免疫荧光细胞化学染色方法1

一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 (一)直接法 1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30min,切片置入能保持潮湿的染色盒内,防止干燥。 2.洗片 倾去存留的荧光抗体,将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次,搅拌,每次5min,再用蒸馏水洗1min,除去盐结晶。 3.用50%缓冲(0.5mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0~9.5)甘油封固、镜检 4.对照染色 ①正常免荧光血清染色,如上法处理切片,结果应为阴性。②染色抑制试验(一步法):将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清(相同)等量混合,如上法处理切片。结果应为阴性。为证明此种染色抑制......阅读全文

免疫荧光细胞化学染色方法1

一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法   (一)直接法   1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),

免疫荧光细胞化学染色方法

免疫荧光细胞化学染色方法 一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 (一)直接法 1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光 抗体或兔抗人 IgG 或 IgA 荧光抗体

免疫荧光细胞化学染色方法

一、标本制作  可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。  二、荧光抗体染色方法  (一)直接法  1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30

免疫荧光细胞化学染色方法2

 2.方法步骤   (1)涂片或切片固定。   (2)吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液(此时免疫血清及补体又都稀释一倍)滴于切片上,37℃作用30min,置于保持一定湿度的染色盒内。   (3)用缓冲盐水洗2次,搅拌,每次5min,吸干标本周围水液。

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤,可对活细胞在试管内进行染色,常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究,阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:间接法

一、原理与意义 免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——间接法,是一种荧光抗体染色法。该方法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原,敏感性较高,操作方法较易掌握,而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体(如麻疹)等的研究和检查,所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。 二、操作流程 (一)双层法

抚生试剂其它免疫荧光细胞化学染色方法

   本法应用直接法或间接法的原理和步骤,可对活细胞在试管内进行染色,常用于T细胞和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究,阳性荧光主要在细胞膜上。膜抗原荧光抗体检测法(FACS)即采用此原理。     双重染色法    在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的抗

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:补体法原理和操...

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:补体法原理和操作指南一、原理与意义免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——补体法,是一种荧光抗体染色法。本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制,因而一种荧光抗体可作更广泛的应用,敏感性亦较间接法高,效价低的免疫血清亦可应用,节省免疫血清,尤其是对检查形态小的如立克氏

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法原理和操...

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法原理和操作流程一、原理与意义免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——直接法,是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单,适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原,特异性高而敏感性较低。二、操作流程

免疫组织/细胞化学染色1

一 基本原理免疫组织/细胞化学是利用抗原抗体具有高度特异性结合反应的原理,采用已知抗体检测组织或细胞的抗原物质,然后以适当的方式显示其结合信号以证明组织或细胞是否存在未知抗原,并进行定性、定位或定量的研究。二 基本步骤 1 三步法:以SP(链霉卵白素-过氧化物酶)试剂盒为例: 石蜡切片脱蜡至

细胞化学染色方法

实验原理1. 细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的 DNA 和 RNA 出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的 DNA 呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的 RNA 呈红色。由此对细胞中的 DNA 和 RNA

细胞化学染色方法

实验原理1. 细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的 DNA 和 RNA 出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的 DNA 呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的 RNA 呈红色。由此对细胞中的 DNA

细胞免疫荧光染色

实验概要细胞免疫荧光染色实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1

常用血细胞化学染色11

一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解,产生新生态氧,新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺,后者与亚硝基铁氧化纳结合,再进一步氧化形成稳定

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

细胞核蛋白的免疫荧光染色方法

细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,P

细胞核蛋白的免疫荧光染色方法

细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,P

免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别

同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称

免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别

同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称

血细胞化学染色的常见染色方法介绍

  1.过氧化物酶染色(POX)  (1)原理:过氧化物酶能分解过氧化氢而释放出新生态氧,使无色联苯胺氧化成蓝紫色,后者与硝普钠结合形成蓝黑色的颗粒,沉淀于细胞质中。  (2)操作方法:将固定液滴加在新鲜骨髓或血涂片上,固定30秒,流水冲洗,晾干。将应用也滴加在血膜上,作用10~15分钟,流水冲洗。

细胞化学词汇染色质组装因子1

中文名称:染色质组装因子1英文名称:chromatin assembly factor-1;CAF-1定  义:与新生DNA链结合,特异地识别组蛋白H3和H4及H3/H4组成的四聚体。定位结合于复制叉之后,可增加H3/H4四聚体的稳定性。需经磷酸化后才有活性,其缺失将严重影响细胞周期进程,使其阻滞在

常用血细胞化学染色12

二、氯乙酸AS-D荼盼醋酶染色染色原理血细胞内的氯乙酸AS-D荼酚酯酶(naphythol AS-D chloroacetate esterase, NAS-DCE)水解基质液中的氯乙酸AS-D荼酚,产生AS-D荼酚,进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀,定位于细胞质内酶所在的部位。本

酶免疫细胞化学染色操作指南1

一、材料和试剂1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)6、AEC底物(1)底物缓冲液(20X)

细胞化学染色

细胞化学染色,是一种以形态为基础,结合运用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。用于研究血细胞生理、病理和化学结构;临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨,提供重要依据。血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构,反应产物应是

免疫荧光细胞化学技术

免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons等(1950)建立,经过近43年的发展,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与亲合化学技术如葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激

免疫荧光组织(细胞)化学技术——荧光素及其标记抗...1

制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一,制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光,停止能量供给,发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质,称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下: 1、异硫氰酸

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

1.一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。2.二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色,再用FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫