western蛋白样品最多可以反复冻融几次
可反复冻融的次数具体情况根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定,当然,最好是一次成功。如果说需要做大量的实验,需要一次准备很多一致性蛋白样品,那么强烈建议你在第一次冷冻前用EP管分装,分装数量和分装量根据你的实验次数和需要一次上样量确定。这样,就完全避免了多次冻融(除了第一次实验不需要冻融;这是从根本上解决你的问题)。再说你提的问题本身,上面也说了,蛋白样品可反复冻融的次数,要根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定,这是说如果你需要的目的蛋白比较稳定,那么,是可以多次反复冻融的,但最好不要多于3次,因为蛋白质在反复冻融下,会变性,而且,储存时间太长了,也会影响实验数据的准确性。一般而言,-20度保存,不要超过2周,最长不要超过1个月;-80度(或-70度)保存,一般不超过半年,最多1年。提一句,新取得样本,如果不是立即提取蛋白,最好立即保存在液氮中(很方便),尤其是如果你还要做RNA实验的话,因为只有在液氮的超低温环境下,才能抑制R......阅读全文
western蛋白样品最多可以反复冻融几次
可反复冻融的次数具体情况根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定,当然,最好是一次成功。如果说需要做大量的实验,需要一次准备很多一致性蛋白样品,那么强烈建议你在第一次冷冻前用EP管分装,分装数量和分装量根据你的实验次数和需要一次上样量确定。这样,就完全避免了多次冻融(除了第一次实验不需要冻融;这是从根本
未用完的胎牛血清可不可以反复冻融
胎牛血清的储存方法及注意事项 一、保存血清的方法? 我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 二、何解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室
反复冻融的血清对细胞有什么影响
血清中因含有许多蛋白质,反复冻融对蛋白的活性肯定会有一定的影响,这似乎已*。因此,如果几次内用不完,应尽量分装,这不仅适用于血清,也适用于其他储存于-20℃的蛋白质类产品。本文威正翔禹/缔一生物为您分析反复冻融的血清对细胞有什么影响 曾有研究发现,血清冻融三次,对肿瘤标志物的浓度影响不大1,对于
反复对血清冻融对细胞培养有害
实验室一次用不完的血清会采取继续冷冻的方式保存,冻融血清会对蛋白的活性有影响,如果是反复冻融的确会影响到细胞正常生长。曾有研究发现,血清冻融三次,对肿瘤标志物的浓度影响不大1,对于血浆,有报道在短时间内反复冻融三次,对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大,但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。重要
血清反复冻融对细胞培养有害你知道吗?
曾有研究发现,血清冻融三次,对肿瘤标志物的浓度影响不大1,对于血浆,有报道在短时间内反复冻融三次,对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大,但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。重要的是一篇西北民族学院的文章,《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》,作者针对SP2/0细胞,用MEM培养基和三批
western-blot-NC膜可以反复用多少次
此膜是可以重复使用的。所以多个指标也只需要跑一次胶,但是首先要保证你的蛋白在胶上面,跑个MARK作个参照,对应一下分子量,不要切胶上把你要检测的蛋白给切除了。我们实验室的做法是再次使用的使用先用2%的NAOH洗5分钟,水洗5~10分钟,重新封闭,加一抗二抗,效果很好的!
血清反复冻融或放置4度冰箱中半年还能用吗?
血清放在-20度可以保存一年放在4度可以保存1个月和基础培养基配成完全培养基放在4度可以放6个月
Western-Blot-蛋白样品制备
一、单层贴壁细胞总蛋白的提取:1.倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)。2.每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两次
什么是冻融?
冻融是指土层由于温度降到零度以下和升至零度以上而产生冻结和融化的一种物理地质作用和现象。中国多属于季节性冻土类型。即冬季冻结,夏季消融,多年冻土类型少。
培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗?
大部分添加物和试剂最多可以冻融3次,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。
冻融以在珍贵样本原液冻融工作的应用
嘿,生物圈人~你心中的原液冻融工作是怎样的? 生物制品生产的过程中往往面临大体积的原液冻融工作,单抗,双抗,ADC抗体偶联药物,重组蛋白等不同的原液样品,分子结构的差异必然具有迥异的温度敏感性,如何程序性地冷冻并且溶解以维持样品活性和均一性,是工艺设计至关重要的环节。 那么价值百万甚至千万的单抗,双
冻融法回收DNA片段
实验方法原理 冻融法是指采用反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 实验材料
冻融法回收DNA片段
冻融法回收DNA片段可用于:(1)获取纯化的DNA片段;(2)回收PCR产物。实验方法原理冻融法是指采用反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 实验材料DNA胶条试剂、试剂盒Tris-HCl饱和酚
western-blot中蛋白样品浓度怎样稀释
计算出样品及buffer的体积,加水补足到25ul
蛋白印迹Western-Blotting抗体和样品要求
蛋白印迹Western Blotting抗体和样品要求1.为保证质量,抗体最好为进口单克隆抗体;2.样本要求:尽可能新鲜;3. 样本量:组织样本,质量大于100mg;细胞样本,细胞数大于1×106;注意事项:1.市内细胞样品可直接常温运送,运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口,建议冻存后运输。2
Western-Blot详解-常见的问题指南(一)
实验常见的问题指南根据问题的类型主要分成以下几类(以下资料权作参考,请勿盲目模仿!):1. 参考书推荐A. 对初学者看什么资料比较好?解答:《抗体技术实验指南》和Antibodies(a laboratory manual, wrote by Ed Harlow ,david lane)两本书不错
混凝土冻融试验机特点
特点:▲试验过程由电脑自动控制,具有控制参数设定,显示试验数据记录、存储状态指示等功能将可编程控制器和长图记录仪换成了工业控制用台式计算机。 能保证365 天不间断运行,绝不会发生死机现象;▲将冷冻机水冷机组换成了风冷机组。符合当前制冷设备流行趋势,并可免除水冷机组的冻害威胁。并有噪音小等特点。以实
混凝土快速冻融试验箱冻融试验方法
冻融试验,是指科研机构对新药或新材料进行的一种科学实验,目的是检验实验对象各种指标的稳定性和有效性。冻融试验在建筑上:冻融试bai验是为测du试混凝土抗冻性能而设计的试验,通常用zhi于测量dao混凝土在水中反复周期的冰冻和融化而导致破坏的承受能力。在医学上:冻融试验是模拟药品在运输与使用过程中可能
至少复制几次可以得到独立的目的基因?
至少复制3次才能得到独立的目的基因.
细胞冻存复苏原则慢冻快融操作与演示
培养细胞时为何要冻存一定数量的细胞?有何意义?细胞冻存的意义:细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态并将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其它意外事
细胞复苏的原则:慢冻速融
必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复苏步骤一. 实验前准备:将水浴锅预热至37℃。细胞实验室进行常规消毒,用75%酒精擦拭并且使用紫外线照射40min的超净工作台台面。在超净工作台中按次序摆放好消过
混凝土冻融试验机试验规程
试验规程:▲开机前准备→检查机组周围是否异样。→检查机组电源连接是否妥当(相电压是否符合机组电压要求)。→冻水泵经试压、排污、放空气、试运行后是否处于无故障备用状态。→检查试验箱内是否干净,不得有小颗粒及丝状物,否则损坏水泵或堵塞管路。→加足够的乙二醇,不得无乙二醇的状态下开启机器。▲机组系统操作→
Western样品制备方法
一、细胞抗原和组织抗原样品的制备1、细胞抗原的处理方法向收集到的细胞中加入RIPA裂解缓冲液(蛋白酶抑制剂在使用前加入,终浓度为2ug/ml)在冰上裂解30-60min,然后再插入冰盒进行超声,超声强度以不产生泡沫为宜,超声每次2-3s,重复3或4次,12000g离心3-5min,吸取上清备用。2、
Western-blotting样品准备
实验概要Preparation of lysis buffers, protease and phosphatase inhibitors, lysate from cell culture, lysate from tissues, protein concentration, samples
Western-Blot蛋白样品制备的基本原则
目的蛋白因其物种来源和组织特异性的不同,在种类和性质上有很大差异,因此并没有一种制备方法可以适用于所有蛋白的提取。这就需要我们进行全面的分析后才能选择**合适的蛋白制备方法,在这个过程中遵循的一个基本原则是「知己知彼」。首先,「知己」是要了解:样品是来自什么物种?目的蛋白定位在哪种组织或细胞器?是可
Western-Blot中蛋白样品的制备与试剂选择
"良好的开始是成功的一半",尤其对于生物学实验,如果没有高质量的实验样本,等待我们的很可能是失败的实验结果。优质特异的蛋白样品对Western Blot实验至关重要。下面将从蛋白样品制备的方法和试剂选择上给大家一些建议,同时也和大家分享一些因蛋白样品制备不当而导致Western Blot实验失败的案
Western-Blot样品制备注意事项及步骤
Western Blot样品制备是这个实验的第一步。而且是关键步骤,要求尽可能的获得所有蛋白质。所以我们在做wtstern blot实验应注意以下问题:1:在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。2:选择合适的表面活性剂和还原剂,破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键,使其形成
JDS180-建材冻融试验箱
一、产品特点 JDS-180型建材冻融箱是按照GB/T3810.12—1999陶瓷砖试验 方法《第12部分抗冻性的检测》、ISO10545-12-1995、 GB/T11973-1997等标准设计制作的。本产品可作陶瓷砖、石材、红砖、混凝土的抗冻性检测,自动控制升温、降温及恒温的自动循环冻融检测
混凝土冻融试验机维护与保养
混凝土冻融试验机维护与保养:▲经常进行克利夫兰闪点试验器保养与维护,并存放在干燥通风之处,待用时间过长仪器设备,应定期通电开机,防止潮霉损坏仪器设备其零部件。▲建立大型精度、贵重备技术指标定期校验和标定制度,保持应有的技术指标。做好使用原始记录。▲仪器设备不准随意拆改或解体使用,确因需要开发新功能或
混凝土冻融试验机操作规程
操作规程:▲开机前检查机组是否出现凹凸异状,电源连接是否妥当,并加足够的防冻液,不得在无防冻液的状态下开启机器。▲机组系统操作。开机后,观察高低压表的指数来判定机组是否运行正常,一般压缩机正常运行时,高压压力为14-22kg/cm3,低压压力为0.8-1.5kg/cm3。▲机组保养。要保持机房清洁及