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蛋白质组和蛋白质组学分析

随着人类基因 组计划研究成果的公布,人们对基因的认识逐渐清晰,但基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性,与生命现象的复杂性和多样性之间存在巨大反差。如何了解众多的基因与危害人类身心健康的疾病之间的关系,对生命科学研究者来说仍是一项长期而艰巨的任务。因此,作为生命活动的直接承担者――蛋白质,成为后基因组时代生命研究的焦点,蛋白质组研究也成为生命科学研究的一个新领域。 1994年,澳大利亚科学家Wilkins首先提出了蛋白质组(proteome)的概念后,1996年澳大利亚建立了*1个蛋白质组研究中心(Australia Proteome Analysis Facility,APAF)。1997年,第1次国-际蛋白质组学会议召开,预言21世纪生命科学的重点将从基因组学转移到蛋白质组学,为生命科学和医学领域的研究带来了新的生机。1998年,第二次国-际蛋白质组学会议在美国旧金......阅读全文

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——检测

实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大

包涵体的纯化-2

1.2.7重组融合蛋白的纯化 PrP-pET-32a(+)转化表达菌E.coli BL21(DE3),TB培养基中,25℃,AMP 200 ug/ml,摇床(250 r/min)培养至OD600约为1.5,更换等体积新鲜TB培养基,加入IPTG至终浓度1 mM,AMP 200 ug/ml,

【分享】蛋白纯化的方法选择

  随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆

C反应蛋白(CRP)在儿科中的临床意义

  1930年,Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能 在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C-多糖发生特异性沉淀反应的物质。1941年, Avery等测知它是一种蛋白质,故称为C反应蛋白(CRP)。1944年,Jones将其作为临床粉丝热诊断标准

包涵体的纯化和复性总结-2

8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性,一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始,到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言,可以从4M开始,到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定,这些需要你在实验过程中不断试验,确定合适的缓冲系统;不过复性过程主要

蛋白质纯化的方法选择

随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆的下

蛋白质纯化的方法选择

  1 蛋白纯化的一般原则  蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

杆状病毒-昆虫细胞表达系统

实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒,其基因组含有一段外源核酸序列,通常为编码目标蛋白质的dDNA,在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成

蛋白质纯化的一般原则及方法选择

  随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分

暴利“乳铁”蛋白忽悠你

核心提示:作为乳汁中一种特有的活性蛋白物质,乳铁蛋白被广泛认为具有调节免疫、抑制病毒和有害菌等作用,其产品也因此受到不少家长的追捧。然而,新京报记者近日走访市场发现,一些所谓的乳铁蛋白粉实质上是带有“乳铁”商标的乳清蛋白固体饮料。这样的普通食品经过摇身一变,售价普遍在300元以上,直逼甚至超过乳铁蛋

【分享】几种常用的蛋白标签的功能和优点

  重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用的蛋白标签及其功能和优点。  一. GST标签  GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

激光散射技术在PSE 猪肉鉴定中的应用

     猪肉是国人主要的动物蛋白源, 年消费量为 5380 万吨(2013), 约占世界年消费量的 50%[1]。但在 猪饲养业中存在大量的问题, 其中与肉品质相关的 有 PSE(pale, soft and exudative,指表面松软、多汁、 色泽灰白的

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

实验步骤:3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作。因此,

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

仪器、耗材DBMS实验步骤3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作

膜蛋白分离方法

1 细胞质膜资料1895 年 ,Overton 从研究细胞透性得出 " 细胞膜由连续的脂类物质组成 " 。1925 年 Gorter&Grendel: 用脂单分子膜技术测定细胞膜中脂分子的总面积,提出: "细胞膜是由双层脂分子组成 " 。1935 年

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                       &

选择重组蛋白表达的合适方法

重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及

Cell背靠背 | 相分离促进紧密连接形成的机制

  细胞连接(cell junction) 是指相邻细胞之间、细胞与细胞外基质之间在质膜接触区域特化形成的连接结构。细胞连接在加强细胞间的机械联系,维持组织结构的完整性和协调不同细胞功能方面起着重要的作用。细胞连接可分为紧密连接(tight junction)、锚定连接和通讯连接三种类型。其中紧密连

重组蛋白制备工艺优化策略

重组蛋白纯化基本原则蛋白的分离纯化是生物工程下游阶段一个比较重要的部分,尤其在基因工程重组蛋白的分离纯化中,上游过程的许多因素会直接影响到下游蛋白的分离,充分利用上游对下游的影响,对蛋白的纯化做一个全面的考虑和整体的设计。是否带有亲和标签,His标签,GST标签等,不同的亲和标签选择不同的纯化方案;

生物谷7月份结构生物学研究进展一览

  1. Cell:中科院生物物理所王艳丽/章新政课题组从结构上揭示Cas13a切割RNA机制  doi:10.1016/j.cell.2017.06.050  CRISPR/Cas系统是目前发现存在于大多数细菌与所有的古菌中的一种免疫系统,被用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。在CR

选择重组蛋白表达的合适方法

实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或

组蛋白研究进展速览!

  本文中,小编盘点了多篇研究报告,共同解析科学家们在组蛋白研究上取得的新成就,与大家一起学习!图片来源:Daniel N. Weinberg et al,doi:10.1038/s41586-019-1534-3  【1】Nature:揭示组蛋白标记H3K36me2招募DNMT3A并影响基因间DN

综述 |AD的蛋白质组学格局--发病机制和生物标志物新见解

  导 读  基于质谱的蛋白质组学使得对阿尔茨海默症(AD)的蛋白质组和蛋白质翻译后修饰(PTM)的深入剖析成为可能。在这里,我们回顾了AD蛋白质组学研究的历史和近期的进展以及局限。作为遗传图谱的补充,蛋白质组学研究不仅验证了典型的淀粉样蛋白和tau通路,而且还发现了蛋白质网络中的新组成部分,如RN

蛋白质纯化的方法选择(一)

摘要 : 随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工

重组蛋白表达的几种常用标签介绍

 重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用载体标签及其功能和优点。一. GST标签GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。将