如何设计特异性荧光原位杂交探针
1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA－RNA结合的稳定性要比DNA－RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性不高。 2.原位杂交相比免疫组化，定位相对准确，但如果蛋白在间质中发挥作用，原位杂交就检测不出来了，结合图像分析，原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。 3.首先是标本对照，这个包括阳性对照和阴性对照；第二个是探针对照，主要是明确探针的特异性；第三个是探针正义连阴性对照，第四个未标记探针竞争抑制；第五个不含探针的阴性对照；第六个质粒对照，第七个无关探针对照。 4.若要定量，该试验不可行，还是作Northern，若要显示形态、定位，最好结合免疫组化。......阅读全文
如何设计特异性荧光原位杂交探针
1.探针分为好多种，你要先决定你用何种，是RNA探针还是DNA探针，杂交时，RNA－RNA结合的稳定性要比DNA－RNA好，所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点；DNA探针背景稍微深一些，不过也可以，标记方法比前者简单一些，另外还有寡核苷酸探针，此类探针分子量小，通透性好，但就是标记的敏感性
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别 荧光原位杂交技术问世于70年代后期，其曾多用于染色体异常的研究，近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多，特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现，使FISH技术不仅在细胞遗传学方面，而且还广泛应用于肿瘤学研究，如基因诊断基因定位等 。原
荧光原位杂交（FISH）探针的制备
实验概要本实验介绍了荧光原位杂交（FISH）探针的制备原理及技术。实验原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和
荧光原位杂交FISH和荧光探针有什么区别？
荧光原位杂交技术(FISH)：是荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交后，通过荧光显微镜观察(细胞、组织)细胞核彩色探针信号，获得特定DNA靶序列结构和数目异常的信息。
实时荧光Taqman－探针设计的几个要点
实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术
用非同位素探针进行原位杂交和检测实验——荧光原位杂交
实验方法原理实验材料载有样本的载玻片试剂、试剂盒 20〜150 ng非同位素标记的DNA探针去离子的甲酰胺l0 mg mL经超声处理的鲑精DNA主杂交混合液50% (V V)甲酰胺（未去离子）SSCpH 7.0生物素检测液或地高辛检测液或生物素 地高辛检测液0.1% (V V) Triton ×-1
DNA探针原位杂交
1、4—6微米切片,用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml）,37℃消化1
荧光原位杂交的荧光原位杂交
荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结
荧光原位杂交实验——荧光原位杂交技术
荧光原位杂交可应用于：（1）动植物基因组结构研究；（2）染色体精细结构变异分析；（3）病毒感染分析；（4）肿瘤遗传学和基因组进化研究。实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵
荧光定量PCR引物探针的设计总体原则
1. 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近探针。 2. 所选序列应该高度特异，尽量选择具有最小二级结构的扩增片段——这是因为二级结构会影响反应效率，而且还会阻碍酶的扩增。建议先进行二级结构检测，如果不能避免二级结构，那么就要相应提高退火温度。 3. 扩增长度应不超过400bp，理想
如何利用已知基因设计特异性引物
首先在NCBI进行blast比对,找到基因的特异序列,与其他基因同源性低的区域,然后再这些区域设计引物。还有一种方法是先在基因上设计引物，然后再blast比对引物，看看在你的目的物种中是否有同源基因。
原位杂交与荧光原位杂交
一、原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛
原位杂交与荧光原位杂交
一、原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛
原位杂交与荧光原位杂交
一、原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛应
核酸探针标记及原位杂交
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
核酸探针标记及原位杂交
一、核酸探针标记 核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。 核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大
钙离子荧光探针：比值型荧光探针
前面我们介绍了荧光指示剂法可以将Ca2+检测的实验与其他技术结合使用，如可以与流式细胞仪、荧光分光光度计、或者荧光显微镜进行联合检测 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等，数量较少，可见光型数目较多，包括Fluo-3、钙黄绿素、Rhod-2等。荧光指示剂根据测光原理和数据
新型冠状病毒荧光PCR引物探针设计之我见（一）
新型冠状病毒疫情爆发以后，早期诊断成为控制疫情的关键，而荧光PCR技术成为首选的初筛检测手段。目前核酸检测率只有30-40%，使得检测试剂盒的灵敏度备受关注。本期推荐林镜中博士从引物探针设计的角度对试剂盒灵敏度的分析，以飨读者。一、前言新型冠状病毒疫情爆发以后，早期诊断成为控制疫情的关键，而荧光PC
新型冠状病毒荧光PCR引物探针设计之我见（二）
1、引物探针的位置引物探针的设计原则中，最重要的是要避免假阴性（漏检），同时保证特异性（避免假阳性），所以要选择组内（需要检出的序列）保守（即尽量避开突变或采用简并序列）、组间（对照序列）特异的区域。此外，为了获得最佳的扩增效果，还应尽量满足表1中的基本要求。用SARS和蝙蝠CoV的N基因序列作为对
新型冠状病毒荧光PCR引物探针设计之我见（三）
4、二聚体设计时通常将二聚体（自身二聚体或配对二聚体）控制在dG>-5.0kc/m, 最好dG>-3.6 kc/m。从图8显示的三套引物探针的自身二聚体可见，第二套的探针具有一个非常稳定的自身二聚体（dG=-13.1kc/m），第二套的上游引物N2F有一个稳定的自身二聚体（dG=-9.3k
临床诊断中的FISH检测
FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病
临床诊断中的FISH检测
FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病
荧光原位杂交介绍
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结
荧光原位杂交实验
实验方法原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变
荧光原位杂交实验
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、
RNA荧光原位杂交
原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或 RNA
荧光原位杂交实验
实验方法原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上
DNA探针原位杂交的相关介绍
1、4—6微米切片，用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡，10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释，浓度为25μg/ml），37℃消化1
核酸探针标记及原位杂交1
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
核酸探针标记及原位杂交3
3.注意事项（1）避光下准备反应体系：由于光敏生物素醋酸盐对光敏感，应避免光照。在分装试剂及核酸与光敏生物素混合时应在暗室安全灯下操作。（2）核酸纯度：由于光敏生物素能与任何有机物反应，因此用做标记探针的核酸要高度纯化。用作标记探针的核酸最好不用Tris溶液溶解，Tris中所含氨基会干扰标记。（3）