31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（二）
十二、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备E.coli DH5α制备主要操作步骤：1）挑取受体菌（DH5或DH10B）的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2）取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）；3）将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；以下步骤需在超净工作台和冰上操作；4）吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；5）4℃下3000 g冷冻离心5分钟；6）弃去上清，加入100μL预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；7）4℃下3000g冷冻离心5分钟；8）弃去上清，加入100μL预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；9 ）细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15%-20%......阅读全文
分子生物学常用实验技术（十八）
五、操作步骤：（一）、模板制备1、M13 单链模板制备：在转化入合适的大肠杆菌宿主菌且在含有指示剂如X-gal/IPTG 的培养基上铺板之后, 含有M13 重组子的细胞将表现出无色的"噬菌斑"，事实上受感染的细胞并非被噬菌体溶菌或杀死，出现噬菌斑是因为被感染的细菌在生长速度上比其周围未感染的
分子生物学常用实验技术（十二）
第九章分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总D
分子生物学常用实验技术（六）
一、材料 提纯TMV 病毒液（10mg/ml）。二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 缓冲液，无RNA 酶的双菌水。四、操作步骤1、取一eppendorf 管加入提纯
分子生物学常用实验技术（十）
第二节RFLP 技术一、材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。二、设备 电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5 只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4 块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸，eppendorf 管(0.5ml)若干。三、试剂：1、限制性内切酶(BamHⅠ, Ec
分子生物学常用实验技术（十六）
（三）电泳：1、预电泳（1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。（2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE 缓冲液。（3）稀释10×TBE 缓冲液至1×TBE，将该缓冲液加入上下二个电泳
分子生物学常用实验技术（四）
第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节概述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外
免疫学实验非二硝基氯苯（DNCB）介绍
二硝基氯苯（DNCB）介绍： 二硝基氯苯（DNCB）是一种化学制剂，属半抗原，能与上皮蛋白的可溶部分共价结合成为完全抗原。 DNCB是淡黄色结晶粒末，可溶于丙酮。用0.1 毫升（含1-2mgDNCB）滴于2cm直径的圆环内上臂内侧皮肤表面，使之均匀涂布，待丙酮挥发后取下圆环。14天后再将0.1
分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作
【实验目的】 (1)了解实验的常规仪器、设备、耗材。 (2)掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。 【实验内容】 一、验室的常规仪器、设备 (一) 温度控制系统： 1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要，必须具备不同控温级别的冰箱，最常
分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作
实验目的】（1）了解实验的常规仪器、设备、耗材。（2）掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。【实验内容】一、验室的常规仪器、设备（一） 温度控制系统：1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要，必须具备不同控温级别的冰箱，zui常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃适合储存某些溶液、
微生物实验室技术免疫学技术
免疫学技术通过抗原和抗体的特异性结合反应,再辅以免疫放大技术来鉴别细菌。免疫方法的优点是样品在进行选择性增菌后,不需分离,即可采用免疫技术进行筛选。由于免疫法有较高灵敏度,样品经增菌后可在较短的时间内达到检出度,抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成。此技术对操作者要求也不高,是目前为止基层单位应用
免疫学技术专题：组织病理实验（一）
标签： 组织病理组织学技术包括、组织学制片技术、胚胎学制片技术、组织化学技术、荧光组化及免疫组化技术、组织培养技术、各种特殊显微技术、电镜组织学技术。组织学技术不但应用于组织学本学科，并且广泛应用于其他多学科，如生物学、解剖学、病理学、肿瘤学、法医学、临床诊断学等。实验方法石蜡切片法冰冻切片实验方法
有关PCR技术的dNTP的质量与浓度
dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNT
分子生物学常用实验技术（page－3)
分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN
分子生物学常用实验技术（page－2)
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
分子生物学常用实验技术（page－1)
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分
离子色谱仪的结构与实验技术（二）
离子色谱仪实验技术一、溶剂和样品的预处理：1、去离子水的制备：离子色谱分析所用水应是经过蒸馏的去离子水，通常称为重蒸去离子水或二次蒸馏水。2、流动相的配制和过滤：配制流动相时一定要用重蒸去离子水，以防离子污染。配制好的流动相要用0.45μm以下孔径的滤膜过滤，防止流动相中有固体小颗粒堵塞流路。流动相
分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作（一）
【实验目的】 （1）了解实验的常规仪器、设备、耗材。 （2）掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。 【实验内容】 一、验室的常规仪器、设备 (一) 温度控制系统： 1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要，必须具备不同控温级别的冰箱，最常使用的有：4℃、
免疫学实验二硝基氯苯斑贴试验介绍
二硝基氯苯斑贴试验介绍： 皮肤试验是用于测定机体细胞免疫功能最常用的体内试验方法。其本质属于迟发型变态反应(第Ⅳ型)。当机体被一些细菌(如结核分枝杆菌、布鲁菌)、病毒、或真菌等显性或隐性感染，或接触一些小分子物质、半抗原物质，当与体内组织蛋白接合成为完全抗原时机体就会产生针对这些抗原物质的特异性致
清华实验室爆炸与氢气有关
前天上午，清华大学何添楼一实验室起火，该校理学院化学系博士后孟祥见（男，32岁，安徽人）死亡（本报昨日报道）。北京市安监局官网信息显示，孟祥见在实验室内使用氢气做化学实验时发生爆炸，事故原因正在调查中。 学生自发前来悼念 昨天下午，何添楼前的警戒线已经解除，有三个人到何添楼前进行悼念。其中一
免疫学测定技术的应用与研究进展
现代免疫学测定技术源于标记技术的发展。继1941年Coons等创立荧光素标记抗体技术(f1uorescent antibody technique)以来，上个世纪50年代末60年代初,Yalow等创立了放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)技术，1966年由美国和法国学者又同时报
PCR实验技术（二）
【方法】方法一、基本的PCR方法下面介绍的基本PCR方法可作为任何PCR扩增的一般指导和出发点。由于各种PCR反应条件（如PCR扩增次数、温度、Taq DNA聚合酶的浓度、引物、氯化镁以及模板DNA）变异极大，应根据具体情况，对各种PCR反应条件进行相应调整。1．按以下次序，将各成分加入0.2 ml
与T细胞识别、粘附、活化有关的CD分子（二）
（一)T细胞受体 T细胞受体（T cell receptor,TCR或Ti)是T淋巴细胞表面识别外来抗原与自身MHc Ⅰ类抗原（或Ⅱ类抗原)复合物的受体，在同种异体移植中TCR也识别单独的非已的MHC抗原。目前已经证实，TCR在细胞表面与CD3密切结合在一起组成TCR/CD3复合物，TCR
免疫学实验二淋巴细胞毒试验介绍
淋巴细胞毒试验介绍： 当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时，可表现出破坏和溶解靶细胞的特性，称为淋巴细胞毒作用(cytotoxicity)。靶细胞可以是肿瘤细胞或其它组织细胞。淋巴细胞杀伤靶细胞的方式可通过直接杀伤或产生淋巴因子破坏靶细胞。本试验方法有形态检查法和同位素释放法两种。前者不需特
免疫学实验二硝基氟苯皮肤试验介绍
二硝基氟苯皮肤试验介绍： 皮肤试验是用于测定机体细胞免疫功能最常用的体内试验方法。其本质属于迟发型变态反应(第Ⅳ型)。当机体被一些细菌(如结核分枝杆菌、布鲁菌)、病毒、或真菌等显性或隐性感染，或接触一些小分子物质、半抗原物质，当与体内组织蛋白接合成为完全抗原时机体就会产生针对这些抗原物质的
免疫学实验免疫学检测介绍
免疫学检测介绍： 免疫学检测是机体识别“自身”与“非己”抗原，对自身抗体形成天然免疫耐受，对“非己”抗原产生排斥作用的一种生理功能的检测。正常情况下，这种生理功能对机体有益，可产生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和稳定的免疫保护作用。在一定条件下，当免疫功能失调时，也会对机体产生有害的反应和结果，
分子生物学实验的品质选择——分子生物学实验用水
Merck Millipore 是世界*超纯水生产品牌，生产产品具有始终如一的高品质，实验重复性优异。纯水是一种生化试剂，为了给广大实验者在日常实验中提供便利，保证无意外发生，Millipore推出了分子生物学瓶装水。该瓶装水具有以下特点可以保证您的分子生物学实验顺利进行：
免疫学知识提纲（二）
一。 抗原分子的理化特性 1．化学性质：相对大分子：一般分子量越大，表面抗原决定簇越多，化学结构越复杂, 并在体内不易被降解。结构复杂性；分子构象和易近性： 抗原决定基的位置是否易与免疫细胞的抗原受体接触。2。 物理状态： 多聚体蛋白质的免疫原性强于单体蛋白； 颗粒性抗原强于可溶性抗原。抗原的分
种子与幼苗实验（二）
（2）小麦（或水稻）颖果的形态结构（图 5 ）：按观察玉米颖果的方法和步骤观察小麦颖果的外形，小麦籽粒较玉米小，呈椭圆形，具腹沟，顶端有一丝单细胞的表皮毛——果毛，其他方面和玉米相似。然后取小麦纵切片在显微镜下观察其胚的结构，基本上和玉米相似，主要不同点是小麦胚轴的外侧有一小型的外胚叶。水稻
实验离心技术进展（二）
最主要的离心机制造商： 美国： ·Beckman（现已与Coulter 公司合并为Beckman-Coulter） ·Sorvall（早期为Dupont Sorvall 后独立为Sorvall 现已与德国Heraens 公司、CARR 公司和Jewett 合并为Kendro,现属于Thermo－El
一些分子生物学实验小技术汇编
1．保存菌种保存菌种或长时间放置的培养板应先划板活化菌种，挑取分隔良好的单 克隆接种于2-10 ml ＬＢ中（如菌种含质粒则应加抗生素）３７摄氏度快摇 ８小时，按0.1%-0.5% 比例转种，培养基的量不应超过锥瓶的0.25容量，以 保证足够的通气。用O.D.600 测菌密度时，读数值在0.1-0.