HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法
PCR－SSO（ASO）探针法1）常规提取DNA参见RFLP法 2）PCR扩增参见PCR-RFLP法 3）斑点杂交1．将5～20μl扩增产物，加变性液100～200μl室温处理5～15min。2．在尼龙滤膜（预先用2×SSC浸湿2min）上真空点样，每孔以10×SSPE 200μl冲洗，抽干，80℃干燥2h。3．标记探针，取标记缓冲液2.5μl，寡核苷酸片段（dCTP, dGTP, dTTP）50～100ng，[γ-32P]ATP 2.5μl，T4多核苷酸酶10U，双蒸水加至25μl，混匀，37℃保温45min，用0.5mol/L EDTA 1μl终止反应，标记的探针可直接使用或采用柱层析分离标记好的探针。4．点样膜于杂交前漂洗，放入杂交袋中，加入适量预杂交液2ml/250px2在杂交温度下预杂交10～60min，将适量标记探针加入预杂交液中，杂交1h～过夜。5．洗膜，2×SSPE和0.1％SDS于杂交温度洗......阅读全文
HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法
PCR－SSO（ASO）探针法1）常规提取DNA参见RFLP法 2）PCR扩增参见PCR-RFLP法 3）斑点杂交1．将5～20μl扩增产物，加变性液100～200μl室温处理5～15min。2．在尼龙滤膜（预先用2×SSC浸湿2min）上真空点样，每孔以10×SSPE 200μl冲洗，抽干，80℃
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常规制备DNA盐析法1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动1
HLA分型方法
1.淋巴细胞毒试验 为HLA抗原分型常用方法。2.混合淋巴细胞培养试验本方法多用于组织相容性方面的研究，临床上主要用于器官移植。3.分子生物学技术一类是PCR为基础的基因分型。另一类是以测序为基础的基因分型。
HLA分型的方法
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
HLA的分型方法
HLA的分型方法是检验主管技师考试要求掌握的内容，医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。 1.淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（>20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
HLA有哪些分型方法？
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率(>20%为阳性反应)。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
关于HLA分型的DNA分型方法介绍
DNA分型主要分为两种方法：基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法，常用的方法大致可分为大类： ①限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism，RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差异在限制性内切酶作用下将被切成大小
HLA分型技术
HLA分型技术主要组织相容性复合物（MHC）是脊椎动物体内最复杂且具有高度多态性的基因群。1984年George Snell 首次发现小鼠MHC即H－2，1958年Dausset 发现了人的MHC即HLA基因。MHC的表达产物称为主要组织相容性抗原，MHC抗原是有核细胞表面膜蛋白分子，对抗原递呈和免
HLA的分型方法有什么？
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（>20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。 ②混合淋巴细胞培养
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
应用非标记探针法进行基因分型（一）
RET原癌基因单个碱基的突变可以引发多发性内分泌腺瘤2型。RET突变传统的基因分型方法是外显子测序。一种闭管操作的基因分型方法已经成熟，此方法用的是一种饱和DNA染料，非标记探针及高分辨率熔解扩增子分析。此方法需要两个连续的聚合酶链式反应阶段，主要的和第二次实验。主要的实验共用7个反应和8个非标记探
应用非标记探针法进行基因分型（四）
外显子10和11：多重突变热点MEN2A和FMTC的主要突变位于外显子10（密码子609、611、618和620）和11（密码子630和634），且野生型半胱氨酸的密码子DNA序列“TGC”发生单核苷酸改变。外显子10和11报道的序列变化>40（表1）。RET10外显子的主要实验包括两个单独的实验和
应用非标记探针法进行基因分型（五）
用相似的方法分析外显子11（表3；补充图2；补充表3；http://jmd.amjpathol.org），且所有外显子11的RET序列变化用扩增子高分辨率熔解分析进行检测（没有显示数据）。外显子11的主要实验用一个在致病密码子630和634上的野生型探针。检测的外显子11的8个序列变化均有一个等位基
应用非标记探针法进行基因分型（三）
高分辨率熔解 在高分辨率熔解仪器HR-1（爱荷华科技，盐湖城，犹他州）上进行分析，将LightCycle毛细管加入HR-1中，0.3℃/s加热。主要的实验中，RET外显子的扩增及非标记探针熔解数据从60℃到95℃采集。主要实验分析了每个外显子的扩增子及探针数据，除了外显子14。因为所有报道的外显子1
应用非标记探针法进行基因分型（二）
材料和方法样品 此报道中用到的野生型RET基因的DNA基因组样品或有RET序列变化的样品在以前描述过。RET基因序列变化改变RET蛋白的功能引发MEN2综合症的是突变，然而RET序列改变不会引发MEN2综合症是多态。不能确定意义的稀有的或不会引起MEN2综合症的RET基因序列变化成为“序列
应用非标记探针法进行基因分型（六）
外显子14：多重探针分析 主要实验的外显子14， 两个野生型的探针同时用于一个反应，用来检测所有已报道的外显子14的突变，同时消除密码子836（p.S836S）多态性（图4；a和b；表3；补充表5；http://jmd.amjpathol.org）。WT14A探针在65℃-76℃
应用非标记探针法进行基因分型（七）
一般来说，用特定突变探针产生1/3结果。首先，当突变序列与特定突变探针互补时，突变等位基因的熔解Tm要高于野生型（△Tm为-2℃至-5℃）。第二，当突变在相同位置但是与特定突变探针序列不互补时，突变等位基因被野生型等位基因相似的Tm值及稳定性所遮蔽（野生型等位基因Tm±0.5℃）。在这种情况下，没有
HLA分型的常用方法有哪些？
1.分子生物学技术： 一类是PCR为基础的基因分型，一类是以测序为基础的基因分型。2.淋巴细胞毒试验： 为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T
HLA分型技术（二）
（二)PCR/SSO技术 此法乃用人工合成的HLA型别特异的寡核苷酸序列作为探针，与待检细胞经PCR扩增的HLA基因片段杂交，从而确定HLA型别，PCR技术可将HLA复合体上指定基因片段特异性地扩增5～6个数量级；而专门设计的SSO（序列特异的寡核苷酸sequencedpecific ol
HLA分型技术（一）
HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。60年代建立的并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性；80年代起建立的DNA分型方法则侧重于基因的分型。 一、血清学分型技术 （一)HLA-Ⅰ类抗原
分子生物学分型法有哪些？
（一）RFLP与PCR－RFLP分型法 限制性片段长度多态性（RFLP）分析，称为DNA－RFLP。DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度增加，此类方法称为PCR-RFLP分型法。PCR－RFLP分型法所应用的PCR引物为HLA组特异性的，此法特别适应于
sbt做hla基因分型分析怎么做
sbt做hla基因分型分析怎么做HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究；90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。HLA分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA的DNA分型方
HLA分型的血清学方法介绍
1964Terasaki建立了HLA微量淋巴胞毒实验方法来分析受试者的HLA型别，其主要过程是从全血或淋巴组织中分离出淋巴细胞，与HLA-特异性抗体包被的微孔板孵育，加入补体，使能与淋巴细胞表面HA抗原结合的特异性抗体通过经典途径激活补体，导致靶细胞水解(淋巴细胞毒性)。多年来这种血清学方法是确
HLA抗原的检测（二）
（四)HLA-DP抗原的检测 HLA-DP抗原的检测可采用预处理淋巴细胞分型试验（primed lymphocyte typing test,PLT)基本步骤是首先取有一个单倍体相同的两个个体的淋巴细胞进行混合培养，这在双亲与子女间很容易找到，如亲代a/b,子代a/c。先将a/c经X线照射
Lightscanner－和Lightscanner32－非标记探针法基因分型
Lightscanner 和Lightscanner32 非标记探针法基因分型载脂蛋白（ApoE）多重实验密码子112（T>C）密码子158（C>T）实验背景 载脂蛋白（ApoE）是一种糖蛋白，包括299个氨基酸，在身体调节胆固醇水平上起主要作用。胆固醇水平过高是冠心病的主要因素，在美国，
关于HLA分型高分辨分型应用的介绍
1、地中海贫血治疗 2、造血干细胞移植异基因造血干细胞移植是现能根治重型Β地贫的方法。如有HLA相配的造血干细胞供者，应作为治疗重型Β地贫的首选方法。 3、急性白血病，骨髓移植。 4、对ANLL疗效较好。 ①同基因骨髓移植，供者为同卵孪生子。 ②同种异基因骨髓移植，供者为患者的兄弟姐妹
关于HLA基因复合体的分型技术介绍
HLAⅠ类抗原的DQ、DR用血清学检测法进行分型，因此在方法学上称为血清学鉴定的抗原（serologicallydefinedantigen，SD抗原）；DP和D特性需用细胞学方法进行检测，因此称为淋巴细胞鉴定的抗原（lymphocytedefinedantigen，LD抗原）。虽然HLA的基因