如何根据现有的液相方法进行方法开发
一、方法验证简介分析方法开发与验证是一个整体，在实际工作中，一般是先开发分析方法，经过适当的优化以后再做方法验证。所谓方法验证是指为了保证分析检测结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的准确性、科学性和可行性进行验证，以证明分析方法符合分析测试的目的和要求。方法验证在质量控制上有重要的作用和意义，在建立产品质量标准时，分析方法需经验证；在产品生产工艺变更、配方的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。二、方法验证内容包括专属性、线性、范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性等。三、方法验证成熟仪器项目色谱类仪器：气相色谱/质谱联用仪GC/GC-MS、液相色谱/质谱联用仪LC/LC-MS、三重四级杆串联液质仪UPLC-MS-MS；元素类仪器：电感耦合等离子发射光谱/质谱联用仪ICP-OES、电感耦合等离子发射光谱/质谱联用仪ICP-MS、离子色谱仪IC、原子吸收光谱仪AAS、原子荧光光谱仪AFS。四、方......阅读全文
盘点关于液相色谱柱的选择方法
在选择色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱。 特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。 2.聚合物基质：应用pH值
液相色谱柱的正确使用方法
日常分离分析工作中，液相色谱柱的使用和维护十分重要，液相色谱柱使用是否得当，直接影响柱子的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。液相色谱柱的正确使用：（1）柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。（2）如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，
液相色谱柱选择的方法及建议
液相色谱柱选择的方法及建议 一液相色谱柱选择方法简单思路 1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的实验成本等。 2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等。 3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。 二
最全的液相色谱柱使用方法
高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。 01.加装保护柱 保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两
异相液相酶免疫测定的方法
主要用于检测样品中极微量的短肽激素和某些药物等小分子半抗原。酶标志物具有更好的稳定性，且无放射性污染。 1.平衡法：将待测样品抗原、酶标抗原及特异性抗体进行一次性温育，待反应达平衡后，测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。 2.非平衡法：先将样品（或标准品）与抗
食药总局发布两项液相/液质检测方法
分析测试百科网讯 近日，国家食药总局批准发布了两项食品中非法添加物的检测方法，分别是食品中那非类物质的测定（BJS201601）和小麦粉中硫脲的测定（BJS201602）。 其中，食品中那非类物质的测定（BJS201601）采用配有电喷雾离子源的液相色谱-串联质谱仪检测，小麦粉中硫脲的测定（B
高效液相和超高效液相的区别
超高效液相系统耐压更高，可以以更高的流速进行分析，并且在高流速下仍能保持很好的理论塔板数。高效指的就是效率更高，即在同样的时间内可以分析更多的样品。高效液相色谱是相对经典液相色谱来说的，高效液相色谱具有更细的流动相传输管路，内径更细的色谱柱，从而使死体积变小，理论塔板数更高，分析时间更短。超高效就是
液相流动相如何脱气
流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气影响液相色谱的操作性能，在泵中产生气泡使流速不稳，气泡大时会在泵头形成空穴。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的噪音峰，降低响应甚至导致信号消失。流动相中的氧对光电检测器影响最大，使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消。在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭
液相流动相如何脱气
流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气影响液相色谱的操作性能，在泵中产生气泡使流速不稳，气泡大时会在泵头形成空穴。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的噪音峰，降低响应甚至导致信号消失。流动相中的氧对光电检测器影响最大，使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消。在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭
什么是气相－液相
气相属于分配层析或吸附层析，仅适用于分析分离挥发性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物（如磨细的耐火砖）上覆盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点石蜡和油脂、环氧类聚合物。液相：均匀的溶液也是一个相，称为液相。液相是物质呈现液体的状态，且在这个系统里只有液体，没有固相（即固体），也没有气体（即气相：通常任
液相色谱流动相小议
一、液相色谱流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流
液相流动相如何脱气
流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气影响液相色谱的操作性能，在泵中产生气泡使流速不稳，气泡大时会在泵头形成空穴。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的噪音峰，降低响应甚至导致信号消失。流动相中的氧对光电检测器影响最大，使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消。在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭
什么是气相、液相
气相属于分配层析或吸附层析，仅适用于分析分离挥发性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物（如磨细的耐火砖）上覆盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点石蜡和油脂、环氧类聚合物。液相：均匀的溶液也是一个相，称为液相。液相是物质呈现液体的状态，且在这个系统里只有液体，没有固相（即固体），也没有气体（即气相：通常任
液相色谱流动相脱气
流动相的脱气HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂PH的变化，对分
液相流动相的使用
a、流动相对样品具有一定的溶解能力b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。c、流动相的黏度要尽量小d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最
什么是气相－液相
气相属于分配层析或吸附层析，仅适用于分析分离挥发性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物（如磨细的耐火砖）上覆盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点石蜡和油脂、环氧类聚合物。液相：均匀的溶液也是一个相，称为液相。液相是物质呈现液体的状态，且在这个系统里只有液体，没有固相（即固体），也没有气体（即气相：通常任
实验室分析方法液相色谱的定量方法—定量方法
峰高和峰面积测量仅是对检测信号的一种响应该响应需同组分的浓度或者质量结合方可完成定量方法。无论在相同的还是不同的色谱条件下进行的试验,均要采取一定的手段加以校正,才可能得到准确的定量结果。主成分自身对照法、峰面积归化、内标法、外标法及标准加入法是HPLC定量分析中常用的校正技术。不加校正因子的主成分
常用的鉴别方法高效液相色谱和气相色谱鉴别法
一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验,要求供试品和对照品色谱峰的保留时间(tR)一致。含量测定方法为内标法时,要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标物的保留试剂比值应相同。高效液相色谱和气相色谱鉴别法操作比较复杂,耗时长,一般在检查或含量测定项下已采用色谱法的情况
液相色谱平顶峰故障的解决方法
故障现象： 平顶峰 可能的原因： (1)色谱柱超载 (2)样品、流动相问题 (3)检测池及其透镜、池窗等光学附件污染 (4)检测器信号采集故障 排除方法： (1)减少进样量 (2)检查样品及流动相，可采取新制样品及流动相的替换方
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
修饰肽纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载
提高高效液相色谱柱效的方法
要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。 （1）降低移动相的流速,但会使分析时间延长。 （2）减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。 （3）减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。 （4）选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。 （5
提高高效液相色谱柱效的方法
1、选用细颗粒的填料，可获得高柱效。2、降低流动相流速，使得渗透时间变长，有利于达到高柱效。3、流动相粘度低，溶质在流动相中的扩散系数大，有利于加快传质，可获得高柱效。4、采用低配比固定液，有利于减小固定相传质阻力，可提高柱效。5、提高温度，可减小流动相和固定相的粘度，增大组分的扩散系数，改善传质，
液相色谱柱的类型和使用方法
液相色谱柱根据功能分为HPLC和UHPLC、UPLC柱，根据内径大小又有常规分析柱，、窄径柱和毛细管柱的类型区别，其中应用广泛的液质联用仪就是用的窄径柱。因为分析类的仪器主要致力于对样品成分的判断，就需要能够准确分离少量样品的内径较小的色谱柱。而内径孔大的色谱柱用于进样量大的成品纯化和分离。 类型
食品检测中液相色谱方法应用探析
摘要：随着人们生活水平的不断提高，人们越来越关注食品安全问题，HPLC技术在其中起着至关重要的作用，能够有效保障食品安全。随着科学技术的发展，人们将HPLC技术与其他技术结合在一起进行应用，收到的效果更加理想。在社会将来的发展中，人们对食品安全的要求一定会越来越高。而高效液相色谱法的出现，可以对
液相色谱柱使用异常及解决方法
柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新色谱柱有的柱压可能相差4、5个MPa，特别是低端和色谱柱之间，这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
修饰肽纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capture chromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步zui关心的是流速和载量，常采用
超高效液相色谱串联质谱法是什么方法
高效液相色谱是一种准确度高，分离范围广的快速分离方法，它对化合物的结构破坏性小，适合有机分子和生物分子的分离。质谱具有其他分析方法无可比拟的灵敏度，对于未知化合物的结构分析定性十分准确，对相应的标准样品要求也比较低。质谱可以和气相联用如GC/MS,也可以和高效液相色谱联用如HPLC/MS。由于色
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capture chromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、
高效液相色谱柱的保养和维修方法
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等，色谱柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构及装填技术。 1.高效液相色谱柱的保养 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速凝