薄层层析实验中出现拖尾现象等异常原因及克服方法
薄层层析(TLC)技术薄层色谱法是常用的微量分析方法,广泛应用中草药研究和日常检验,但常出现斑点异常现象给结果判断带来困难,应注意避免和克服。1、拖尾现象拖尾现象在薄层色谱中较为常见,结果使斑点间界限模糊,结果难以判断。产生原因及克服方法(1)点样过量在薄层色谱过程中化合物在薄层板上进行吸附———解吸附的移动过程中,任何一类吸附剂,它们的负载化合物的能力是有一定限度的,因点样过量而超载后,过剩的化合物被抛在后面,形成拖尾现象。(2)重复点样样点虽在同一垂直线而样点圆心未重合,致使样点呈近椭圆形,也是形成拖尾现象的又一原因,为避免以上异常现象,应选择合适的点样量和复点样过程中,样点圆心应重合。2、边缘效应边缘铲应是样品在层析时,薄层板两边的斑点比中间斑点移动快,并向两边偏斜。其原因是用混合溶剂展开过程中,其中极性较弱和沸点较低的溶剂在薄层板两边沿处较易挥发,使薄层板上展开剂的比例不一致,极性发生变化,而出现边缘效应。为避免上述现象......阅读全文
峰拖尾原因分析及解决办法
1 衬管,色谱柱被污染或者衬管,色谱柱安装不当,存在死体积;改进方法:注射甲烷,峰若拖尾,则重新安装。2、进样器温度过高;3色谱柱柱头不平;改进方法:用金刚砂切割。4 固定相的极性指标与样品不匹配;改进方法:换匹配的柱子。5 样品流通路线中有冷井;改进方法:消除路线中的过低温度区。6衬管或色谱柱中有
薄层层析分离中的薄层板制作
薄层层析分离中的薄层板制作是指将经离心机处理后的固定相支持剂均匀地涂布在玻璃板上形成薄层。玻璃板要求表面平滑、清洁,大小按需要选定。一、干板制作:干板是将不加粘合剂的支持剂干粉均匀地涂布在玻璃板上制成的薄层板。干板制作简单,展开快,但极易吹散。制作方法如下:1、选直径约为50mm的玻璃管一根,根据薄
薄层层析分离中的薄层板制作
薄层层析分离中的薄层板制作是指将经离心机处理后的固定相支持剂均匀地涂布在玻璃板上形成薄层。玻璃板要求表面平滑、清洁,大小按需要选定。一、干板制作: 干板是将不加粘合剂的支持剂干粉均匀地涂布在玻璃板上制成的薄层板。干板制作简单,展开快,但极易吹散。制作方法如下: 1、选直径约为5
薄层层析分离原理
薄层层析分离是把支持剂均匀涂布于支持板(常用玻璃板和涤纶布等)上形成薄层,待分离样品点在支持板上,然后用相应的溶剂进行展开,使样品中各组分得到分离的过程。薄层层析分离根据固定相支持剂的不同,分薄层吸附层析分离、薄层分配层析分离、薄层离子交换层析分离和薄层凝胶层析分离等。一般实验中应用较多的是薄层吸附
什么叫薄层层析法
薄层层析又叫薄层色谱,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固—液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度
什么叫薄层层析法
薄层层析又叫薄层色谱,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固—液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度
关于薄层层析的简介
英文为thin layer chromatography 又称薄层色谱,色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的一种重要实验技术,属固—液吸附色谱,兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,因此,又可用来精
薄层层析(TLC)方法(二)
薄层层析是将吸附剂或者支持剂(有时加入固化剂)均匀地铺在一块玻璃上,形成薄层。把欲分离的样品点在薄层上,然后用适宜的溶剂展开,使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。 薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定,也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。还可以通过薄
薄层层析(TLC)方法(一)
薄层层析是将吸附剂或者支持剂(有时加入固化剂)均匀地铺在一块玻璃上,形成薄层。把欲分离的样品点在薄层上,然后用适宜的溶剂展开,使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。 薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定,也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。还可以通
薄层层析的操作步骤
1.点样: ⑴ 样品的溶解:将样品溶于展开剂极性相近、挥发性高的有机溶剂。 ⑵ 薄层点样:用毛细管(0.5mm以下)或用专业点样器进行点样。 点样的要求:样点位置应在距离底边1-1.5cm处;点样量适当;样点直径小于2-3mm;间隔反复点样;多个样点时,间隔为2cm且处于同一条直线上。
薄层层析的相关介绍
在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约1~2毫米的支持物,如纤维素、硅胶、离子交换剂、氧化铝或聚酰胺等,根据需要做不同类型的层析。聚酰胺薄膜是一种特异的薄层,将尼龙溶解于浓甲酸中,涂在涤纶片基上,当甲酸挥发后,在涤纶片基上形成一层多孔的薄膜,其分辨力超过了用尼龙粉铺成的薄层。薄层层析较纸层析优越在
薄层层析的定量测定
薄层层析的定量测定: 1)直接测定法:色谱分离后,直接用肉眼观察比较或用仪器扫描斑点而测定其含量。 a.目测法样品经色谱分离后,直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅,并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较,而近似地判断样品中所测成分的含量。 b.测面积法
薄层层析的分析程序
将样品溶液用毛细管点在薄层板的一端,置密闭槽中,加入适宜溶剂为流动相。由于毛细管原理,溶剂被吸上,沿板移动,并带动样品中各组分向前移动,这个过程称为展开。由于各组分性质不同,移动距离不同,展开一定距离后,即得互相分离的组分斑点。可用适当方法使各组分在板上显示其位置,如组分本身有颜色,即可直接观察,否
薄层层析的定性检测
薄层层析的定性检测:展开完毕后,把薄层从层析缸中取出,用铅笔划出或小针刺出展开剂前缘的位置,随即进行显色,以确定各个斑点的位置、Rf值和显色情况,从而判断试样中含有哪些组分。有色物质经展开后呈现明显的色斑,很易判断。对于无色物质,可根据化合物的性质,用物理检出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检
薄层层析操作关键点
薄层层析操作关键点1、铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间,根据经验来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断,越稠越难下滴。匀
薄层层析技术介绍
在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约1~2毫米的支持物,如纤维素、硅胶、离子交换剂、氧化铝或聚酰胺等,根据需要做不同类型的层析。聚酰胺薄膜是一种特异的薄层,将尼龙溶解于浓甲酸中,涂在涤纶片基上,当甲酸挥发后,在涤纶片基上形成一层多孔的薄膜,其分辨力超过了用尼龙粉铺成的薄层。薄层层析较纸层析优越在于分
什么叫薄层层析法
薄层层析又叫薄层色谱,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固—液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度
薄层层析分离原理
薄层层析分离是把支持剂均匀涂布于支持板(常用玻璃板和涤纶布等)上形成薄层,待分离样品点在支持板上,然后用相应的溶剂进行展开,使样品中各组分得到分离的过程。薄层层析分离根据固定相支持剂的不同,分薄层吸附层析分离、薄层分配层析分离、薄层离子交换层析分离和薄层凝胶层析分离等。一般实验中应用较多的是薄层吸附
薄层色谱样品斑点有尾巴是怎么回事
根据我做薄层这块的经验,我觉得吧,第一,你要检查看下你的层析板厚度,如果你按照药典要求制成样品、点样点上规定的量,但是铺制的板厚度不够,展开了,拖尾就出来了,;第二,点样量过大,也会拖尾。这两种情况都叫超载。如果前面两种情况都可以排除的话,那么还有一种情况,就是展开剂问题,适当加些酸或者碱,一般用乙
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
“高效液相色谱法”主峰拖尾怎么解决
能不能把色谱条件说一下。好分析调节什么。拖尾拖到什么程度?峰宽横跨几分钟?测定的是含量还是有关?一般来说拖尾情况要靠对称因子判断,对称因子最好要小于1.3,但是一般不能大于1.5。而且这个对称因子通常只适用于含量测定上。一般拖尾先要检查色谱柱,色谱柱使用过度就会导致拖尾和岔峰。反冲色谱柱或更换新柱子
色谱图上为什么会出现峰信号拖尾?
峰信号拖尾的原因很多。可以将该问题按以下方式区别对待:上样量过大:当减少注射进样量时,要么峰形变得更加对称,要么分拆为两个单独的信号峰纠正措施:使用稀释后的注射样品二级相互作用:进样注射中性参照化合物(苯乙酮,甲苯),能获得对称峰形纠正措施:调节移动相pH使得样品分子中性化大规格内径(>10毫米)色
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
气相色谱出峰拖尾怎么办?
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛
高效液相色谱法主峰拖尾怎么解决
筛板堵塞有可能引起色谱峰拖尾,但筛板堵塞的同时柱压要比平时高。如果怀疑色谱柱的问题可以更换一根相同型号的的色谱柱试一试,这样就可以确定是否色谱柱的问题了。排除色谱柱的问题最好还要从其他方面查找一下引起拖尾的原因,比如其他管路系统是否污染了(包括进样阀、预祝芯、入口单向阀、出口单向阀,自动进样的还要考
PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾 现象:产物在凝胶上呈Smear状态。 原因: 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策: 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP
气相色谱出峰拖尾怎么办
当色谱发生拖尾现象时可以使用以下方法进行解决:1、当经历维修色谱问题(色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等)时,切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时,更换进样口内衬管、隔垫,并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。2、使用更高负载量的固定相,增加色谱柱内径、减少样品量。3、使用安全的毛