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亲和素生物素系统:如何减少干扰更好地应用于免疫...

亲和素-生物素系统:如何减少干扰更好地应用于免疫检测-1-什么是亲和素-生物素系统(链霉)亲和素-生物素是免疫检测中常用的信号放大系统。亲和素是蛋清中常见的糖类蛋白,由四个相同的亚基组成。每一个亚基都包含一个生物素结合位点,因此一个理论上正常的亲和素能够结合4个生物素。亲和素与生物素具有非常强烈的亲和力,其解离常数大约是1.3*10-15M,是已知自然界中最强的非共价相互作用之一。亲和素的蛋白质结构非常稳定,即使在浓度高达8M的尿素溶液中,也能够维持结构的完整性,保持对生物素的亲和力。并且在结合生物素后,亲和素-生物素结构的稳定性进一步增强,研究表明,即使在浓度为8M的盐酸胍中,亲和素-生物素复合物依然能够稳定存在。另外,亲和素-生物素的结合与抗体-抗原的结合类似,有极高的特异性,能够在复杂的溶液环境中相互结合,因此,亲和素-生物素系统广泛应用在免疫检测中。其中应用最为广泛的方式是将亲和素包被在磁珠表面,生物素标记抗体。△生物素......阅读全文

生物素-亲和素系统介绍

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。生物素(biotin,B)

酶联免疫吸附实验(ELISA)

基本原理    1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这

酶联免疫吸附测定(ELISA)

基本原理    1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的

ELISA实验基本原理

基本原理  1971年Engvall和Perlma发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent aay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

酶联免疫吸附实验(ELISA) 全套解决方案

基本原理  1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗

酶联免疫吸附实验(ELISA)基本原理

基本原理  1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗

酶联免疫吸附测定的方法类型和操作步骤

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出

免疫酶组织化学技术

免疫酶组织化学技术 1.酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上,创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2.PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上,建立了非标记抗体法,先将HRP免

常见发光免疫分析技术的比较

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展,目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品,基本上可以分为:化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。   &n

时间分辨荧光免疫分析技术在食品安全领域的应用

随着分析方法的飞速发展,无论是食品中有毒有害物质,还是环境中痕量元素的检测,或者生物体内功能因子的分析,都迫切需要一种灵敏度高、快速准确、性能稳定的痕量分析方法。时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay,简称为TRFIA)是20世纪80 年代中期发展起

常见发光免疫分析技术的比较

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高,一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害),而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定,最终趋向于能够检测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

免疫组化常见问题及解决方法

当免疫组化染色没有出现预期结果时,应系统地查找原因,而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗

全球学者献技 ICAS 2017 光谱分析分会场被拉曼“占领”

  分析测试百科网讯 2017年5月7日,由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)和中国化学会(CCS)主办的2017 年国际分析科学大会(ICAS 2017)光谱分析分会场的报告继续进行。分析测试百科网注意到,本届光谱分析分会场的报告从数量上来说,主体为拉曼及相关技术。光谱分析分会场主持人,韩国汉

免疫组化染色步骤

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理:    抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysin

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

流式细胞术在血液学中的应用

  DNA倍体分析及细胞周期分析    在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成,但DNA含量仍为2N,为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞

细菌学诊断新技术

 随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法

时间分辩荧光技术在乙型肝炎血清学标志物临床检验中...

时间分辩荧光技术在乙型肝炎血清学标志物临床检验中的意义  慢性乙型病毒性肝炎( Chronic Viral Hepatitis B,CH-B )是一种严重危害人类健康的疾病,我国是病毒性肝炎的高发区,乙型肝炎病毒( HBV )感染率高达 57.63% ,即全国至少有  6 亿人感染过 HBV

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-3

 (四)磁性分离法  1975年,Hersh报道了用磁化分离技术分离血清狄高辛放免测定的B、F后,受到了广泛的重视。近年来国内外许多学者对磁化颗粒的制备进行了系统地研究,应用于B与F的分离,并取得了引人注目的进展,使放免的B、F分离不再使用离心,缩短了放免操作时间,便于放免自动化测量。磁性分离的具体

蛋白质纯化的方法选择

  1 蛋白纯化的一般原则  蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重

侧向免疫层析的“探针”新机遇

在谁将成为国内侧向免疫层析检测(POCT)的巨头?(点击可直接进入该文章)中,曾对侧向免疫层析(Lateral flow immunoassay,LFIA)检测技术的基本原理和发展现状做过比较系统的介绍。如今有超过一半的厂家选择荧光作为标记探针。其中,我们最为熟知的胶体金法试纸条就是利用颜色信号进行

细菌学诊断中的新技术

随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法,

第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举办(上)

  分析测试百科网讯 2015年8月16日,中国仪器仪表学会分析仪器分会样品制备专业委员主办的第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举行。本次大会与中国仪器仪表学会分析仪器分会2015学术年会同期举办,参会200余人。张玉奎院士担任会议名誉主席,关亚风研究员担任会

生物制剂中宿主残余DNA检测技术与标准的发展趋势

生物制品中残留DNA检测标准的变化2015年3月底,中国食品药品检定研究院网站的国家药品标准物质目录中新增加了一个编号为410001的产品:CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。这个由中检院与中科院联合研发,由生物制药企业参与标定的试剂盒与现行美国药典(USP)建议的检测方法同步

抗原抗体反应的应用领域

  免疫动物  (1)抗原:免疫动物是制备抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原,如果使用半抗原如小分子激素等,必须与大分子载体连接。抗原的用量视抗原种类及动物而异,—次注射小鼠可以少至几个微克,免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加,从几百μg/次至几mg/次。  〔2