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蛋白纯化方法很多，也很复杂，一般程序如下：分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。 前处理 分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。为此，动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸点的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆机破碎或用超声波处理破碎。植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦，因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子，非常坚韧。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后，选择适当的......阅读全文
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单，但是封闭液的选择确是很多科研人员的难题。为了让大家更方便的选择适合自己实验的封闭液，这里给大家介绍6种不同的封闭液，以及它们的优缺点。1、脱脂奶粉最好
01 寻找创新靶点新基与Vividion达逾亿美元合作 药明康德：今日，位于美国圣地亚哥的Vividion Therapeutics公司宣布与Celgene（新基）公司达成战略研发合作协议。这一多年合作关系将着重利用Vividion的药物开发平台来开发靶向癌症、炎症和神经退行性疾病的创新
到目前为止，蛋白质结构解析的方法主要是两种，x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法，叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更早，也更加的成熟，解析的数量也更多，我们知道，第一个解析的蛋白的结构，就是用x晶体衍射的方法解析的。而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起
加拿大阿尔伯塔大学开展的一项开创性研究表明，他们发现了传染性朊病毒蛋白的结构，该结构长期以来是一个谜团。朊病毒蛋白可导致疯牛病、鹿和麋鹿的慢性消耗性疾病（又称疯鹿病）和人的克雅氏病。 朊病毒蛋白是一种结构异常折叠的蛋白质，非常难以被提纯和研究。这种蛋白自1980年代首次被提纯以来，由于它的不
抗体药物作为生物技术产业的关键驱动力，能安全有效地对癌症、自身免疫病和感染性疾病等进行靶向治疗，该药物在2012年创下全球645.7亿美元的销售额，占生物制药51.8%的份额。目前抗体药物的市场需求量仍在攀升，预计到2015年，抗体药物销售额有望达980亿美元左右。业内人士认为，随着疾病谱变化，
核心提示：作为乳汁中一种特有的活性蛋白物质，乳铁蛋白被广泛认为具有调节免疫、抑制病毒和有害菌等作用，其产品也因此受到不少家长的追捧。然而，新京报记者近日走访市场发现，一些所谓的乳铁蛋白粉实质上是带有“乳铁”商标的乳清蛋白固体饮料。这样的普通食品经过摇身一变，售价普遍在300元以上，直逼甚至超过乳铁蛋
应用1.改良乳汁品质；2.生产药用蛋白。3.外源基因在动物体内的位点整合问题；4.乳蛋白基因表达组织特异性问题；5.目的蛋白的翻译后修饰问题；6.转基因表达产物的分离和纯化问题；7.转基因的技术与方法问题；8.伦理道德问题。膀胱生物反应器膀胱反应器有着和乳腺反应器一样的优点：收集产物蛋白比较容易，不
1.改良乳汁品质； 2.生产药用蛋白。 3.外源基因在动物体内的位点整合问题； 4.乳蛋白基因表达组织特异性问题； 5.目的蛋白的翻译后修饰问题； 6.转基因表达产物的分离和纯化问题； 7.转基因的技术与方法问题； 8.伦理道德问题。 膀胱生物反应器 膀胱反应器有着和乳腺反应器
1、产生非特异性染色的主要因素（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。（
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗
（二）透析法荧光素如FITC 分子可以通过半透膜，而蛋白质大分子不能透过，可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。（1）将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内，液面稍留空隙，紧扎。（2）浸入0.02mol/L PH 7.1～7.4的PBS中（悬于大于标记物体积约50～100倍的PBS内），在4℃中
四、荧光图像的记录方法 荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计，图像
1、染色过强 原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体 孵育时间：室温1小时或4℃过夜 孵育温度过高，孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB显色时间过长或DAB浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下 观察
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去 。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3
（二）透析法荧光素如FITC分子可以通过半透膜，而蛋白质大分子不能透过，可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。（1）将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内，液面稍留空隙，紧扎。（2）浸入0.02mol/pH。7.1~7.4的PBS中（悬于大于标记物体积约50~100倍的PBS内），在4℃中透析，
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的
上世纪70年代的生化学家在钻研细胞信号传递、循环和粘附的蛋白化学特征时遇到两个难题：高精度纯化蛋白和提纯低分子量蛋白。 比如，在人类破译干扰素结构之前的20多年中，很难对其进行纯化；血管紧缩素II（angiotensin II ，8个氨基酸）和抗利尿激素后叶加压素（vasopressin，9个
而在蛋白质测序方面，《The Scientists》杂志回顾了一下研究进展，文中提到，上个世纪70年代的生化学家在钻研细胞信号传递、循环和粘附的蛋白化学特征时遇到两个难题：高精度纯化蛋白和提纯低分子量蛋白。 比如，在人类破译干扰素结构之前的20多年中，很难对其进行纯化；血管紧缩素II（angi
固相萃取是这种试品预备处理仪器设备，应用液-固相色谱基础理论，选用可选择性吸咐、洗白的方法对试品开展含有、分离出来、清洁解决，使试品更为纯粹，进而减少试品中残渣对检验的干挠，进一步提高检验的精确性。 固相萃取原理是运用可选择性吸咐与可选择性洗白的液相色谱仪法分离出来基本原理。较常见的方式
据每日科学网近日报道，美国范德比尔特大学研究人员开发出一种新型激光技术，可检测细胞膜上的蛋白质和其它多种生物分子之间的相互反应。这种检测将在药物开发进程中发挥重要作用。 人类细胞中约有7000种蛋白质，其中30%在细胞膜上，控制细胞分子运作机制的信号有60%—70%由这些膜蛋白产生，
步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388，如右图所示)， 用PBS 洗2 次，每次1ml。
细胞总乙酰化水平的快速测定方法 -------免疫亲和色谱-ELISA 方法 步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated
步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388，如右图所示)， 用PBS 洗2 次，每次1
在使用殷赋云计算平台的时候，有不少用户对于如何选择蛋白晶体结构存在疑问。本篇就这个话题做一些经验分享。任何标准都有一个适用范围。我们在这里只讨论用于分子对接的蛋白晶体结构的选择原则和方法。 1. 确定蛋白种属 在实验当中，研究人员通常使用动物模型（如小鼠）来研究人源蛋白。这样做有许
在生命科学的基础研究中，分离、提纯蛋白质是重要而繁锁的工作。生物体中各种蛋白质的氨基酸组成（或构筑）不尽相同。鉴定纯蛋白的最基本方法之一是测定其氨基酸的组分及含量。几年来，我们对一些蛋白质样品（达电泳纯）进行氨基酸分析，为鉴定蛋白质的结构与纯度提供了一项指标。有些蛋白质是国内首次提取或报道。现将
蛋白M(天蓝)结构。 一项新的研究显示，通过与其遭遇的抗体结合并迷惑其中的大多数，一种新发现的蛋白可阻止抗体行使其职能。这种被称作蛋白M的蛋白质的活性代表了细菌躲避免疫系统的一种新方式。蛋白M的可与无数抗体结合的能力还使它成为一种重要的用于工业规模抗体纯化的可能的工具。抗体是由免疫系统用来
降低氯离子可恢复转换功能 据一则新的报告显示，一种药物可防止自闭症模型的怀孕小鼠的后代出现自闭症行为，虽然无法在产前将该药物给予人类孕妇(因为没有办法筛检人类胎儿的自闭症)，但在之后的发育过程中给予该药物，即将这种药物给予已经出现自闭症症状的幼童，这样临床试验正在取得进展。自闭症谱系障碍或
生物反应器（bioreactor）经历了三个发展阶段：细菌基因工程、细胞基因工程、转基因动物生物反应器。转基因动物生物反应器的出现之所以受到人们极大的关注，是因为它克服了前两者的缺陷，即细菌基因工程产物往往不具备生物活性，必须经过糖基化、羟基化等一系列修饰加工后才能成为有效的药物，而细胞基因工程
生物反应器（bioreactor）经历了三个发展阶段：细菌基因工程、细胞基因工程、转基因动物生物反应器。转基因动物生物反应器的出现之所以受到人们极大的关注，是因为它克服了前两者的缺陷，即细菌基因工程产物往往不具备生物活性，必须经过糖基化、羟基化等一系列修饰加工后才能成为有效的药物，而细胞基因工程
生物反应器（bioreactor）经历了三个发展阶段：细菌基因工程、细胞基因工程、转基因动物生物反应器。转基因动物生物反应器的出现之所以受到人们极大的关注，是因为它克服了前两者的缺陷，即细菌基因工程产物往往不具备生物活性，必须经过糖基化、羟基化等一系列修饰加工后才能成为有效的药物，而细胞基因工程又因