“一锅法”，Cy5合成策略
近红外菁染料Cy5因光谱峰宽小、光稳定性强、背景吸收低等优点在分子示踪、生物成像等领域应用广泛。然而，包括Cy5在内的绝大多数荧光染料分子，主要被用作外源性有机分子，在活细胞内的原位合成受到合成条件（如空气、水、pH、温度、浓度、催化剂）和生物安全性等因素的极大限制。国内外近年来有机光化学研究的迅速发展为解决细胞环境中外源性染料分子合成的问题提供了重要机会。 近日，南京大学的冯福德教授和中国科学院化学研究所的王树研究员合作，发现染料中间体1-(3-氨丙基) -2,3,3-三甲基-3-氢-吲哚（TMI）具有特殊的光敏性质，能够在加热和白光诱导下转化为Cy5染料，提出了“一锅法”的Cy5合成策略，并阐释了Cy5共轭骨架与TMI侧基之间的结构关联、氢原子转移和迈克尔加成反应等参与的化学机制。 非常有意义的是，Cy5的光控合成在活细胞胞内环境中也可以实现。光照时间依赖性以及在特定细胞器（溶酶体）的高定位性，表明Cy5原位合成......阅读全文
多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰（二）
（2）在整条肽中的某个Lys侧链接入FITC，Lys侧链为末端为-NH2的四碳直链烷基，直接起到了降低空间位阻的作用。这种修饰方式能够灵活的在整条肽中任何位置进行FITC修饰，而不仅仅局限于末端。我们所采用的FITC修饰多肽的两种形式，都具有操作简便，成功率高，容易分离纯化等优点。2.AMC修饰7-
免疫荧光组织（细胞）化学技术系列一：发展简史和概述
一、免疫荧光组织（细胞）化学技术的发展简史免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技
免疫荧光组织（细胞）化学技术发展简史和概述
一、免疫荧光组织（细胞）化学技术的发展简史免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技
免疫荧光染色能进行细胞平均荧光强度分析吗
细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，P
免疫荧光组织（细胞）化学技术：荧光抗体的质量控制
1、染色特异性和敏感性的测定方法 （1）特异性染色和效价测定 直接染色法中效价以倍比稀释如1：2、1：4、1：8……，与相应抗原标本作一系列染色，荧光强度在“+++”的最大稀释度，为其染色滴度（效价）或单位。实际染色时，可取低一个或两个稀释度（即2~4个单位），如染色效价为1：64，实际应用时可取1
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...1
制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一，制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下： 1、异硫氰酸
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...2
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗体的方法 2P3（2）Chadwick氏法 试剂和材料：抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸盐缓冲盐水、1%硫柳汞、离心机及离心管、三角烧瓶(25 ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500 ml
文献解读：分层组装的DNA线框纳米结构，可用于...（二）
3.靶向性细胞毒性和稳定性在鉴定了CA4-Oct的细胞内化和穿透能力后，作者测定了其对目标癌细胞的细胞毒性。为了研究适配体介导的靶向给药的影响，作者选择了8h的短期孵育和40h的额外孵育，将抗癌功能从非特异性细胞吸附和核溶解中分离出来。作者发现，对照组Sgc8c、Lib、CA4-Lib、DNA八面体
Fluoptics用于外科手术实时指导的成像系统
Fluoptics是一家致力于开发实时指导外科手术的新型成像系统的公司，该公司研发的Fluobeam® 成像系统具备灵活，便携；不需要暗室也可以实现完美成像；实时监测，数据可以以图片，video多种格式输出等特点，兼容适用于CY5以上的所有荧光探针，是外科医生手术实时监测的好帮手。 Fl
显微镜下的生命现象－美得超乎你想象
地球充满了无数的生物，从最简单的病毒、类病毒到菌藻、树草，从鱼虫鸟兽到复杂的人类，处处都可以察觉到生命的活动。不同的生物，虽然形态、生理特征和对环境的适应能力各不相同，但是都同样经历着生长、发育、衰老、死亡的变化，都具繁殖后代的能力。草长莺飞，花开花落，我们在感慨生命的奇迹时，不禁想要知道，生命是如
多肽FRET荧光标记技术
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
强荧光载体在肿瘤细胞神经细胞干细胞等细胞中应用实例
我们在细胞、动物实验操作时，常常都需要依赖荧光标记。如果能让这荧光亮一点，再亮一点，会带来什么样的改变呢～ 有图有真相！这画面太美我不敢看哦～大家找到自己的细胞了吗？ A549 人肺癌细胞 RKO 人结肠癌细胞 Hela 人宫颈癌细胞 MDA-MB-231 人乳腺癌
强荧光载体在肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞中的应...
强荧光载体在肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞中的应用实例我们在细胞、动物实验操作时，常常都需要依赖荧光标记。如果能让这荧光亮一点，再亮一点，会带来什么样的改变呢～有图有真相！这画面太美我不敢看哦～大家找到自己的细胞了吗？A549 人肺癌细胞RKO 人结肠癌细胞Hela 人宫颈癌细胞MDA-MB-23
定量PCR简介
PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤，使目标DNA片段曾指数扩增。因此，PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统，能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平，从而限制了它在临床检测中的应用。荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号
纳米流式分析法肾结石高通量无创检测新方法
肾结石是泌尿外科最常见的的疾病之一，是一种全球性疾病。中国是世界上肾结石患者最多的国家之一。近年来，肾结石在我国的发病率有逐渐上升趋势，大约5%-15%的人群一生中会罹患肾结石。肾结石严重影响患者的身体健康，如果肾结石得不到及时诊断和治疗,可能会造成尿路阻塞,排尿疼痛和肾积水，严重者甚至可能造成尿毒
功能纳米荧光探针用于肿瘤细胞检测
恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一，目前已成为人类死亡的主要原因，并且其发病率呈逐年上升的趋势。若能早期发现肿瘤并及时治疗，可大大提高肿瘤的治愈率。因此，对于肿瘤的早期检测和诊治已成为各国科学家关注的热点。为了实现肿瘤早期诊治，目前研究大多集中于检测活细胞内一种肿瘤标志物，这可能会带来“假
特殊荧光试剂让癌干细胞“现身”
日本研究人员研究发现，一种荧光试剂能够与癌干细胞结合，不仅可以让癌干细胞发光可见，还具有遏制癌干细胞的作用。这一发现将有助于促进开发治疗癌症的新方法。 癌干细胞是指具有干细胞性质的癌细胞，有“自我复制”以及“多细胞分化”等能力。这类细胞被认为有形成肿瘤乃至发展成癌症的潜力。现在的癌症治疗主要是
荧光细胞分析仪功能特点介绍
荧光细胞分析仪功能特点介绍荧光细胞分析仪将细胞计数和细胞分析两种功能集于一身，并且能通过能荧光和亮光两种方式进行细胞成像，因此可以广泛的用于活细胞成像、细胞迁移测定、细胞培养质量控制等方面。荧光细胞分析仪还可以通过新式分析软件对荧光细胞进行全面分析，使得出芽增殖分析，活细胞计数等数据更加可靠，这一仪
荧光细胞分析仪的仪器特点
荧光细胞分析仪的仪器特点荧光细胞分析仪，明场+双色荧光通道的结合使实验更加简单快捷，同时还具备转染检测功能，更加拓宽了检测的宽度。检测细胞种类更加大，不仅适用于单纯的培养细胞，对从组织、外周血、肺泡、肝脏分离出的种类和来源差异很大的细胞标本，也可以快速计数和分析。通过荧光标记技术和图像分类识别技术对
荧光激活细胞分选仪的功能介绍
中文名称荧光激活细胞分选仪英文名称fluorescence-activated cell sorter;FACS定 义用结合有荧光染料的探针(如抗体)标记细胞进行流式细胞计数、分选的仪器。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
荧光激活细胞分选仪的功能作用
中文名称荧光激活细胞分选仪英文名称fluorescence-activated cell sorter;FACS定 义用结合有荧光染料的探针(如抗体)标记细胞进行流式细胞计数、分选的仪器。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
用什么染料可以实现全细胞荧光
顾名思义，就是整个细胞都可以荧光。染料：亲脂性羰花青染料或吖啶橙就可以原理：当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时，这种物质会在极短的时问内发射出较照射波长为长的光(可见的光)，这种光就称为荧光。有些生物材料受到紫外线照射后能直接发出荧光称自发荧光(或直接荧光)；有的生物材料受紫外线照射后并不发
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
细胞支原体污染的荧光检测方法
DNA荧光染色法：1.原理：利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染
肿瘤细胞的标记及活体荧光成像
摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) , 经800 mg/ L G418 筛选, 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究, 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P < 0101) . 将稳定
细胞中自发荧光药物浓度的检测
实验步骤 展开
免疫荧光细胞化学染色方法1
一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），
免疫荧光细胞化学染色方法2
2．方法步骤 （1）涂片或切片固定。 （2）吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定湿度的染色盒内。 （3）用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤，可对活细胞在试管内进行染色，常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究，阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示（如A抗原和B抗原），A抗原的
细胞中自发荧光药物浓度的检测
实验步骤 展开