攻克多重PCR之难（上篇）
多重PCR能够在提高通量的同时节省样品降低成本，它需要耗费更多的时间和精力，同时也会给用户回报更丰富的数据。本文介绍了一些实验技巧和商业化工具，希望能帮您轻松获得好结果。 PCR 的重要性毋庸赘述，这一诺贝尔获奖技术的普及带动了现代基因组学、鉴定技术、医疗诊断等领域的发展。如今，PCR几乎是每个实验室必备的通用技术，不过要跑好一个PCR也并非那么简单，由于PCR反应很灵敏，PCR的效果很容易受到污染和脱靶效应的影响。我们在设计PCR实验时须得将引物设计、反应条件和酶的选择一一考虑周全。这一点在多重PCR中尤为明显，因为多重PCR需要在一个管中同时检测多个目标(通常二至五个)。多重PCR应用也很广泛，可以用来做基因表达分析、SNP分型、STR分型等鉴定以及病原菌检测等等。 多重PCR的反应数相对较少，所消耗的试剂也较少，是一个颇为经济的选择。人们往往选用多重PCR来处理临床样本等珍贵样本，或者用来增加实验通量，......阅读全文
多重PCR反应的优化方向反应条件的优化
由于在一个多重PCR反应体系中有多对引物,而且扩增的模板片段长度也不尽相同,所以各对引物的扩增效率和扩增速度也不相同。由于多重PCR反应总是遵循较小片段优先扩增的原则,各对引物所要求最佳PCR条件也不尽相同(设计多对引物进行多重PCR时,应使各引物所需PCR扩增条件尽可能一致),因此在选择多重PCR
运用多重－PCR－检测营养不良基因缺失实验
本单元所讲的是用来诊断营养不良基因缺失的一种多重 PCR 方法。许多缺失末端能被确定，依据翻译可读框的结果来预测疾病（如 DMD 与 BMD) 的严重程度。实验材料反应混合物A、B 和 C试剂、试剂盒Taq DNA 聚合酶DNA 模板石蜡油溴化乙锭的微型琼脂糖胶电泳缓冲液10 X 胶用载样缓冲液仪器
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（2）
多重 PCR反应的基本原理DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较少的非特
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（二）
多重 PCR反应的基本原理DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较
运用多重－PCR－检测营养不良基因缺失实验
实验材料 反应混合物A、B 和 C 试剂、试剂盒 Taq DNA 聚合酶 DNA 模板 石蜡油
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（4）
琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖 . 长度彼此相差 30–40bp 的多重 PCR 产物在通常使用的 SeaKem 或 NuSieve(FMC BioProducts) 3% 的琼脂糖凝胶可以很好的区分开。在低电场强度下过夜电泳可以优化每个 PCR 产物条带的电泳效果，特别是当 PCR 产物小于 4
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（3）
多重 PCR反应循环条件的优化延伸温度（步骤 5 ， A-C ） . Figure 2c 展示了当加入相等量 (0.4 μM each) 的四种用于扩增 Y 染色体上不同基因的引物进行多重 PCR 时，用程序 A 和程序 B 扩增得到的结果 (Table 2) ，程序 B 有更高的延伸温度 (72
应用多重PCR方法鉴定RHD基因型的研究
作者：徐华1，叶世辉1，王宝燕2，刘孟黎1，吴大洲1，贺晨1 作者单位：(1. 陕西省血液中心血型研究室，陕西西安710061;2. 西安交通大学医学院第一附属医院输血科，陕西西安710061) 【摘要】 目的建立一种可靠的PCR方法，用于RHD血型基因型的研究。方法根据RHD血型基因的
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（三）
dNTP和MgCl 2 的浓度（步骤 5D）.dNTP. 用引物混合物 Y-4 检测了多重 PCR 反应中 dNTP 浓度的影响。氯化镁浓度保持恒定 (3 mM) ，而 dNTP 的浓度从每种 50 μ M 逐渐增加到每种 1200 μ M(Figure 4b) 。当 dNTP 浓度为每种
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（1）
O. Henegariu, N.A. Heerema, S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. VogtIndiana University, Indianapoils, IN, USA and Heidelberg University, Heidelberg, Germ
Luminex－MultiCode－RTx－技术解析——如何进行多重PCR检测？
本周 Diasorin 索灵18亿美金收购Luminex的确引起蛮大轰动和反响，luminex自身老牌企业科研和诊断通吃，免疫和分子通吃。四大技术加持，今天我们先看看MultiCode®，如何实现独家ZL的多重PCR检测！Luminex的 MultiCode® 产品为基于实时PCR和多重 PCR 的
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（一）
O. Henegariu, N.A. Heerema, S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. VogtIndiana University, Indianapoils, IN, USA and Heidelberg University, Heidelberg, Germ
我科学家取得重大技术发明：攻克PCR技术缺陷
中科院上海生科院生化与细胞所日前宣布，该所洪国藩院士的基础科学理论研究取得重大技术发明。经过长期DNA基础理论的潜心研究，成功研发出低温封闭多级PCR（LcnPCR）技术，克服了普通PCR技术的自身缺陷，具有超高灵敏度和准确性，并能排除环境的交叉污染。 聚合酶链反应（PCR），是上世纪80年
优秀博士的培养为什么如此之难？
目前我国在校博士生已超过25万人，每年授予博士学位的数量超过5万，比美国多出1万多。自2008年起，我国就已成为全球最大的博士学位授予国。 如此庞大的博士生规模，质量又如何呢？ 创新性是博士培养质量的主要评价指标，而目前这一指标主要体现在有足够国际影响力的学术论文发表上，论文的引用
沉重的人霾之战－治理之难，难以想象
今年的雾霾比以往来得更早一些，和过去一样，雾霾成为人们讨论的焦点，网络上出现不少有关雾霾的段子。随着这种极端天气的常态化，它对日常生活的影响越来越明显，人们竞相传播有关雾霾危害的常识。在雾霾面前，官方猝不及防，普通民众也毫无招架之力，人霾之战注定持久且艰难。 有几个细节值得注意，一个是APEC
涨工资呼声折射美国产业转型之难
在今年9月2日的美国“劳工节”来临前，纽约等约60个城市的麦当劳、肯德基等快餐连锁店员工举行罢工，要求大幅提高最低时薪标准。但是，短期内美国要给低薪者大幅加薪仍缺乏有利条件。低收入者大量存在反映了美国产业转型的困境，涨工资的呼声折射出美国产业转型之难。 在富兰克林·罗斯福总统任内，美国国会
地方高校评院士之难，难于上青天！
本月，两院院士增选名单成为全国科教界关注的焦点。 名单一出，上至顶尖高校和科研机构，下至普通地方高校，几乎都第一时间报道了相关新闻。“热烈祝贺XX教授当选院士、XX校友当选院士”，在各大高校新闻网和官方微信公众号中频繁出现。 不过，与顶尖名校和顶尖科研机构不同的是，大多数普通地方高校报道并非
多重PCR在遗传病诊断方面的应用基因重排
免疫球蛋白( immunoglobulin,Ig)和T细胞受体( T cell receptor,TCR)位点包含很多不同的V、D、J基因片段,参与早期白细胞分化的重排过程。VDJ片段重排由重组酶复合体介导,其中RAG1和RAG2蛋白通过识别、切割DNA重组信号序列( recombinatio
应用多重PCR方法鉴定RHD基因型的研究(2)
2结果 2.1多重PCR方法的反应结果应用多重PCR方法可以鉴定不同的RHD基因型(图2)。根据扩增条带判断结果，D/d型：目标条带为3条，分别为208bp、263bp和1920bp;d/d型：目标条带为2条，分别为208bp和1920bp;D/D型：目标条带为2条，分别为208bp和263b
第二章：4－分钟教你学会多重－PCR－引物设计
多元 PCR (多重PCR，Multiplex PCR，MPCR) 是指在一个 PCR 反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的 PCR 反应。这项技术非常有用，他不仅可以提高 PCR 的产率还能提高 DNA 样品的利用率。另一种形式的 MPCR 是组合 PCR, 组合 PCR 是在同一
多重PCR在遗传病诊断方面的应用抗性基因检测
抗生素的广泛使用导致具有耐药性微生物的增多,比如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( methi-cillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、万古霉素抗性肠球菌( vancomycin resistant enterococcl)和多重耐药结核分枝杆菌( mu
国人食之难安，何止是监管者的耻辱
民以食为天，食以安为先。然而食之安全，谈何容易！近来国内粮价涨声一片，甚至创出历史新高。出于利益驱使，个别粮食经营者不讲良心道德，掺杂使假，以次充好，大发不义之财。记者最近在东莞各大农副产品批发市场调查，揭开了大米中暗藏的玄机：一袋袋爬满米虫、发黄且发霉的大米经抛光，掺入好米，冒充“品
基于－PCR－的基因分型实验——无放射性的多重分析SSLP
实验材料模板DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液混合引物Taq DNA 聚合酶轻矿物油Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen）2X 甲酰胺载样缓冲液M13序列泳道内标TBE 缓冲液预杂交液地高辛标记的探针Oligo 清洗缓冲液阻滞液碱性磷酸盐连接的抗地高辛Fab片段检测
多重PCR中的常见问题短片段产物条带较弱如何处理？
①缓冲液浓度从1×增加至1.5×或2×; ②降低退火或延伸温度; ③增加弱条带相对应的引物量; ④同时应用以上3种策略。
多重PCR中的常见问题长片段产物条带较弱如何处理？
①增加延伸时间; ②增加退火和/或延伸温度 ；③增加弱条带相对应的引物浓度;④降低缓冲液浓度至0.7×~0.8×,同时保持MgCl2浓度1.5~2mmol/1L不变; ⑤同时应用以上4种策略
多重PCR在遗传病诊断方面的应用DMD和BMD的检测
Duchenne型肌营养不良症( Duchenne muscular dystrophy,DMI)是一种很常见的人类遗传病,为X性染色体隐性遗传性肌肉变性疾病,50%的病例由基因缺失引起,大约每3500个男婴就有一个发病,1/3的病例由新的突变所致,肌营养不良基因长200kb,至少有70个外显子,被
多重PCR中的常见问题出现非特异产物如何处理？
①若非特异产物是长片段,增加缓冲液浓度至1.4×~2.0×;②若是短片段,降低缓冲液浓度至0.7×~0.9×; ③逐渐增加退火温度；④减少模板和聚合酶的用量; ⑤增加Mg2至3mmol/L、6mmol/L、9mmol/L、12mmol/L-,同时保持dNTP浓度恒定在200umol/L: ⑥同时应
多重PCR技术的应用一个反应中检测多个病原体
本次新冠疫情防控工作中，多次强调了呼吸道病原体鉴别检测的重要性。近期，圣湘生物利用多重PCR技术开发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒、乙型流感病毒多重核酸检测试剂盒(荧光PCR法)已获得欧盟认证机构颁发的CE认证证书。另外，还有六项呼吸道病原体核酸检测试剂盒以及七项呼吸
多重PCR在遗传病诊断方面的应用用于遗传病的检测
用于其它遗传病的检测 Pici等人对囊性纤维化( cystic fibrosis,CF)基因突变进行了筛选研究,用4对外显子引物进行多重PCR扩增,然后用限制性内切酶消化PCR产物,再进行垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳,检查15例发现有3例发生了基因突变。Pior等设计了8对引物同时检测DMD/BMD
多重PCR在遗传病诊断方面的应用遗传修饰生物中的应用
在遗传修饰生物( genetically modified organisms,GMO)中的应用近年来可见应用多重PCR技术在转基因成分定性和定量检测的报道。陈文炳等用多重PCR方法在反应体系中加入13对引物同时检测转基因矮牵牛与阳性对照质粒中的1~3个外源基因,包括花榔菜花叶病毒( caulif