蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速凝胶。经过浓缩的部分纯化的样品进行中级色谱(intermediate chromatography)，目的是去除较难去除的杂质，此步最关心的是分辨率，常采用高分辨率的细颗粒凝胶。最后为了得到符合要求的最终产品，去除残存的杂质以及目的蛋白的多聚物或者降解片断，进行精制色谱(polishing chromatography)，常采用具有高分辨率的凝胶过滤凝胶进行凝胶过滤色谱。2、纯化前的准备工作(1)样品稳定性试验a、测定样品在pH 2-9的稳定性；b、测定样品在0-4 mol/L NaCl及0-2 mol/L 硫酸铵中的稳定性；c、测......阅读全文
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capture chromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
修饰肽纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
修饰肽纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capture chromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步zui关心的是流速和载量，常采用
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介
1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速凝
蛋白质、多肽液相纯化方法简介
修饰肽纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capture chromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步zui关心的是流速和载量，常采用高
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法
1、纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱（capturechromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍（三）
2、纯化前的准备工作 （1）样品稳定性试验 a、测定样品在pH2-9的稳定性；b、测定样品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸铵中的稳定性；c、测定样品在0-50%乙醇、甲醇中的稳定性；d、测定样品在4-40℃的稳定性；e、室温下静置过夜，测定对蛋白水解酶的稳定性。（2）样品预处理 a、
蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍（一）
1、纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分离的样品。然后进行捕获色谱（capturechromatography），主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步最关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速凝
奶制品蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍
1、纯化的一般目标和方法 首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤(例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等)成为稳定的可以用于色谱分离的样品。 然后进行捕获色谱(capture chromatography)，主要目标是浓缩和去除大量的容易去除的杂质，此步关心的是流速和载量，常采用高载量、快流速
液相色谱简介
什么是色谱？ 色谱法是一种物理化学分析方法。它利用混合物中组分在两相间分配系数的差别，当溶质在两相间作相对移动时，各组分在两相间进行多次分配，从而使各组分得到分离。 2. 色谱的发展 色谱这一概念是由俄国植物学家Tswett（茨维特）1903提出的，他在一根细长的玻璃管中装入碳酸钙粉末，然后将植物
正相液相色谱方法
正相液相色谱方法建立的一般模式与反相液相色谱类似。正相液相色谱的色谱柱选择范围较宽，氰基柱通常是首选；与氰基柱相比，硅胶柱可获得更大的值，适合于异构体和疏水性溶质的分离，但分析时必须严格控制流动相中水含量，也不适于梯度分离:二醇基柱和氨基柱稳定性较差，仅在其他类型正相色谱柱无法完成分离时采用；氧化铝
高压液相色谱特点简介
高压 液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 高速 流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1
反相高效液相层析实验_多肽和蛋白质的分离
实验材料蛋白质试剂、试剂盒TFA乙腈盐酸胍仪器、耗材层析柱HPLC进样器实验步骤1. 用经脱气的HPLC级水洗去反相柱的有机溶剂，梯度从100%有机溶剂到100%水，流速1 ml/min，持续15 min 以上。 2. 以100%的TFA/乙腈缓冲液平衡柱子至柱压和光吸收值达到恒定。用10~15
关于分离纯化多肽、蛋白质的分析方法亲和层析的介绍
AC 是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。自1968 年Cuatrecasas 提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。对多肽类物质分离目前主要应
色谱技术方法高效液相色谱
高效液相色谱 （HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，
液相色谱柱的分类简介
1、正相色谱柱：固定相极性大于流动相一般指硅胶柱，以正己烷系列为流动相。2、反相色谱柱：固定相极性小于流动相，其技术就是在硅胶基质上键合有机碳链。一般指C18、C8、苯基柱等，以甲醇、乙腈、水为流动相。目前用的最多的色谱柱是反相色谱柱反相色谱柱填料合成技术用四乙氧基硅烷脱乙基聚合成硅胶，并脱去表面的
简介液相色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤： a. 平衡开始时将流
UPLC（超高效液相色谱）简介
超越HPLC 随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。因此，UPLC（超高效液相色谱）概念得以提出，将HPLC的极限作为自己的起点。在1996年，Waters公司推出Alliance HP
快速蛋白液相色谱(FPLC)简介
FPLC为专门用来进行蛋白质、多肽及多核苷酸分离的系统，FPLC为近年来的一项重要革新，其除了对HPLC的快速、高分辨率等特性加以保持，并且其还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。所以近年来，其广泛应用于分离蛋白质、多肽及寡核苷酸等方面。伴随着HPLC的发展，有薄壳型填料和双扩
高效液相色谱的液固分离简介
流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S)，可表示如下：Xm nSa ====== Xa nSm 式中
蛋白质纯化方法
蛋白质的提纯 蛋白质纯化方法属于生物化学技术。1、超速离心法 此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内，达到彼此分离的目的。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。 用超速离心或梯度密度离心分离和纯化抗原时，除个
多肽和蛋白质的区别简介
多肽和蛋白质的区别，一方面是多肽中氨基酸残基数较蛋白质少，一般少于50个，而蛋白质大多由100个以上氨基酸残基组成，但它们之间在数量上也没有严格的分界线，除分子量外，还认为多肽一般没有严密并相对稳定的空间结构，即其空间结构比较易变具有可塑性，而蛋白质分子则具有相对严密、比较稳定的空间结构，这也是
液相色谱流动相的贮存方法
液相色谱流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因为许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料中的增塑剂，导致溶剂被污染。被污染的溶剂如用于液相色谱系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成的变化，同时防止空气中的氧和二氧化碳溶入流动相中。 液相色谱
液相色谱柱选择方法
一、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的简单思路 1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。 2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。 3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
高速液相色谱方法解析
在生物工程中，作为代谢产生的物质群种在分离、精制过程中，生理物质容易失去活性，而且被分离物的分布范围甚广，如在水相溶液中时，性质相类似的蛋白质、氨基酸、核酸（DNA、NRA），抗体以及含有遗传基因结构的生物物质，用通常的化学方法很难进行分离。 80年代中期，采用高速液相色谱方法，便有效地解决了这
高效液相色谱定性方法
与气相色谱相比，高效液相色谱定性的难度更大。HPLC过程中影响待测组分迁移的因素较多，同一组分在不同色谱条件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作条件下，同一组分在不同色谱柱上的保留值也可能有很大差别。因此，在高效液相色谱分析过程中，对定性分析方法提出了更高的要求。 （1）利用检测器的选择性进
液相色谱操作方法
准备与开机 1．打开主机箱门，在进样阀和检测器间安装合适的色谱柱。 2．打开计算机电源开关，打开LC电源开关。 3．打开柱箱电源开关，设定分析温度。 4．双击计算机桌面上的Instrument online图标进入工作站系统。 二、编辑LC分析方法 1．在Instrument online主界
液相色谱常用洗脱方法
进行液相色谱分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。 用等度洗脱进行色谱分离时，由不同溶剂构成的流动相的组成，如流动相的极性、离子强度、pH值等，在分离的全过程中皆保持不变。用梯度洗脱进行色谱分离时，在洗脱过程中含2种或两种以上不同极性溶剂的流动相组成会连续或间歇地改变，其间可