PCR有杂带怎么办

在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。......阅读全文

PCR有杂带怎么办

在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。

PCR仪RACE的PCR结果有杂带

  RACE PCR杂带或非特异性PCR条带可能是由于以下原因:  *GSP与其他cDNA的非特异性结合会导致在扩增目的产物时得到无关产物。  *GeneRacer引物和cDNA的非特异性结合会导致产生一端带有GeneRacer引物序列的PCR产物。  *RNA降解。  *PCR管或试剂污染。  注

PCR只有杂带,没有目的条带

有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶

PCR只有杂带,没有目的条带

有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶

PCR产物杂带很多,如何解决

在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。

PCR产物杂带很多,如何解决

在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。

pritA蛋白纯化有杂带咋办

用肝素柱进一步纯化。如果结合核酸可以考虑用肝素柱进一步纯化。镍柱纯化的时候不用咪唑梯度浓度洗杂,一般用低浓度(10 mM)的溶液洗就可以了,如果有chaperone的话可以用高盐洗一下。

WesternBlot有很多杂带原因分析

1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作3)杂蛋白多,建议处理目的蛋白4)抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体5)抗体孵育

纯化蛋白有杂带但是很细

1.仔细研究填料的说明书,同样是His-tag或GST标签的填料,但不同厂家,或者不同分辨率,其缓冲液和洗脱浓度都是有差异的,务必注意!比如,在选择填料时,可选择颗粒稍微细些的填料,分辨率会更好些。2.在样品的各阶段都要控制杂蛋白,以最常见的His-tag,可溶表达为例,上样时,加入低浓度(5-10

western-blot-杂带及背景脏问题

先说这个实验总体的背景,有黑点,这种背景非常像封闭液没有完全溶解带有杂质,或者是容器没洗干净,有脏东西了,最好把封闭液用0.22um的膜过滤一下再做。然后其他器皿都洗刷干净。洗液里面加点tween试试。再一个看条带,感觉特异性不太好,条带太多了。看过抗体厂家提供的图也是这样的吗?可以先试试把抗体浓度

WB结果总有杂带怎么办

1、更换一抗,换单克隆的。2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。

新手总结PCR/RTPCR疑难杂症

这里,很多经常遇到的问题,比如引物设计,PCR体系和条件,电泳条带分析等,我没有一一详细列举,因为这些原因比较容易找到,我这里列举的可能多是些容易忽略的疑难杂症,希望对大家有帮助。(说了是疑难杂症了,可能有一些看法走极端了,但是为了做出实验,怀疑一切,狗急跳墙,没事找抽也是值得的)。1.引物设计引物

Western-Blot中杂带较多有哪些原因

1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。

做得GST融合纯化总有杂带如何去掉

可以在平衡缓冲液里加一些盐,0.2-0.5MNaCl,这样可降低一些因离子作用带来的非特异吸附。同时在平衡液里加0.5%吐温等表面活性剂,这样应该有些改善。此外你也可以用阶段洗脱的方法,例如用5mM和10mM还原谷胱甘肽去分别去洗脱,看看有没有什么区别。还要注意的问题是超声破碎时注意功率和时间,避免

Western-Blot中杂带较多有哪些原因

1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。

Western-Blot中杂带较多有哪些原因?

1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。

荧光定量pcr溶解曲线出现杂峰

用来做测试的cDNA浓度应该比较高,而正式进行定量的模板浓度应该是有高有低吧,低浓度下出现非特异性溶解峰比较正常

做western显影出现很多杂带是什么原因

有很多种原因,举例如下:1.抗体浓度过高2.SDS造成非特异性结合3. 二抗试剂的非特异结合4.一抗特异性差推荐采用已经经过厂家验证的WB应用抗体,有图有真相像义翘的WB抗体一样,用起来才放心。另,最好放上自己的实验条件和结果图片,可以让大家帮你分析分析。

PCR扩增制备带标记探针

实验概要用标记脱氧单核苷酸部分代替PCR反应体系中的脱氧核苷酸(一般是带标记的dUTP代替dTTP),经PCR扩增后标记基团随机搀入扩增产物-DNA探针中。这样使探针浓度高,可检测标记基团量多,灵敏度高,与缺口平移法制备探针相比,具有方便简捷的特点,并且由于具高灵敏度因此在检测低丰度,低拷贝数的目的

SDSpage凝胶电泳出现杂带是什么问题

SDS-PAGE 电泳过程中常见问题以及解决方法 2 Q:SDS-PAGE 电泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS(

SDSpage凝胶电泳出现杂带是什么问题

SDS-PAGE 电泳过程中常见问题以及解决方法 2 Q:SDS-PAGE 电泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS(

蛋白两次纯化后杂带反而变多,什么原因

很可能是蛋白降解,推荐考虑后续实验需求,尝试加一些蛋白酶抑制剂。

PCR有哪些用途

PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一

PCR产物出现片状拖带或涂抹带的情况

  PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。

PCR扩增带异常的原因及解决方案

使用PCR时,最常碰到的问题就是会出现扩增带有异。借此机会,我们与大家探讨一下PCR扩增条带有异时的原因及解决方案。    假阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备;②引物的质量与特异性;③酶的质量;④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白

带食物入境日本有何规定

动物、植物、种子、新鲜水果、新鲜肉类几乎是每个海关都禁止携带入境的。日本海关同时还禁止假冒商品、华盛顿条约中所规定的物品、食品、植物、肉制品(火腿、香肠等,鱼肉制品例外)等。具体规定如下:1、假冒商品:在未知情况下降假冒商品携带入境,若被海关查出,物品将会被罚没。以上情况,收入不会被进一步追究法律责

矿用杂散电流测定仪的特点有哪些

  矿用杂散电流测定仪是一种灵敏度高,多量程保护电路的便携式整流仪表。    其特点是:    测量范围广,共有二十个量程,能分别测量交直流杂散电压和杂散电流,本身不需要电源,安全可靠。    适宜测试煤矿井下钢轨、水管、电缆等产生的电流及电压;    预防杂散电流放电引起的电管早爆及其它燃

PCR仪有哪些分类

普通的PCR仪把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,叫传统的PCR仪,也叫普通PCR仪。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要是做简单的,对目的基因退火温度的扩增。该仪器主要应用于科研研究,教学,医学临床,检验检疫等机构。梯度PCR仪把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件

PCR技术有哪些用途

1、核酸的:基因组克隆 2、制备用于DNA测序 3、反向PCR测定未知DNA区域 4、()用于检测细胞中水平、量以及直接克隆特定基因的cDNA 5、荧光定量PCR用于对PCR产物 6、cDNA末端快速扩增技术 7、检测基因的表达 8、医学应用:检测细菌、病毒类疾病;诊断遗传疾病;诊断肿

PCR-反应体系有哪些?

  1. 缓冲液  标准的缓冲液含 1pmol/ml Tris ·HCl,其 pH 为 8.3-9.0(室温),而在延伸温度(72 ℃)下,pH 值接近 7.2 。缓冲液中含有一种二价阳离子,用于激活 DNA 聚合酶的活性中心,一般使用 Mg2+。  2.dNTP  脱氧核糖核苷三磷酸的缩写,是包括