电泳条带为什么有宽有窄
条带过宽或者不清晰是因为DNA被降解了或者是凝胶没做好。sds-page电泳泳道一般不会很宽的，因为用来形成泳道的梳子都是固定大小的，只有电泳时条带可能会变的很宽这个是因为上样体积比较大的时候，比如上满整个泳道的时候，因为浓缩胶体积小，未能将样品完全压成一条线，在分离胶的时候条带就容易扩散。......阅读全文
海水中细菌过氧化氢酶多样性快速检测方法获ZL
日前，由中国水产科学研究院黄海水产研究所王伟等申报的“使用简并引物检测海水中细菌过氧化氢酶多样性的方法”，获国家发明ZL授权。 该发明涉及使用简并引物检测海水中细菌过氧化氢酶多样性的方法，以细菌过氧化氢酶保守区设计四种简并引物的组合，以聚合酶链式反应扩增海水总DNA中的过氧化氢酶基因片段，
逆转录聚合酶链反应的操作步骤
1. 总RNA的提取：见相关内容。2. cDNA第一链的合成：试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试
实时逆转录聚合酶链反应的操作步骤
1. 总RNA的提取：见相关内容。 2. cDNA第一链的合成：试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthes
献给初学者：PCR－常见问题分析
我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策，还有终极解决方案。 PCR 常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
PCR常见问题及解决方案
PCR常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR
含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备实验
在 DNA 测序中一个常见的问题是由于 DNA 二极结构的存在而造成电泳条带的压缩。一个简单直接的解决办法是在测序胶中加入甲酰胺以减少二极结构的形成。在 G/C 含量高于 55% 时，几乎是必须使用含有甲酰胺的凝胶。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.
重组人胰岛素的制备—下游纯化工艺的研究（二）
3. 2 复性及重折叠经过初步纯化的RRhP I 通过Sephadex G225柱层析脱尿素并转换缓冲液为50 mmo löL 甘氨酸2N aOH, pH9. 5。层析图谱(见图3) , 有2 个层析峰,峰2 主要为折叠趋于正确的单体RRhP I, 收集峰2。进行SDS2PA GE 分析。结
DNA－Marker电泳常见问题分析
Q：为什么marker条带非常模糊，无法辨别具体条带？ A：出现上述情况，可能有以下几个原因：1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染；2.电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后，离子浓度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液；3.电泳条件
电泳Marker问题集锦
Q：为什么marker条带非常模糊，无法辨别具体条带？ A：出现上述情况，可能有以下几个原因： 1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染； 2. 电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后，离子浓度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液；
免疫印迹（Western－Blot）常见问题及建议
问题 可能原因 建议电泳条带成笑脸状胶不均匀冷切，中间冷却不好，电泳系统温度偏高减少电压减慢电泳速度，在冷室或者冰浴中进行电泳电泳条带成皱眉状可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃
天津工业生物所研发出明胶制备用新型蛋白酶及配套工艺
明胶(Gelatin)是胶原的水解产物，广泛用于医药、食品、纺织，化工，电子，造纸，印刷等30多个行业。随着明胶市场的细分，目前对明胶的质量要求进一步显现出高标准、系统化和专业化的新特点。传统酸碱法生产明胶工艺由于周期长、卫生条件难以控制、设备改进困难，以及对环境造成污染等原因，难以满足日益增长
HLA分型技术
HLA分型技术主要组织相容性复合物（MHC）是脊椎动物体内最复杂且具有高度多态性的基因群。1984年George Snell 首次发现小鼠MHC即H－2，1958年Dausset 发现了人的MHC即HLA基因。MHC的表达产物称为主要组织相容性抗原，MHC抗原是有核细胞表面膜蛋白分子，对抗原递呈和免
酶切、回收、连接－常识（2）
二、多选题1. 下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E) A. EDTA浓度 B. 甘油浓度 C. DNA纯度 D. 酶的自身活性 E. 盐浓度2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是（A B D E） A．酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过
373A型DNA测序仪的原理
DNA序列测定是分子生物学领域最重要的技术之一，是了解基因结构和功能的基础。DNA测序技术的不断完善和仪器自动化程度的不断提高，为大型基因组测序奠定了基础，当今大多数蛋白质序列都是通过基因或cDNA的核苷酸序列推导出来的。DNA测序方法主要有双脱氧链终止法（Sanger法）和化学降解法（Max
373A型DNA测序仪的原理
DNA序列测定是分子生物学领域最重要的技术之一，是了解基因结构和功能的基础。DNA测序技术的不断完善和仪器自动化程度的不断提高，为大型基因组测序奠定了基础，当今大多数蛋白质序列都是通过基因或cDNA的核苷酸序列推导出来的。DNA测序方法主要有双脱氧链终止法（Sanger法）和化学降解法（Max
逆转录RTPCR实验操作程序及注意事项
实验操作过程中必须带口罩、手套，实验室尽量避免人员干扰。RT-PCR的试剂都应在冰上融化，等完全融化后再取；用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存；试剂应按顺序加，加完后再混匀离心。加入试剂前在管壁上做好标记，避免加错试剂；加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变，避免重复和漏加；不同试剂和样品要更换吸
DNA－Marker产品选择指南
1.Marker选择标准 （1）应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker，这样对目标片段大小的估计较准确。 （2）所选marker应能清楚反映目标片段的大小，且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时，目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来，若二者不能兼顾，将前者作
总DNA质量检测及酶切实验
实验方法原理 在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料（如EB）后，在
总DNA质量检测及酶切实验
酶切法 实验方法原理 在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持
基因型鉴定试剂盒使用说明
试剂盒成分 1、 YSY Buffer 2、2*PCR Master Mix（使用实验室常用的酶即可，由客户自备） 储藏条件：4oC实验步骤 1、细胞与动物组织的准备： 1.1 培养细胞准备： 以培养密度为 1´106 个/ml 为例，在超净台内取 1ml（内含 300-1000 个细胞）；对于某些
定量PCR实验
实验材料 限制性内切核酸酶反转录酶热稳定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂仪器、耗材 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液4 种 dNTP 贮存液（20
荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验（二）
##六、从组织或培养细胞提取 RNARNA可以从各种来源的样本包括培养的细胞（例如神经元细胞、肝细胞等）和组织中分离得到（见 注 释 1) 。 mRNA 的 纯 化 对 FRAP-PCR 方法来说并不需要，因为mRNA 仅占细胞总 R N A 的 3 % 〜5 % (13)。因而在本章所描述
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
微生物学技术:PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
基因组DNA的纯化与回收
实验概要质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记、测序等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。主要试剂酚、氯仿、NaAc、无水乙醇、TE、Tris-HCl饱和酚、异丙醇、低融点琼脂糖
小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中...
小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备，常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝（CBB）染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆
PCR法检测支原体
实验方法原理PCR法的基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA链扩增延伸。实验材料细胞样品试剂、试剂盒dNTPTapDNA聚合酶琼脂糖矿物油支原体检测试剂盒仪器、耗材超净工作台PCR仪电泳仪凝胶成像分析系统台式离心机旋涡混悬器实验步骤1.
“形影不离”的C反应蛋白与血常规
人体血浆中有一类物质，在机体受到感染或组织损伤时，会出现急剧上升，我们将这些蛋白质类物质称为急性期反应蛋白。C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）在1930年由Tiller和Francis发现，是一种急性期反应蛋白，在电泳条带中位于血清β球蛋白区。C-反应蛋白是由五个相
总DNA质量检测及酶切实验
实验目的是了解掌握检测DNA 质量的方法以及DNA定量的方法；了解影响DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的因素；训练DNA的琼脂糖凝胶电泳操作及DNA的限制性内切酶操作。来源：《遗传学实验教程》实验方法原理在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动
考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立