单链DNA探针技术简介
用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种:(1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2) 以RNA为模板, 用反转录酶合成单链cDNA探针。1. 从M13载体衍生序列合成单链DNA探针 合成单链DNA探针可将模板序列克隆到噬粒或M13噬菌体载体中,以此为模板,以特定的通用引物或以人工合成的寡合苷酸为引物, 在[a-32P]-dNTP的存在下,由Klenow片段作用合成放射标记探针，反应完毕后得到部分双链分子。在克隆序列内或下游用限制性内切酶切割这些长短不一的产物,然后通过变性凝胶电泳(如变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)将探针与模板分离开。双链RF型M13 DNA也可用于单链DNA的制备,选用适当的引物即可制备正链或负链单链探针。材......阅读全文
单链DNA探针技术简介
用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种:(1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2)
单链DNA结合蛋白的功能简介
单链DNA结合蛋白（Single-stranded DNA-binding protein，缩写SSB或SSBP）又称单链结合蛋白，是专门负责与DNA单链区域结合的一种蛋白质，为DNA复制、重组和修复所必需的成分。 防止两条互补单链再次结合为双螺旋，维持单链状态。防止单链区域形成链内二级结构。
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
单链Oligo合成与DNA组装技术－（一）
合成生物学作为迅速发展的交叉学科，已在生物医药、新材料、诊断、能源和数据储存等领域展现越来越广泛的应用潜力。合成基因组学作为合成生物学的重要研究方向，着重于新生命体系的从头设计与合成，其以Oligo（寡核苷酸链）合成、拼装和转移等核心技术为支撑。新生命体系的从头设计与合成不仅需要合成组成基因组的小片
单链Oligo合成与DNA组装技术－（二）
2.2 Golden Gate组装Golden Gate组装技术是基于非同源重组的代表性技术，其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在识别位点外部切割的特性，设计特异的突出序列同时组装多个片段，且酶切和酶连可以同时进行，原理如图3所示。首先，扩增目的片段，在两端加上BsaⅠ识别序列，同时在识别序列内侧
双链DNA探针切口平移法
当双链DNA 分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA 聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA
双链DNA探针切口平移法
当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,
双链DNA探针切口平移法
当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,用
双链DNA探针标记法介绍
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的
细胞化学词汇单链DNA
中文名称：单链DNA外文名称：single－stranded DNA术语含义：单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
单链互补DNA的定义
中文名称单链互补DNA英文名称single-strand cDNA;sscDNA定 义在逆转录酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
单链DNA的结构特点
单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切
双链DNA探针标记法的介绍
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到
细胞化学词汇单链互补DNA
中文名称：单链互补DNA英文名称：single-strand cDNA;sscDNA定 义：在逆转录酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
抗单链DNA抗体的概述
抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种，DNA是一个大分子的复合物，由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂，DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。
单链DNA测序技术助力获取游离核酸多组学数据
游离DNA（cfDNA）是指游离在细胞外的DNA，存在于血浆、血清或尿液等体液中。cfDNA的片段组学特征可用于微创、实时、动态地监测生理和病理状态，在肿瘤早筛与复发监测、母婴健康、器官移植、感染疾病等领域具有广阔的应用前景。高通量测序技术是表征cfDNA片段组学特征的主要手段，其中，双链DNA文库
HiDEFseq技术揭示了单链DNA突变的起源
突变是构成DNA密码的分子“字母”的变化，DNA密码是所有活细胞的蓝图。其中一些变化可能影响不大，但其他变化可能导致疾病，包括癌症。现在，一项新的研究引入了一种原创技术HiDEF-seq，该技术可以准确检测突变之前DNA密码中的早期分子变化。该研究的作者说，他们的技术 - 发夹双链增强保真测序 -
切口平移法双链DNA探针标记法
切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 限制性内切核酸酶 模板 DNA 寡核苷酸引物 试剂、试
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性内切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物试剂、试剂盒乙酸铵DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 电泳缓冲液Tris-ClKlenow 基础缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材变性聚丙烯酰胺凝胶或碱性琼脂糖凝胶黏性贴片或磷光黏性贴片Sephadex
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性内切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 电泳缓冲液Tris-ClKlenow 基础缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材 变性聚丙烯酰胺凝胶或碱性琼脂糖凝胶黏性贴片或磷光黏性贴片Sephad
单链DNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。实验材料 3' 引物链亲和素磁珠仪器、耗材 电泳仪PCR 仪离心机凝胶成像仪
单链DNA文库的SELEX筛选实验
单链DNA文库的SELEX筛选实验可用于：（1）体外诊断；（2）体内治疗等。实验方法原理SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。实验材料3
单链DNA的功概念和作用
单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
分子遗传学词汇单链DNA
中文名称：单链DNA外文名称：single－stranded DNA定义：大部分DNA以双螺旋结构存在，但一经热或碱处理就会变为单链状态。
单链DNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。
“DNA探针”的技术依据
DNA探针根据其来源分为3种:一种来源于基因组中的基因本身,称为基因组探针(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一种是从相应的基因经转录获得mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针(cDNA probe);此外,还可在体外人工合成20～50个碱基的与基
从M13噬菌体模板合成非固定长度的单链DNA探针
实验方法原理 在合成过程中，低浓度的放射性标记的 dNTP 使探针的长度限制为 200~300 个核苷酸。但是新合成的 DNA 可通过改变投入的模板量和 dNTP 的浓度使其长度为 100~1000 个核苷酸，如此长度范围内的探针适用于大多数杂交实验。实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klen
从M13噬菌体模板合成非固定长度的单链DNA探针
在合成过程中，低浓度的放射性标记的 dNTP 使探针的长度限制为 200~300 个核苷酸。但是新合成的 DNA 可通过改变投入的模板量和 dNTP 的浓度使其长度为 100~1000 个核苷酸，如此长度范围内的探针适用于大多数杂交实验。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在