是最常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如
核酸探针标记及原位杂交
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
关于焦磷酸交换作用的介绍
催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi dNPPP←dNP32P32P PPi→DNA 最后两种作用，都要求有较高浓度的PPi，因此，在体内由于没有足够高的PPi而无重要意义。DNApolⅠ的DNA聚合酶活性和5'→3'外切酶活性协同作用，可以使
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
细胞化学词汇带切口DNA
中文名称：带切口DNA英文名称：nicked DNA定 义：双链DNA分子中一条单链上带有一个或多个裂口。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
带切口DNA的结构特点
中文名称带切口DNA英文名称nicked DNA定 义双链DNA分子中一条单链上带有一个或多个裂口。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）