wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可......阅读全文
WB条带是白色怎么补救
WB条带是白色无法补救。WB做出来是白色的条带，一抗、二抗均已稀释也不管用。二抗浓度或者目的条带丰富过高，很快消耗了底物，所以形成了白色条带。WB在做的时候需要稀释二抗浓度就可以了。
WB－抗体能用什么稀释
wb抗体用5%的脱脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先让抗体与奶粉或BSA蛋白非特异结合，就不会与PVDF膜上的蛋白结合了。
wb显影液显影原理
相纸、胶卷表面保护基下,是溴化银涂层(还有其他的从略),溴化银见光分解,显影液与其发生化学反应,分解析出。 拍照好的底片,图像在上面明暗不同,分解程度也就不一样了。冲洗出来就是底片。
wb条带放三天显影
显影。wb条带放三天看到明显的荧光条带，先压三十秒。显影时，把胶片完全浸入显影液，用透明的或者白色的盒子，看到显影，看到胶片上有黑色条带。wb就是艾滋病抗体确证试验，监测env的条带，出现两个env条带，判定是阳性检测env条带。
magej分析wb条带如何水平
1、首先，打开ImageJ，并且导入要分析的条带。随后在Image-Type中选择8-bit。在Process-subtractbackground中设置rollingballradius=50pixel，记得勾选lightbackground哦。2、其次，进行分析参数的设置。这里选择Analyze
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
WB上样量应为多少
>这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，
WB一抗用什么稀释
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下，可以溶解
wb条带周边发黑中间白
wb条带周边发黑中间白的原因是过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗，导致我们在做化学发光检测时，发光底物已经消耗殆尽而形成空斑。要解决条带中出现整条白色空斑，需要减少蛋白上样量、稀释一抗和二抗的浓度。如果条带中出现白圈的话，是转膜时候，膜与胶之间有气泡，需要在制作“三明治”时，
WB注意这些问题，新手也能做出满意结果！
Western blot（WB）是检测蛋白质及蛋白质翻译后修饰的经典方法，可在简单或复杂的生物样品中提供有关靶蛋白的半定量或定量数据。WB 步骤复杂，通常包括：蛋白样本制备→电泳→转膜→封闭→孵育一抗→孵育二抗→显影→分析。WB 任何过程出现 Bug 均可影响结果的重复性与灵敏度，因此必须注意将 W
WB上层胶怎么算跑好了
检测器检测。理论上，从普通培养基中收集分泌蛋白，此时对细胞生长条件的影响最小，是最佳的实验条件：但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA（牛血清白蛋白）之类的蛋白质，除非你进一步分离纯化，否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦，尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候：用“任何”
WB－抗体能用什么稀释呢
wb抗体用5%的脱脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先让抗体与奶粉或BSA蛋白非特异结合，就不会与PVDF膜上的蛋白结合了。
IHC,ELISA,WB实验之间的区别
免疫组化、Western、ELISA，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。那么，我们今天就来说说这三者之间的差别以及其具体使用的场景。1、IHC中文名称：免疫组化英文名称：Immunohistochemistry简介：是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定
WB生物样本总蛋白抽提
一、贴壁细胞蛋白提取A1..将水浴锅的温度调至100℃，等水浴锅达到100℃温度后，取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。2.将缓冲液（1Xloading buffer）置于100℃水浴锅中预热10min。（loding buffer： 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbu
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的
巴傲得生物WB实验流程
凝胶浓度与蛋白质分离范围凝胶浓度％ （W/V）最适分离范围（KD）7.570-20010.050-15012.030-10015.012-4520.04-30不同浓度分离胶的制备（两块胶）组分7.5％10％12％15％20％Tris-HCL缓冲液*3.75ml3.75 ml3.75 ml3.75 m
wb背景黑是因为什么
背景黑可能有以下几个原因:1.没有封闭好,但这个可能很小2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长
做WB需要多长时间
做WB如果从组织/细胞开始提取蛋白来计算，起码需要三个工作日。如果已有蛋白质样品，从做胶开始算，则为两个工作日。每张膜的样品数与所使用的跑胶系统有关，最常见的是10-15个上样孔的型号，一个孔放marker，剩下可以测n-1个样品。我用过最多的是25个孔。能够在一张膜上测几种不同蛋白，跟目标蛋白分子
WB－上样前如何制样
WB 是实验室常见实验之一，蛋白定量后，上样之前，还需要哪些步骤制样呢？1. 蛋白含量测定后，Invent 建议大家把各个样品稀释到某一固定浓度（稀释可使用 PBS，水或裂解液），等体积等质量上样，计算上样体积时需包含 loading buffer 的体积。例如：把所有蛋白浓度都稀释到 2ug/ul
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的检测和单
免疫印迹法和免疫捕获法的区别
免疫印迹实验和酶联免疫的区别如下：免疫印记一般是要把检测的样品转到膜上,再用抗体检测酶联免疫一般是把抗体固定在支持物上,再与要检测的样品反应,目标物就会与抗体结合而留在支持物上。WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB只能用抗体去检测你的蛋白样品。ELISA可以固定抗原也可以固定
磷酸化蛋白做WB小妙招
1、一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂；2、加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间，因为磷酸化的蛋白只占总蛋白量的极少部分；3、选择优质的磷酸化抗体，所以要选好的厂商，Novus为全球高端抗体品牌，其磷酸化抗体效果不错；4、抗体的稀释倍数要优化，
wb跑出双条带可以用吗
wb跑出双条带可以用。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
wb条带反白可以洗了重新孵吗
可以洗了重新孵。孵育抗体要低速，洗膜可以相对快一点。将抗体洗掉，再用内参抗体重新杂交，结果显示信号一致，就可以认为上样量一致。条带中间出现白色反白原因是中心部位高浓度HRP将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光。
WB－PVDF膜为什么要用甲醇泡
SDS-PAGE蛋白跑胶过的蛋白质带负电荷，用甲醇处理PVDF膜的目的是活化膜上的正电基团，这样其就更容易与带负电荷的蛋白质结合
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗选择要考虑的问
wb下层胶不平整会有什么影响
v是有较大影响的，胶体薄的位置防水性能与防潮性能较差，其他性能也会随之降低。胶体略厚的位置，很难用针探测元器件，零部件在出现故障后，不容易找出来。胶体固化后高低不平，还会导致电器性能不稳定，在运作过程中，零部件即使用螺丝紧固，胶液层厚的位置依然会出现轻度倾斜，长期使用会增加电器出现故障几率。
wb牛奶封闭太久会怎么样
不可以。一是有的保温瓶的内胆不适合装出了水以外的任何液体,容易起反应二是牛奶入锅装在保温瓶里超出一定的时间就会发酵变质。
你的－WB－内参选对了么？
你的 WB 内参选对了么？ 关键词： 科研 WB 内参 2019-08-14 17:00 来源：CST 点击次数：19 要想底气十足地秀
wb条带反白可以洗了重新孵吗
可以洗了重新孵。孵育抗体要低速，洗膜可以相对快一点。将抗体洗掉，再用内参抗体重新杂交，结果显示信号一致，就可以认为上样量一致。条带中间出现白色反白原因是中心部位高浓度HRP将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光。