以胚胎小鼠为例进行原代培养的方法

1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。2.用Hanks液洗涤3次,剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织。3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加人少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶......阅读全文

以胚胎小鼠为例进行原代培养的方法

1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。2.用Hanks液洗涤3次,剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织。3.用弯头剪

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

原代细胞培养可应用于:(1)分子生物学;(2)细胞生物学;(3)遗传学;(4)免疫学;(5)肿瘤学;(6)病毒学等领域。实验方法原理原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的组织(或器官),经胰酶消化,

小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养

实验概要小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养主要试剂75%酒精、0.05%Trypsin、SP、DPBS、细胞基础培养液 主要设备35 mm培养皿、60 mm培养皿、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、冻存管、眼科剪、眼科弯镊、离心机实验材料怀孕13.5天【将成年雌、雄小鼠放在同笼中饲养

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养

实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF生长培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料 孕鼠试剂、试剂盒 PBSEDTA胰酶MEF生长培养基FBS高糖DMEM仪器、耗材 眼科直剪眼科直镊眼科弯镊玻璃平皿3尼龙滤网离

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可以:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗相关研究。实验方法胰酶消化法1胰酶消化法2实验方法原理将小鼠的胚胎成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF生长培养基中培养,使细胞得以生存、生

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验

胰酶消化法1 胰酶消化法2             实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验

胰酶消化法1 胰酶消化法2             实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF

胚胎小鼠纹状体神经干细胞分离培养鉴定_原代传代培养

实验材料孕13d的昆明种二级小鼠试剂、试剂盒胎牛血清青霉素链霉素胰酶阻断剂葡萄糖台盼蓝蔗糖酚红磷酸氢二钾磷酸氢二钠FITC 偶联荧光抗小鼠二抗氯化钠氯化钾碘酒乙醇仪器、耗材解剖剪虹膜剪眼科剪离心机自动双重纯水蒸馏器微孔滤膜滤器培养箱体视显微镜无菌超净工作台培养瓶96孔细胞培养板24孔细胞培养板6 孔

斑马鱼胚胎细胞的培养——原代培养

实验方法原理收集胚胎,除去绒毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎细胞,然后在胚胎成纤维细胞饲养层上培养从斑马鱼囊胚和原肠期胚获得的原代细胞。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纤维细胞饲养层人重组白血病抑制因子试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培

小鼠肝细胞原代培养

实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS仪器、耗材 饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器实验

小鼠原代海马神经元细胞的分离培养方法

原代小知识——小鼠原代海马神经元细胞的分离培养方法海马体主要负责记忆和学习,日常生活中的短期记忆都储存在海马体中。神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起,由细胞体和细胞突起构成。小鼠海马神经元细胞的组织来源于实验小鼠的正常脑组织,因为海马神经元细胞类似于干细胞属于高分度分化的细胞

小鼠肝细胞原代培养实验

胰酶消化法             实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 

小鼠肝细胞原代培养实验

胰酶消化法             实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 

小鼠腹腔巨噬细胞原代培养

实验方法原理 巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309

小鼠肝细胞原代培养实验

小鼠肝细胞原代培养可以:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法胰酶消化法实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM 无血清DMEM

小鼠胚胎干细胞的培养

实验概要了解小鼠胚胎干细胞的培养方法。主要试剂1. 贮存液 DMEM(高糖) 胎牛血清 L-谷氨酰胺(200mM) MEM NEAA(10mM) HEPES(1M) β-巯基乙醇(55Mm) 转铁蛋白50mg/ml 胰岛素5mg/ml 亚硒酸钠300μM 黄体酮(20μM) 腐

小鼠胚胎干细胞的培养

完全培养基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巯基乙醇(GIBCO 21985); 1

原代胚胎成纤维细胞培养

实验方法原理细胞培养是模拟机体内生理条件,将细胞从机体内取出,在人工条件下培养,使细胞生存、生长、繁殖和传代,从而可以进行细胞生命过程、细胞癌变等问题的研究。由体内直接取出组织或细胞进行细胞培养叫做原代细胞培养,也有的把第1代细胞与传10代以内的细胞培养统称为原代细胞培养。一般来说,用幼嫩状态的组织

原代胚胎成纤维细胞培养

实验器材手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。实验试剂无Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞(MEF)生长培养基:高糖DMEM

原代胚胎成纤维细胞培养

原代胚胎成纤维细胞培养             实验方法原理 细胞培养是模拟机体内生理条件,将细胞从机体内取出,在人工条件下培养,使细胞生存、生长、繁殖和传代,从而可以进行细胞生命过

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验_胰酶消化法2

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)分子生物学研究;(3)基因治疗相关研究。实验方法原理将小鼠的成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF生长培养基培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料小鼠试剂、试剂盒PB

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验_胰酶消化法1

实验方法原理将小鼠的胚胎成纤维细胞(MEF)从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置MEF生长培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料孕鼠试剂、试剂盒PBSEDTA胰酶MEF生长培养基FBS高糖DMEM仪器、耗材眼科直剪眼科直镊眼科弯镊玻璃平皿3尼龙滤网离心管手术

毛冠鹿胚胎有限细胞系的原代培养方法

毛冠鹿细胞原代培养参见施立明等的方法,在无菌条件下取出毛冠鹿胚胎的肺和肾组织,用含双抗(青霉素、链霉素各0.1U/mL)的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次,去血污,再用GIBCO199培养液洗1次。在无菌培养皿中剪成1mm×1mm×1mm大小的组织块,置培养瓶中贴壁,翻转180°,CO2培养箱内静置3

小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验

腹腔取材法             实验方法原理 巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞

小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验

小鼠腹腔巨噬细胞原代培养可以:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法腹腔取材法实验方法原理巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3

小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验

腹腔取材法             实验方法原理 巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞

如何进行细胞原代培养

如何进行细胞原代培养细胞原代培养和传代培养的区别原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

如何进行细胞原代培养

如何进行细胞原代培养细胞原代培养和传代培养的区别原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。