原位杂交的主要程序
1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育15分钟；8） PBS清洗2次，每次3分钟；9） 0.2N的HCl孵育30分钟；10）PBS清洗2次，每次3分钟；11）0.25%无水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分钟；12）PBS清洗2次，每次5分钟；13）预杂交缓冲液孵育30分钟；14）准备核酸探针混合物：使用预杂交缓冲液稀释探针，85℃加热5分钟，置于冰块中10分钟；15）杂交；第二天16）将玻片置于SSC中2次，每次5分钟以去除封片；17）PBS清洗3分钟；18）RNA酶A溶液中（或0.1-1ng/mlPBS中），37℃孵育30分钟；19）PBS清洗5分钟；2......阅读全文
原位杂交实验仪的用途和特点
产品用途： 原位杂交仪采用微处理技术结合PID控制方式，实现12张玻片的变性和杂交过程。密封式上盖和加湿部件确保杂交环境更加理想，集成了变性/杂交，杂交，多步运行三种操作模式，适用于多种原位杂交实验。 产品特点： 1.支持断电恢复功能，运行过程中出现意外断电，在电力恢复后可按原定程序自动恢
cRNA探针在原位杂交组织化学
Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针
原位杂交组织化学实验技术6
二、快速原位杂交细胞化学技术 原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐，实验周期长。国外Liesi等（1986）和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素（Biotin-streptavidin）胶体金系统进行原位杂交，得到了快速满意的结果，全部实验可在数小时内完成。 作用把含某种多肽
原位杂交组织化学实验技术5
（8）荧光显示： ①生物素标记DNA探针的荧光显示。 1）应用PBS含5%无脂干奶（5μl每张盖片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆盖孵育5min室温，以封闭非特异性结合部位。 2）移除多余液体，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在湿
常用电镜原位杂交技术的基本程序
原位杂交技术自创立以来，为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病理学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料，发挥了其他技术难以取代的作用。但不论是使用放射性核素探针，还是非放射性探针，大部分研究工作都还限于光镜水平。为了对检测的靶核酸进行更精确的亚细胞定位，以及能
关于荧光原位杂交的基本信息介绍
荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术，是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。
原位杂交中的放射自显影技术
实验方法原理 将同位素标记探针与固定于显微镜载玻片上的细胞进行杂交，然后通过放射自显影将杂交位点显影。 实验材料 糖原 琼脂糖
原位杂交组织化学实验技术4
二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 （一）光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针，使其最终浓度为0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦卤素灯下，距离光源20c
原位杂交组织化学实验技术2
DNA合成仪的诞生使制造寡核苷酸探针成为可能，与上述探针不同的是寡核苷酸探针不是克隆性DNA探针，它是由DNA合成仪依照所需杂交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，价格低廉的优点，也可进行放射性与非放射性标记，但其特异性不如克隆性探针强，亦不如其杂交信号高。 原位杂交组织化学技术在近20年的发展
什么是荧光原位杂交有什么用？
原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素
原位杂交组织化学杂交前处理
杂交前处理的目的在于提高组织通透性。增加靶核酸的可及性以及防止RNA或DNA探针与组织细胞或载玻片之间的非特异性结合，从而增强杂交信号，降低背景。杂交前处理的具体方法和步骤因所采用的固定剂、组织标本以及探针不同而异。用温和的非交联固定剂固定的细胞培养标本和冰冻切片，不需经特殊的杂交前处理，一般均能获
原位杂交HPV－DNA检测技术应用及体会
原位杂交技术是新近开展的一项新技术，其原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基对互补配对原理，与组织切片、细胞制片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。本文就HPV DNA检测技术在常规实验中的操作体会等问题，总结如下。 1材料与方
如何设计特异性荧光原位杂交探针
1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA－RNA结合的稳定性要比DNA－RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性
用于检测植物组织RNA的原位杂交法
用于检测植物组织RNA的原位杂交法（一）组织切片制备l 植物组织的甲醛固定和包埋1．将植物组织切成小块，立即放入一个装有10～50ml固定剂溶液的烧杯中，把烧杯放到真空脱水机内。调节真空度以形成一个温和的真空，然后慢慢恢复常压。微量便于固定剂渗入组织，必须反复真空和非真空状态。待固定剂充分
原位杂交组织化学实验技术3
（四）杂交后处理（post hybridisation treatment） 杂交后处理包括系列不同浓度，不同温度的盐溶液的漂洗。在原位杂交组织化学的实验程序中，这也是一个重要的环节 。特别因为大多数的原位杂交实验是在低严格度条件下进行的，非特异性的探针片段粘附在组织切片上，从而增强了背景染色。R
多彩色荧光原位杂交技术的原理与应用
mFISH是在荧光原位杂交基础上发展起来的新技术，它不仅具有FISH的优点，而且克服了FISH的许多局限，其最大特点是可将多次繁顼的FISH实验和多种不同的基因定位在一次FISH实验中完成。mFISH能同时检测多个基因，分辨复杂的染色体易位和微小缺失，区分间期细胞多倍体和超二倍体等。mFISH用激发
关于荧光原位杂交的检测领域发展的介绍
鉴于FISH 起始阶段的发展主要是探针类型和检测位点的扩展,荧光检测技术将来的发展可能包括检测领域的扩展。荧光图像临床诊断应用需要在检测体系上进一步提高,如探针的结合,照相和分析的自动化,因此避免了不同操作间的误差。样品厚度是荧光显微镜检测样品类型的一个限制因素。近来的激光共聚焦显微镜和光学X射
原位杂交组织化学实验要求及步骤
一、基本要求1. 组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞最好在30 min 内固定。2. 固定目的是：（1）保持细胞结构；（2）最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；（3）使探针易于进入细胞或组织。最常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂（如戊二醛）不同
分子杂交技术菌落原位杂交的实验相关介绍
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。 1、材料：待检测的细菌平皿，已标记好的探针，硝酸纤维素
DNA实验技术：原位杂交实验要求及步骤2
三、操作步骤（一）取材、冰冻切片：将动物以3%戊巴比妥钠麻醉，打开胸腔，暴露心脏，刺破右心耳，将针尖刺入左心室用生理盐水灌注（灌注量约为动物体重的2倍），再注入等量的4%多聚甲醛。（见图2-7）。取材，置于4%多聚甲醛中后固定4hr。以0.1M PBS浸泡冲洗4-5次（换液：1次/hr）。将组织块入
DNA纤维荧光原位杂交技术的原理与应用
FISH的分辨率取决于载体DNA的浓缩程度，如何提高分辨率一直是一个重要课题。Wiegant等和Heng等首先利用化学方法对染色体进行线性化，再以此为载体进行FISH，使其分辨率显著提高，这就是最初的纤维-FISH。纤维-FISH应用各种不同技术，将待研究细胞的全部遗传物质即DNA在载玻片上制备出D
概述荧光原位杂交位点数目及检测目标
在FISH 技术基本确立之后,FISH 不仅用于单基因或核酸检测,FISH 技术的进一步发展扩展到多色FISH 多基因位点同时检测,从基因检测发展到基因组、染色体、活细胞中转录产物mRNAs 原位检测以及组织水平的核酸检测,并且在今后的研究中还有可能应用到整个生物体的检测。早期的探针较大,是通过
分子杂交技术菌落原位杂交的实验操作步骤
1. 将少数菌落转移到硝酸纤维素滤膜上： (1) 在含有选择性抗生素的琼脂平板上放一张硝酸纤维素滤膜。 (2) 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性抗生素但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。最后，在滤膜和主
【锐赛小课堂】荧光原位杂交技术实验心得
锐赛小课堂1221-157 荧光原位杂交技术（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法，用特殊的荧光素标记核酸探针，在细胞或组织切片标本上进行杂交，以检测细胞内 DNA 或 RNA 特定序列存在与否。 FISH 实验
原位杂交组织化学技术的基本方法
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动
荧光原位杂交技术的定义、原理、背景及优势
荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘制方法，使用荧光素标记探针，以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。 它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶D
荧光原位杂交（FISH）技术的应用与实验流程
分子诊断是诊断市场增长最快的部分。萤光原位杂交和FISH分析包括700万人口的5亿美元的市场。。FISH市场预计为11％，较去年同期成长为下一个五年。400至500万人口的市场，在美国产生。FISH测试是用来识别生物标记DNA / RNA的形式。它是用于遗传作图和基因表达分析公知的方法。这种
原位杂交组织化学常用试剂及处理
一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏
DNA实验技术：原位杂交实验要求及步骤1
原位杂交组织（或细胞）化学 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同
原位杂交和核酸杂交是一种吗
核酸杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.经典的核酸杂交方法是将DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影