重组人胰岛素的制备—下游纯化工艺的研究（二）
3. 2 复性及重折叠经过初步纯化的RRhP I 通过Sephadex G225柱层析脱尿素并转换缓冲液为50 mmo löL 甘氨酸2N aOH, pH9. 5。层析图谱(见图3) , 有2 个层析峰,峰2 主要为折叠趋于正确的单体RRhP I, 收集峰2。进行SDS2PA GE 分析。结果(见图2) 显示, 收集的RRhP I 样品中高分子量杂蛋白的含量有所减少。峰1 为高分子量杂蛋白和RRhP I 的二聚体或多聚体及折叠不完全或不正确的RRhP I。3. 3 RRhP I 酶切转化h I 在收集的RRhP I 单体组分中, 加入2. 5 mmo löL 还原型谷胱甘肽和0. 25 mmo löL 氧化型谷胱甘肽以控制2SH 比例, 通过二硫键的交换形成稳定的具有天然结构的RRhP I。在37℃条件下, 用胰蛋白酶(1ö500, 酶öRRhP I 底物) 和羧肽酶B (1ö1000, 酶öRRhP I ......阅读全文
重组人胰岛素的制备—下游纯化工艺的研究（二）
3. 2 复性及重折叠经过初步纯化的RRhP I 通过Sephadex G225柱层析脱尿素并转换缓冲液为50 mmo löL 甘氨酸2N aOH, pH9. 5。层析图谱(见图3) , 有2 个层析峰,峰2 主要为折叠趋于正确的单体RRhP I, 收集峰2。进行SDS2PA GE 分析。结
重组人胰岛素的制备—下游纯化工艺的研究（一）
摘要 建立了一套通过大肠杆菌表达(H is) 62A rg2A rg2人胰岛素原[ (H is) 62A rg2A rg2human p ro insulin,RRhP I]制备重组人胰岛素的工艺。将大肠杆菌中以包涵体形式表达的RRhP I 依次经过DEA E2琼脂糖快流速阴离子交换层析, Se
下游纯化工艺简介4
2、离子交换色谱（ion exchange chromatography）蛋白质、多肽均属于两性电解质，在缓冲液pH小于其等电点时，带净正电荷，而在缓冲液pH大于其等电点时，带净负电荷。阴离子交换凝胶本身带有正电荷基团，阳离子交换凝胶本身带负电荷基团。由于静电相互作用而使样品结合到凝胶上，再采用盐浓
下游纯化工艺简介2
（2）样品预处理a、去除样品中颗粒物（0.45-0.22微米膜过滤或者10000 g离心15分钟）b、去除样品中脂类（10000 g离心15分钟或有机溶剂抽提）c、去除样品中核酸（加入核酸酶消化或者使核酸沉淀）d、抑制样品中蛋白水解酶（加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第一步分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重
下游纯化工艺简介3
4、蛋白质的来源 （1）天然蛋白： 天然产物中的目的蛋白一般含量很少而且组分极复杂，在分离过程中须采用多个步骤才能去除各种杂质，并应在整个过程中降低蛋白水解酶的活性。 （2）重组蛋白： 重组蛋白则目标蛋白的丰度较高。重组蛋白主要有三种表达定位： a、细胞质：在这种情况下，必须
下游纯化工艺简介1
Downstream（下游）与上游相对的概念，一般而言，上游指基因克隆、细胞培养等目的产物表达工序，下游指从表达有目的产物的复杂的混合液中分离纯化得到符合要求的目的产物的一系列步骤。美、日、欧等发达国家生物技术产品工业化的实践证明：生物技术产品的产业化高度依赖于基因工程下游工序技术及设备的进步。一、
常用试剂的性质与制备纯化（二）
9．N,N-二甲基甲酰胺（DMF） 沸点149～156℃，密度d＝0.9487，折光率n 20D ＝1. 4305，无色液体，能与多数有机溶剂和水互溶，是优良的有机溶剂。市售的DMF含有少量水、胺和甲醛等杂质。在常压蒸馏时有些分解，产生二甲胺与一氧化碳，若有酸或碱存在时，分解加快，在加入固体氢氧化
水的纯化与超纯水的制备（二）
三.制备超纯水的方法传统的纯水方法不能制备出超纯水，化学意义上纯水（液态的H2O）的理论电导率为18.3MΩ.cm。人们生产的纯水是达不到理论值的，但18 MΩ.cm似乎是可以达到的，对于这种水，有的称为高纯水，有的称为超纯水，目前还没有系统的定义。也没有划分等级界限，从商业观点看叫超纯水似乎比高纯
酶的制备与纯化技术研究
酶的生产酶的生产是各种生物技术优化与组合的过程，分为生物提取法、生物合成法和化学合成法三种[2],其中生物提取法是最早采用而沿用至今的方法, 它是指采用各种提取、分离、纯化技术从动物、植物、器官、细胞或微生物细胞中将酶提取出来；生物合成法是20世纪60年代以来酶生产的主要方法, 是指利用微生物细胞、
蛋白质纯化武器——工艺篇（二）
（2）包涵体溶解 看了包涵体洗涤部分，怎么溶解包涵体应该心中有数了。无非就是pH，变性剂，还原剂，表面活性剂等等的组合。经典的包涵体溶解液的配方为：pH8.0，20mM Tris，8M Urea。说它经典，是因为我用的最多，嘻嘻。再根据个性蛋白纯化的需要往这个配方里面加调料，如
半制备规模单链RNA纯化（二）
图2中所示被选中的馏份收集窗表示不同的质量负荷。峰值采集后，样品可以根据需要对等分和干燥，以便长期储存。TEAA的挥发性使离子对缓冲组分的去除非常容易。溶剂蒸发后被纯化的寡核苷酸实际上是不含盐的。 UPLC条件纯化RNA寡核苷酸的纯度通过ACQUITY UPLC系统来验证。如图3所示，我们的纯化方法
超纯化水质的主要工艺
天然水中常见杂质包括可溶性无机物、有机物、颗粒物、微生物、可溶性气体等。超纯水机就是要尽可能彻底地去处这些杂质。 目前常用净化水质的工艺方法有蒸馏法、反渗透法、离子交换法、过滤法、吸附法、紫外氧化法等。超纯水机一般可以将水的纯化过程大致分为4大步，预处理（初级净化）、反渗透（生产出纯水），离
高纯万古霉素制备色谱纯化工艺
a 万古霉素万古霉素（Vancomycin）是抗生素的一种，其分子式为C66H74ClN9O24。其半衰期：4~8小时，肾衰竭天，对厌氧菌和革兰氏阴性细菌无效，血液透析不会移除Vancomcin。在印度等南亚国家出现的 “超级病菌，已经蔓延到英国、美国、加拿大、澳大利亚、荷兰等国家，国内专家称南亚超
关于重组人胰岛素注射液的简介
重组人胰岛素注射液，适应症为需要胰岛素治疗的糖尿病患者。 1、成份 本品主要成份及其化学名称：重组人胰岛素 活性成分：重组人胰岛素。 IU（国际单位）相当于0.0347mg无水人胰岛素 分子式：C257H383N65O77S6 辅料为：每毫升含3.0mg间甲酚、甘油、适量盐酸、氢氧化
纯化水设备的工艺流程
纯化水设备用途:1、实验室检验检测,器具清洗,试剂配置2、 卫生用品,防护用品生产用水,用于生产车间内的器具清洗。清洁、洗手等3、 用于医院供应室,腔镜中心,检验中心,血透室等区域纯化水供应纯净水设备用途1、原水处理，净化水质2、食品饮料生产用水3、公司、学校、酒店直饮水设备工艺流程：水源进水 ——
简述重组人胰岛素注射液的药理毒理
在控制饮食和锻炼的同时，给糖尿病患者注射适当剂量的胰岛素，可以暂时恢复患者碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢的能力，促进肝糖原的贮存和葡萄糖转化为脂肪。在合适的间隔时间内给糖尿病患者注射适当剂量的胰岛素，可使血糖维持在合理的范围内，避免尿糖、尿酮的出现，预防糖尿病酸中毒和昏迷的发生。
使用重组人胰岛素注射液过量的介绍
在胰岛素治疗过程中，如果胰岛素用量过多，可出现低血糖反应。 轻至中度的低血糖症状可能会突然发生，常常有以下表现 ： 虚汗、嗜睡、眩晕、失眠、心悸、焦虑、颤抖、视力模糊、饥饿、发音含糊、无力感、情绪低落、手、足、舌、唇部刺痛、易发怒、头晕、行为异常、精力不集中、行为不稳定、头痛、人格改变。
常规重组人胰岛素注射液的简介
常规重组人胰岛素注射液主要成份为重组人胰岛素，本品适用于采用胰岛素维持血糖水平的糖尿病患者，也适用于早期糖尿病患者的早期治疗以及妊娠期间糖尿病患者的治疗。其主要不良反应是低血糖。 1、简介： 拼音名：ChongzuRenYidaosuZhusheye 英文名：RecombinantHuma
发酵液中柠檬酸的萃取分离纯化工艺研究
柠檬酸应用领域广泛,市场需求量大,是有机酸重要组成部分,本课题通过溶剂萃取法分离纯化发酵液中的柠檬酸。以萃取率与反萃率为主要考察指标,筛选萃取体系的组成,优化萃取、反萃和脱色工艺条件,研究柠檬酸生产整个工艺流程,并对该工艺生产柠檬酸进行设计与经济分析。研究萃取体系中络合剂与相调节剂的组成,以萃取率、
常用纯化制备纯水的方法
实验室纯水的制备方法有多种，最常用的为离子交换、活性炭吸附、微孔过滤、超滤、反渗透、紫外线照射等六种。 1 .离子交换法 离子交换法是以圆球形树脂(离子交换树脂)过滤原水，水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透(RO)处
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
溶菌酶的制备、纯化和鉴定
实验概要制备、纯化和鉴定溶菌酶实验原理溶菌酶,全称为1,4-β-N-溶菌酶,又称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶,属于α-乳白蛋白家族。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶；此后人们在微生物、植物、无脊椎动
胰岛素的制备要求
本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品为动物来源,工艺中应进行病毒的安全性控制
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验（二）
二、机械法裂解细胞超声和高压裂解已经被高效地应用于微生物、植物和动物细胞的裂解。这些方法已经采用了几十年，其设备和原理已经被详细阐明（Harrison,1991;Hopkins，1991;Mid-delberg，1995)。超声裂解是通过调谐的探头或机臂的共鸣（15~25kHz) 所引发的髙
生物活性玻璃的制备工艺
制备工艺：生物活性玻璃的制备工艺与传统的玻璃制备工艺基本相同，包括称重、混合、熔合、熔化、均匀化、玻璃形成等。玻璃陶瓷则还需在一定的热处理制度下控制玻璃成核与晶粒生长。
RapamycinRAPA的纯化工艺介绍
简介：雷帕霉素（Rapamycin，RAPA，RPM），又名Sirolimus，属大环内酯类抗生素，与F K506的结构相似。起初雷帕霉素被研究作为低毒性的抗真菌药物，1977年发现雷帕霉素具有免疫抑制作用，1989年开始把RAPA作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行试用，目前（2010年）RAPA
使用重组人胰岛素注射液的不良反应
低血糖 ：引起低血糖的原因详见【注意事项】。 低血糖症状包括 ：多汗、眩晕、震颤、饥饿感、焦虑、手脚嘴唇或舌头发麻、注意力分散、嗜睡、失眠、不能自我控制、瞳孔扩大、视力模糊、语言障碍、忧郁、易怒。这些症状通常突然发生。 严重的低血糖可导致意识丧失并造成短期或长期脑功能损伤甚至死亡。 其他
关于重组人胰岛素注射液的用法用量介绍
医师应按照患者的实际需要决定注射剂量。 重和林R可皮下注射或静脉注射。对自己注射的患者，皮下注射更为合适。 重和林R通常餐前15-30分钟给药。 只有在医师的指导下才可将重和林不同制剂混合后注射。 本品可在大腿或腹壁做皮下注射，如果可行，也可在臀部或上臂外侧做皮下注射。为避免组织损伤，注
关于重组人胰岛素注射液的用药禁忌介绍
1、孕妇及哺乳期妇女用药 怀孕时的使用 ： 高血糖对胎儿可能会造成伤害，因此对需要胰岛素治疗的怀孕的糖尿病患者，整个怀孕期间注射胰岛素以较好地控制糖尿病是完全必要的。由于怀孕期间胰岛素需要量会改变，较难控制血糖水平，因此，患者怀孕或计划怀孕应告知医师。 哺乳期的使用 ： 哺乳期间使用胰岛
生物制药上游和下游工艺中“浸出物的命运”
一次性使用系统（SUS）在生物制药生产中被广泛应用。这些聚合物材料中的化合物可能会在不同阶段以浸出物形式进入生产过程中，可能会影响生产工艺效率（如抑制细胞生长）或成为工艺相关的药品杂质，从而潜在影响药品质量和/或患者安全。目前，浸出物的研究主要集中于在“最差条件”或模拟情况下检测和评估单个组件的可提