等温多自配引发扩增技术简介
等温多自配引发扩增(IMSA)即isothermal multiple self-matching-initiatedamplification,是对目前核酸分子检测技术手段的改进和补充,具有简单、快速、高灵敏性高特异性的优势。IMSA最大特点就是,在等温核酸扩增过程中会产生多倍数的能自我配对继而引发循环扩增的特殊核苷酸结构。这种结构的大量产生富集,使得随后循环扩增引发几率明显增加,继而使得扩增效率提高,最终使得检测灵敏度提升。就理论上而言,IMSA的灵敏度应该要高于LAMP的灵敏度。在结果判定上,同LAMP技术一样,IMSA能够通过观察副产物焦磷酸镁白色沉淀、于扩增前或后加入显色剂观察颜色变化等简单措施进行判定。在引物设计上,IMSA与LAMP类似都利用了混合式引物的设计思路。所谓混合式引物,是指一条引物由目的基因同一条链的两段序列组成,其前段碱基顺序与靶位链的序列反向互补,后段则与靶位链序列同向。因此,混合式引物的扩......阅读全文
3分钟读懂环介导等温扩增(LAMP)那些事儿
什么是LAMP? 环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是Notomi等人于2000年提出来的一种新的核酸扩增技术。针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)作用下,可以在
随机扩增多态性DNA技术简介
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷
重组酶聚合酶扩增(RPA)技术简介
核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA
PCR扩增仪简介
PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪,是利用PCR(Polymerase chain reaction,聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备,被广泛运用于医学、生物学实验室中,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制
关于等温滴定微量热计的简介
等温滴定微量热计是一种用于化学领域的分析仪器,于2006年1月1日启用。 一、等温滴定微量热计的技术指标:控温范围:2~80℃控温精度:<±0.001℃/24h最小响。 二、等温滴定微量热计的主要功能: 1.生物大分子―配体结合(蛋白质相互作用) 2.生物大分子-生物大分子结合(蛋白和D
关于等温滴定量热法的简介
等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,简称ITC),是一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法,它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。 用途:获得生物分子相互
核酸扩增—链置换扩增技术(SDA)
SDA是一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术,采用标记的两种不同荧光基团的探针。在SDA过程中,该探针被掺入到双链扩增产物中,由限制内切酶的酶切使淬灭基团与荧光基团分开,从而释放荧光,用荧光偏振检测法定量检测。SDA较之PCR有更高的扩增效率,耗时仅30min。其基本系统包括一种限制性核酸内
自平衡电桥简介
自平衡电桥,或称半自动电桥。其原理是:利用电流变量器和运算放大器把不平衡信号放大后,仍旧反馈到电桥电路中去补偿其差值,从而使电桥自动地维持平衡。这类电桥器可以做到很高的测量精确度和很宽的量程。但是仍旧要用人工来帮助调节平衡,所以测量速度不能很快。
自配标准溶液须具备的基本要求
1. 应采用洁净的优质硬玻璃容量瓶作最终体积的容器。 2、为保证标准溶液配制的可靠性和准确性,实验室设备和环境设施应符合其要求,(应有监测、控制和记录环境条件。特别对灰尘、电磁干扰、放射、温度、湿度、供电等)。 3.高纯度的溶质或对照物(如金属、金属氧化物或金属化合物;酸、碱、金属有机化合物
恒温核酸扩增技术的扩增速度
由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行,相比较于PCR不同温度之间的循环,恒温扩增不需要反复的升温降温过程,有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如:环介导恒温核酸扩增(LAMP),重组聚合酶扩增法(RPA)以及切刻内切酶恒温扩增(NEAR)。目前英国公司optigene已经成功的改造了
核酸扩增—转录介导的扩增技术(TMA)
TMA是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下来扩增RNA或DNA的技术,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链RNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RN
交叉配血试验的简介
交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者血清与供血者红细胞悬液作试验以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体。又称直接配合或主侧配合;后者则用供血者血清与受血者红细胞作试验以发现供血者血清中是否有不合抗体,又称间接配合。 在血型鉴定的基础上,通过交叉配血试验进一步证实受血者和供血者
交叉配血试验的简介
交叉配血是确定能否输血的重要依据,两侧均不凝集可输血。将献血人的红细胞和血清分别与受血人的血清和红细胞混合,观察有无凝集反应,这一试验称为交叉配血试验。 交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者血清与供血者红细胞悬液作试验以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体。又称直接配合
交叉配血试验的简介
交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者血清与供血者红细胞悬液作试验以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体。又称直接配合或主侧配合;后者则用供血者血清与受血者红细胞作试验以发现供血者血清中是否有不合抗体,又称间接配合。
PCR基因扩增仪简介
聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction)聚合酶链式反应 聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应
PCR基因扩增仪简介
分类: PCR仪的种类总体来说可以分为两大类:PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪。用途: PCR仪是医学,农业,食品,医药,检验检疫等领域的实验室常规仪器设备。PCR仪原理: 为双链dna在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在dna聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对
梯度基因扩增仪简介
梯度PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。PCR反应能否成功,退火温度是关键,梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置,根据结果,一步就可以摸索出最适反应条件。一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称之为梯度PCR仪。因为被扩增的
多酶恒温核酸快速扩增技术MIRPA的引物与探针设计指导
近期,顶级学术期刊连发两篇顶级论文,上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作!这次,他在一月内,分别在《Nature》、《Science》连发两篇论文!他将CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(aM,10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的SHERLOCK技术。而
多酶恒温核酸快速扩增技术MIRPA的引物与探针设计指导
近期,顶级学术期刊连发两篇顶级论文,上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作!这次,他在一月内,分别在《Nature》、《Science》连发两篇论文!他将CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(aM,10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的SHERLOCK技术。而这其
自平衡电桥原理简介
自平衡电桥电桥的关键部分是平衡模块。由于电桥本身并存在不 平衡,即使在传感器输入为零的情况下,电桥的输出也不会为零,而是一个固定的信号,这个固定的不平衡信号大约为几毫伏至几十毫伏,有时甚至比传感器信号要大得多。在水分检测过程中,这个固定信号会使放大器较早地达到饱和,从而影响电容传感器信号的放大。
基因扩增技术的技术特点
特异性高首次报导的PCR所用的DNA聚合酶是大肠杆菌的DNAPolymerase I的Klenow大片段,其酶活性在90℃会变性失活,需每次PCR循环都要重新加入Klenow大片段,同时引物是在37℃延伸(聚合)易产生模板—引物之间的碱基错配、致特异性较差,1988年Saiki等从温泉水中分离到的水
分子诊断经验篇:如何应对等温扩增时出现的假阳性问题
等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了唏嘘、质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显
关于超灵敏等温滴定微量热仪的简介
超灵敏等温滴定微量热仪是一种用于生物学领域的计量仪器,于2016年8月22日启用。 一、超灵敏等温滴定微量热仪的技术指标: 1.量热反馈模式:功率补偿 2.噪音水平:不高于0.2ncal/s(不高于0.8nW); 3.操作温度范围:2℃-80℃; 4.响应时间:不高于10秒; 5.样品
追随诺奖的脚步:细胞自噬基因缺陷引发疾病
2016诺贝尔生理/医学奖颁给了细胞自噬这种重要的生物进程,近期来自北京大学医学部,中科院生物物理所的研究人员报道了细胞自噬基因Epg5缺陷导致小鼠视网膜色素样变的重要研究成果。 这一研究成果公布在Autophagy 杂志,文章的通讯作者是中科院生物物理所研究员张宏和北京大学医学部基础医学院免
关于多焦点多光子显微技术的简介
多交点多光子显微技术(multifocal multiphoton microscopy,MMM)提高了激发光能的利用率和成像速度,可以实现样品的三维快速多光子激发荧光显微成像,并且具有对活体样品损伤小,成像深度大,图像信噪比高等优点。 荧光显微技术已经成为生物医学领域的重要研究工具,激光扫描
关于多焦点多光子显微技术的简介
多焦点多光子显微技术是 20 世纪末发展起来的, 它与单光束激光扫描显微镜 相比最大的变化是: (1) 需要一 个光束分离装置(如右图)产生多个焦点; (2) 需要一个探测器能够探测从所有焦点处发出的荧光信号 。 多焦点多光子显微技术采用旋转微透镜盘 、微透镜阵列 [6]、级联分束镜 [7
关于盐水配血法的简介
盐水配血法是临床上常用的一种交叉配血方法。优点:简单快捷。缺点:只能检出不配合的完全抗体,不能检出不配合的不完全抗体,且安全性较低 盐水配血法是临床上常用的一种交叉配血方法。 优点:简单快捷。 缺点:只能检出不配合的完全抗体,不能检出不配合的不完全抗体,且安全性较低 [1]。
等温滴定量热仪的技术指标
短期噪音水平:0.5纳卡/秒 (2 纳瓦)。 基线重复性:优于±20纳瓦/小时 。 工作温度: 2 ℃ 到 80 ℃。 最小响应时间: 17秒 可选择化学反应的响应时间: 多种选择(ZL技术) 。 搅拌速度有多种选择。 控温方式:Peltier电子控温方式,快速达到控制温度,不需水浴。
恒温核酸扩增技术通量
在实际的产业化中,分子诊断仪器的通量往往至关重要。对于qPCR而言,由于引物设计的成熟和荧光通道的多样性,往往可以比较好的实现高通量检测。由于恒温核酸扩增技术引物设计较为困难,单一的反应温度会造成引物和模板,引物与引物之间的非特异性链接和扩增,使得恒温扩增的检测通量受到限制。但同时也得益于反应温
基因扩增仪技术特性
1、加热模式:立体膜加热技术 2、制冷技术:新一代“peltier”效应“半导体热泵制冷” [1] 3、控温及管理:16位微机智能式 4、DTC型基因扩增仪主要由外壳、变温反应腔、散热系统、加热系统、制冷系统、电子控制系统、供电系统、人机界面等各部分组成。 5、单机操作,也可与电脑联机使