westernblot杂带及背景脏问题
先说这个实验总体的背景,有黑点,这种背景非常像封闭液没有完全溶解带有杂质,或者是容器没洗干净,有脏东西了,最好把封闭液用0.22um的膜过滤一下再做。然后其他器皿都洗刷干净。洗液里面加点tween试试。再一个看条带,感觉特异性不太好,条带太多了。看过抗体厂家提供的图也是这样的吗?可以先试试把抗体浓度降低,孵育时间缩短,减少非特异结合。但是从你的情况看,估计很容易导致特异蛋白没信号,不过还是值得一试的。内参看的话,抗体特异性好很多呢。所以可能抗体的问题会比较大。这个抗体别人用怎么样啊?......阅读全文
PCR有杂带怎么办
在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。
PCR只有杂带,没有目的条带
有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶
pritA蛋白纯化有杂带咋办
用肝素柱进一步纯化。如果结合核酸可以考虑用肝素柱进一步纯化。镍柱纯化的时候不用咪唑梯度浓度洗杂,一般用低浓度(10 mM)的溶液洗就可以了,如果有chaperone的话可以用高盐洗一下。
纯化蛋白有杂带但是很细
1.仔细研究填料的说明书,同样是His-tag或GST标签的填料,但不同厂家,或者不同分辨率,其缓冲液和洗脱浓度都是有差异的,务必注意!比如,在选择填料时,可选择颗粒稍微细些的填料,分辨率会更好些。2.在样品的各阶段都要控制杂蛋白,以最常见的His-tag,可溶表达为例,上样时,加入低浓度(5-10
WesternBlot有很多杂带原因分析
1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作3)杂蛋白多,建议处理目的蛋白4)抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体5)抗体孵育
PCR只有杂带,没有目的条带
有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶
PCR产物杂带很多,如何解决
在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。
PCR产物杂带很多,如何解决
在你现有的退火温度上各增加三度,降低三度,都去试一下先;如果杂带的长度比目的带长的话,就适当缩短退火和延伸时间。
western-blot-杂带及背景脏问题
先说这个实验总体的背景,有黑点,这种背景非常像封闭液没有完全溶解带有杂质,或者是容器没洗干净,有脏东西了,最好把封闭液用0.22um的膜过滤一下再做。然后其他器皿都洗刷干净。洗液里面加点tween试试。再一个看条带,感觉特异性不太好,条带太多了。看过抗体厂家提供的图也是这样的吗?可以先试试把抗体浓度
WB结果总有杂带怎么办
1、更换一抗,换单克隆的。2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。
PCR仪RACE的PCR结果有杂带
RACE PCR杂带或非特异性PCR条带可能是由于以下原因: *GSP与其他cDNA的非特异性结合会导致在扩增目的产物时得到无关产物。 *GeneRacer引物和cDNA的非特异性结合会导致产生一端带有GeneRacer引物序列的PCR产物。 *RNA降解。 *PCR管或试剂污染。 注
Western-Blot中杂带较多有哪些原因?
1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。
Western-Blot中杂带较多有哪些原因
1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。
做得GST融合纯化总有杂带如何去掉
可以在平衡缓冲液里加一些盐,0.2-0.5MNaCl,这样可降低一些因离子作用带来的非特异吸附。同时在平衡液里加0.5%吐温等表面活性剂,这样应该有些改善。此外你也可以用阶段洗脱的方法,例如用5mM和10mM还原谷胱甘肽去分别去洗脱,看看有没有什么区别。还要注意的问题是超声破碎时注意功率和时间,避免
Western-Blot中杂带较多有哪些原因
1、封闭问题,可以选择牛奶封闭,并且封闭时间可以延长,4℃过夜都是可以的。2、抗体的非特异性过高,选择特意性强的抗体,单克隆抗体比多克隆抗体好。3、蛋白质降解。4、蛋白质亚型也一起曝出来。
做western显影出现很多杂带是什么原因
有很多种原因,举例如下:1.抗体浓度过高2.SDS造成非特异性结合3. 二抗试剂的非特异结合4.一抗特异性差推荐采用已经经过厂家验证的WB应用抗体,有图有真相像义翘的WB抗体一样,用起来才放心。另,最好放上自己的实验条件和结果图片,可以让大家帮你分析分析。
蛋白两次纯化后杂带反而变多,什么原因
很可能是蛋白降解,推荐考虑后续实验需求,尝试加一些蛋白酶抑制剂。
SDSpage凝胶电泳出现杂带是什么问题
SDS-PAGE 电泳过程中常见问题以及解决方法 2 Q:SDS-PAGE 电泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS(
SDSpage凝胶电泳出现杂带是什么问题
SDS-PAGE 电泳过程中常见问题以及解决方法 2 Q:SDS-PAGE 电泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS(
酵母双杂是什么?
酵母双杂交技术,它是通过利用转录激活因子GAL4的特性而建立的。GAL4由两个结构域组成,一个为N端的DNA结合域(DNAbinding domain,DBD),另一个是C端的转录激活域(active domain,AD),二者可以从核酸一级结构上分开而独立表达出有功能的结构域;当二者在物理空
什么是酵母双杂?
酵母双杂交技术,它是通过利用转录激活因子GAL4的特性而建立的。GAL4由两个结构域组成,一个为N端的DNA结合域(DNAbinding domain,DBD),另一个是C端的转录激活域(active domain,AD),二者可以从核酸一级结构上分开而独立表达出有功能的结构域;当二者在物理空
“进口羊杂”来历不明
3·15前夕,泸州市龙马潭区禧羊羊·羊庄被泸州市食药监局查出问题,执法人员现场发现回收油、过期调料、违规食品添加剂和来历不明的“进口羊杂”等。报道后,泸州市食药监局曾专门约谈该餐饮店负责人,对其进行了批评教育。24日,泸州市食药监局向该餐饮店下发《行政处罚意见书》,拟依法对禧羊羊·羊庄
杂散光的五种定义
目前,国际上很多学者都很重视杂散光,他们对杂散光的定义各异。下面介绍国内外学者对杂散光的几种定义。(1) ASTM的定义美国的ASTM认为:杂散光既难给出确切的定义,又难进行准确的测量。人们常将杂散光定义为在单色器额定通带之外的透射辐射能量与总的透射能量之比。(2) Richard的定义日本学者Ri
紫外杂散光标准品
可溯源标准品用于验证分光光度计杂散光规格。 描述 每种杂散光标准品都会在特定波长以下停止透光。在该截止点以下,任何测量值都可归于仪器杂散光。不满足仪器规格的杂散光测量值可能表示仪器灯源出现问题,会导致分析错误。提供下列标准品用于测定杂散光:氯化钾,截止点在 200
石墨炔杂化获进展
燃料电池具有零污染、能量转化效率高、适用范围广泛等众多优点,使其成为最具前景的新型能源转化装置之一。燃料电池的阴极氧还原反应(ORR)是一个动力学迟缓的过程,需要在催化剂的作用下才能输出有效的电流密度。传统的 ORR 催化剂主要为价格昂贵的铂类材料。在燃料电池发电系统中,燃料电池电堆成本占总成本
关于杂化的分类介绍
等性杂化:参与杂化的轨道完全相同的杂化叫做等性杂化。 不等性杂化:参与杂化的轨道不完全相同的杂化叫做不等性杂化。 杂化轨道的类型取决于原子所具有的价层轨道的种类和数目以及成键数目等。常见的有: sp杂化:sp杂化是指由原子的一个ns和一个np轨道杂化形成两个sp杂化轨道,每个sp杂化轨道各
染色体显带技术_-喹吖因显带(Q显带)
实验材料晾干的中期染色体玻片试剂、试剂盒喹吖因溶液McIlvaine缓冲液镜油弱荧光仪器、耗材玻片染色缸荧光显微镜实验步骤1.将晾干的中期染色体玻片放人盛有喹吖因溶液的玻片染色缸中,室温放置 5 min。2.在一个装有水的染色缸中反复浸沾洗涤玻片。再次用水清洗。空气晾干。如需要,可在避光、干燥处保存
“疑难杂症”的基因秘密
所谓“罕见病”顾名思义就是指那些发病率极低的疾病,又称孤儿病,也就是我们平时说到的疑难杂症,目前确认的罕见病有六七千种,约占人类疾病的10%,在这些疾病中,约有80%是遗传缺陷所致,而且重要的是多数都是单基因(例如α1-抗胰蛋白酶缺乏症)缺陷,而另一些是由于几个基因突变,这就为这类疾病的诊断和治
杂散光与仪器学理论
摘要:杂散光是紫外可见分光光度计等光学类分析仪器的重要性能技术指标之一,它是光学类分析仪器分误差的主要来源之一,它限制仪器对被分析样品的浓度的上限。 杂散光是紫外可见分光光度计等光学类分析仪器的重要性能技术指标之一,它是光学类分析仪器分误差的主要来源之一,它限制仪器对被分析样
杂化的基本信息介绍
在成键过程中,由于原子间的相互影响,同一原子中几个能量相近的不同类型的原子轨道(即波函数),可以进行线性组合,重新分配能量和确定空间方向,组成数目相等的新的原子轨道,这种轨道重新组合的过程称为杂化(hybridization),杂化后形成的新轨道称为 杂化轨道(hybrid orbital)。杂