斑点杂交的DNA斑点杂交方法
①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干，密封保存备用。......阅读全文
核酸杂交法检测病原微生物
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高，但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片段作探针，用
核酸杂交法检测病原微生物
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高，但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片段作探针，用
风疹的实验室检查
（1）外周血象白细胞总数减少，淋巴细胞增多，并出现异形淋巴细胞及浆细胞。 （2）病毒分离风疹患者取鼻咽分泌物，先天性风疹患者取尿、脑脊液、血液、骨髓等培养于RK-13、非洲绿猴肾异倍体细胞系（verocells）或正常兔角膜异倍体细胞系（SIRCcells）等传代细胞，可分离出风疹病毒，再用免
六一凝胶成像分析系统产品特点
凝胶成像分析系统特点 暗箱式，无需暗室，可全天候使用抽屉式灯箱，使用方便，防止污染具有实时预览，手动对焦功能紫外滤光镜：EB专超多层镀膜滤光镜兼容 tif、jpg、bmp、gif等诸多图像格式可在暗箱中直接进行切胶操作功能强大的分析软件1.图象处理功能：调整图像大小、调整亮度、调整灰度、调整对比度、
HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法
PCR－SSO（ASO）探针法1）常规提取DNA参见RFLP法 2）PCR扩增参见PCR-RFLP法 3）斑点杂交1．将5～20μl扩增产物，加变性液100～200μl室温处理5～15min。2．在尼龙滤膜（预先用2×SSC浸湿2min）上真空点样，每孔以10×SSPE 200μl冲洗，抽干，80℃
关于核酸的分子杂交的检查过程介绍
(1) rRNA-DNA杂交：变性rRNA与变性DNA混合时，rRNA与其互补的DNA链形成杂交双链，rRNA分子与异源DNA杂交时，也能在其同源区形成互补双链，这种杂交双链的稳定性与其同源性成正相关，适于细菌属及属上水平的分类研究。现最常用的是硝酸纤维膜结合法。 (2) 核酸探针技术 应用
PCR检测地中海贫血
地中海贫血（Thalassemia）是一种遗传性慢性溶血性贫血病，是世界上最常见且发病比最高的一种单基因遗传病。在两广、贵州、四川等地发病率较高，在广西等地高达15%。地中海贫血是由于基因突变造成珠蛋白的不平衡，使结构正常的肽链合成量减少甚至没有合成表现为溶血性贫血。接受累基因种类分为α、β、γ
风疹的实验室检查及辅助检查
实验室检查 （1）外周血象白细胞总数减少，淋巴细胞增多，并出现异形淋巴细胞及浆细胞。 （2）病毒分离风疹患者取鼻咽分泌物，先天性风疹患者取尿、脑脊液、血液、骨髓等培养于RK-13、非洲绿猴肾异倍体细胞系（verocells）或正常兔角膜异倍体细胞系（SIRCcells）等传代细胞，可分离出风
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（二）
5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪开，小心取出滤膜，立即浸入盛有2×SSC和 0.5%SDS溶液的盘中，室温下漂洗5min。再将滤膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室温下洗涤15min（轻轻摇动）。然后将滤膜移入 0.1×SSC和0.5%SDS溶液中；68℃轻轻摇动保温2h，更换缓冲液后继
丁型病毒性肝炎的辅助检查及诊断
辅助检查 丁型肝炎的特异性诊断方法为从肝脏和血清检测HDAg或HDV-RNA，或从血清检测抗-HD、抗-HDIgM，均做为诊 断的依据。 1、HDAg 用免疫酶法或放射免疫法检测血清HDAg，如为阳性，有助于早期诊断。慢性HDV感染时，由于血清中抗-HD滴度高，HDAg多以免疫复合物形成存
关于人乳头瘤病毒感染的实验室检查介绍
1.电镜检查 HPV是最早在电镜下观察到的病毒之一，将活检标本负染，若能在电镜下见到特征性的病毒颗粒，即可作出诊断；而用免疫电镜可提高检出率。电镜检查法虽然准确率很高，但费时，需特殊仪器设备，且检出阳性率很低。 2.PCR技术 应用此法可检测HPV-DNA，还可进行基因分型。灵敏度可达1fg，
羊水检查性别基因诊断简介
随着基因的诊断技术发展,胎儿性别诊断有了更准确、更灵敏的方法,使对于性连锁疾病诊断的正确性可靠性大为提高。最常用的方法是： 1．Y特异DNA探针对人性别诊断,有关Y染色体DNA的探针有多种,如PHY3.4,PHY2.1等,最公认的是Y染色体特异的SRY基因,在男性性别决定中起关键作用。将羊水细
小儿轮状病毒肠炎的检查诊断
粪便镜检白细胞0～3/HP，细菌培养无致病菌。病原学诊断最初通过电镜、免疫电镜从十二指肠引流液及粪便中直接看到轮状病毒颗粒获诊断，但不适于临床常规应用。目前多采用免疫学或核酸方法来检测粪便中抗原，一般4h即可出结果。国内以酶联免疫吸附试验(ELISA)及提取粪便中病毒RNA，作核酸凝胶电泳(PA
关于小儿风疹的检查方法介绍
(1)血常规：外周血象白细胞计数减少，淋巴细胞相对增多，并出现异型淋巴细胞和浆细胞。 (2)血清特异性抗体测定：方法有血凝抑制试验、补体结合试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附试验等，其中以血凝抑制试验最常用，因其具有快速、简便、可靠的优点。特异性抗体此抗体IgM出现最早，但维持时间较短；IgG抗
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含体，为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此，可在光学显微镜下，利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
小儿轮状病毒肠炎的检查诊断及鉴别诊断
检查诊断 粪便镜检白细胞0～3/HP，细菌培养无致病菌。病原学诊断最初通过电镜、免疫电镜从十二指肠引流液及粪便中直接看到轮状病毒颗粒获诊断，但不适于临床常规应用。目前多采用免疫学或核酸方法来检测粪便中抗原，一般4h即可出结果。国内以酶联免疫吸附试验(ELISA)及提取粪便中病毒RNA，作核酸凝
如何看待病毒性肝炎的基因诊断？
基因诊断是指检测感染者体内病毒核酸的有无,或含量多少来进行病原学诊断的一类方法,它可用在各种感染性疾病的诊断中,尤其在病毒性肝炎的诊断得到广泛应用。病毒性肝炎基因诊断包括病毒基因种类及含量、基因分型、亚型和变异及准种等的诊断。由于甲型肝炎和戊型肝炎无慢性化,且有较好的血清学诊断指标,故一般不需进行
如何看待病毒性肝炎的基因诊断
基因诊断是指检测感染者体内病毒核酸的有无,或含量多少来进行病原学诊断的一类方法,它可用在各种感染性疾病的诊断中,尤其在病毒性肝炎的诊断得到广泛应用。病毒性肝炎基因诊断包括病毒基因种类及含量、基因分型、亚型和变异及准种等的诊断。由于甲型肝炎和戊型肝炎无慢性化,且有较好的血清学诊断指标,故一般不需进
丁型病毒性肝炎的辅助检查
丁型肝炎的特异性诊断方法为从肝脏和血清检测HDAg或HDV-RNA，或从血清检测抗-HD、抗-HDIgM，均做为诊 断的依据。 1、HDAg 用免疫酶法或放射免疫法检测血清HDAg，如为阳性，有助于早期诊断。慢性HDV感染时，由于血清中抗-HD滴度高，HDAg多以免疫复合物形成存在，须用免疫
关于新生儿柯萨奇病毒B感染的实验室检查介绍
实验室检查是本病早期和确定诊断的主要依据，主要包括病毒分离、血清学特异性抗体的检测等。 （1）病毒分离应早期进行CVB分离培养，以提高病原的阳性检出率。标本可选择患儿的分泌物（咽拭子、直肠拭子、粪便等）、血液、脑脊液及组织细胞等，通过海拉（Hela）细胞和人胚肺成纤维细胞传代培养，直至细胞出现
试管婴儿植入前遗传学诊断单细胞PCR的方法(2)
7．等位基因特异性扩增 在设计引物时，根据已知突变位点的特征，在引物3’端或中间设计一错配碱基，使之仅能与突变型或野生型基因互补，而只扩增相对应的突变型或野生型基因。主要用于点突变导致的遗传病的检测。其优点是只需一步PCR，而无需电泳和标记，摆脱了分子生物学方法中必经电泳的现象。在相互竞争的突变
研究T细胞产生的细胞因子的方法
研究T细胞产生的细胞因子的方法1）研究细胞因子mRNA的方法绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。检测细胞因子mRNA的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、Northern
基因缺失型遗传的诊断方法
（1）α地贫的基因诊断：α地贫主要是由于基因缺失引起的，缺失的基因可以由1－4个。正常基因组用BamHⅠ切割，可以得到一个14kb的片段，而缺失一个α基因时切点向5’端移位，得到一条10kb的片段。因此，当用α基因探针与基因组DNA进行Southern杂交时（图13－8），在α地贫2可见一条14kb
丁型病毒性肝炎的诊断
根据临床表现特征的诊断甚为不易，下述线索可资提示:①HDV流行区内HBsAg携带者发生的肝炎。②急性乙型肝炎出现双峰性血清ALT和胆红素浓度波动。③病情已趋稳定的非活动性病例突然出现肝炎活动，或慢性乙型肝炎病程中表现进行性恶化。④HBV复制指标本已降低或消失而临床表现反见恶化的病例。但是，确诊则
TMB单组分显色液使用说明
产品简介:目前酶免疫分析（EIA)技术，已被广泛应用于抗原，半抗原或抗体的定量或定性检测分析。辣根过氧化物酶（HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶，由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB)在HRP的显色反应体系中，比其它色原具有更高的灵敏度且无至癌性而被广泛应用。
DNA文库的构建及其筛选
实验材料 DNA试剂、试剂盒 升汞MS培养基琼脂糖EcoR IHind IIIBamH IBg lII Pst I仪器、耗材 电泳仪尼龙膜实验步骤 1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过
单核细胞增生李斯特氏菌的分子生物学检测方法
随着核酸探针杂交技术的应用，使对单核细胞增生性李斯特氏菌的检测进入了分子水平。 1、探针检测技术 这一技术是最早应用于李斯特氏菌检测的分子生物学技术。早在1988年，Atin 等就克隆出李斯特氏菌β溶血素基因的一个500bp DNA 片断并测序，以此序列合成4种寡核苷酸探针，以32P 标记该
细菌鉴定方法
1．生化鉴定 是细菌鉴定中最重要的一种，主要是借助细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对细菌进行鉴定，包括蛋白质分解产物试验、触酶试验、糖分解产物试验、氧化酶试验、凝固酶试验等。 2．血清学鉴定 适用于含较多血清型的细菌，常用方法是玻片凝集试验，并可用免疫荧光法、协同凝集试验、对
分子生物学检查的方法及在血液学中的应用
1．分子生物学检查的方法血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。2．分子生物学检查在血
PCR在临床检验中的应用（四）
遗传病是由于遗传基础异常而引起的疾病，人类遗传病约有3000多种，患者占总人口数的10％。遗传病大概可分为单基因、多基因及染色体遗传病。常用诊断方法有家系谱分析、染色体检查（特别是显带法）、生物化分析等。随分子生物学发展，基因诊断愈来愈表现出其优越性，PCR技术是基因诊断的主要技术之一，为快速、准确