单克隆抗体技术的基本流程
单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加入HAT选择培养基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故可在HAT选择培养基中存活和增殖。......阅读全文
单克隆抗体技术的基本流程
单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加入HAT选择培养基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故
单克隆抗体制备的流程
原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力
单克隆抗体技术的基本原理
要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆 B 淋巴细胞,但这种 B 淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一,得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承了两种亲代细胞的特性,既具有 B 淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有
单克隆抗体技术的基本原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG
简述单克隆抗体技术的基本原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇
单克隆抗体技术的技术特点
一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需要制备具有不
单克隆抗体技术的技术特点
一是特异性,针对特定的单一抗原表位,它具有高度的特异性,抗肿瘤抗体药物的研究表明,其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。二是多样性,主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。三是定向性,抗体药物可以定向制造,就是根据需要制备具有不
单克隆抗体技术的技术特点
①蛋白质的精细结构；②淋巴细胞亚群的表面新抗原；③组织相容性抗原；④激素和药物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤肿瘤的定位和分类；⑥纯化微生物和寄生虫抗原；⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊
单克隆抗体技术的技术应用
疾病诊断利用单抗进行疾病的诊断目前主要表现在人类疾病和畜禽传染病的诊断方面，尤其在一些感染性疾病和肿瘤的诊断方面。主要通过鉴定病原体或肿瘤抗原来诊断人是否感染相应疾病。疾病治疗目前利用单抗对疾病进行治疗已取得了很大的成果，主要是将单抗同药物耦联，再与病原体或肿瘤的特异抗原结合后发挥作用。食品卫生目前
单克隆抗体技术
实验原理 B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养 基（HAT）阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产生抗体，又能无限增殖，并以此生产抗
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产
Westernblot的基本流程
1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置
单克隆抗体技术的技术类型划分
鼠源性抗体杂交瘤单克隆抗体制备技术的基本原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞在体外进行融合，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养(克隆化)，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能不断繁殖的杂
单克隆抗体技术的原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇
单克隆抗体技术的方法
1、抗原准备抗原(Ag)是指所有能诱导机体发生免疫应答的物质。即能被 T/B 淋巴细胞表面的抗原受体(TCR/BCR)特异性识别与结合,活化 T/B 细胞,使之增殖分化,产生免疫应答产物(致敏淋巴细胞或抗体),并能与相应产物在体内外发生特异性结合的物质。因此,抗原物质具备两个重要特性:一是诱导免疫应
单克隆抗体技术的介绍
单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique) 1975年英国科学家Milstein和Kohler所发明，并获得1984年诺贝尔医学奖。 1984 德国人G. J. F.Kohler、阿根廷人C. Milstein[3]和丹麦科学家N. K. Jerne由于发展了单
单克隆抗体技术的特点
一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。 二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。 三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需
冻干技术的基本原理和操作流程
(一) 制品的冻结 溶液速冻时(每分钟降温10~50℃),晶粒保持在显微镜下可见的大小；相反慢冻时(1℃/分),形成的结晶肉眼可见。粗晶在升华留下较大的空隙,可以提高冻干的效率,细晶在升华后留下的间隙较小,使下层升华受阻,速成冻的成品粒子细腻,外观均匀,比表面积大,多孔结构好,溶解速度快,便成
关于单克隆抗体的基本介绍
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，
单克隆抗体的基本概念
动物脾脏有上百万种不同的 B 淋巴细胞系,选择性表达出不同基因的 B 淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个表达不同基因的 B 细胞。被激活的 B 细胞分裂增殖形成效应B 细胞(浆细胞)和记忆 B 细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液
单克隆抗体技术简介
一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞进行细胞融合， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
分子诊断的基本流程
多年来，大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用
超临界流体萃取技术的基本原理，工艺流程，基本特点
超临界流体(SCF)的特性超临界流体(SCF)是指物体处于其临界温度(Tc)和临界压力(Pc)以上状态时，向该状态气体加压，气体不会液化，只是密度增大，具有类似液体的性质，同时还保留气体的性能。超临界流体兼具气体和液体的优点，其密度接近于液体，溶解能力较强，而黏度与气体相近，扩散系数远大于一般的液体
单克隆抗体技术的临床应用
疾病诊断 利用单抗进行疾病的诊断目前主要表现在人类疾病和畜禽传染病的诊断方面，尤其在一些感染性疾病和肿瘤的诊断方面。主要通过鉴定病原体或肿瘤抗原来诊断人是否感染相应疾病。 疾病治疗 目前利用单抗对疾病进行治疗已取得了很大的成果，主要是将单抗同药物耦联，再与病原体或肿瘤的特异抗原结合后发挥作
单克隆抗体技术：细胞的选择
脾细胞 1．材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的
单克隆抗体技术的医学应用
利用单抗进行疾病的诊断目前主要表现在人类疾病和畜禽传染病的诊断方面,尤其在一些感染性疾病和肿瘤的诊断方面。主要通过鉴定病原体或肿瘤抗原来诊断人是否感染相应疾病。目前利用单抗对疾病进行治疗已取得了很大的成果,主要是将单抗同药物耦联,再与病原体或肿瘤的特异抗原结合后发挥作用。
单克隆抗体技术的优缺点
单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的，杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的B细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点：纯度高，灵敏度高，特异性强，交叉反应少，制备的成本低。缺点：对技术有一定的要求，而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位 。
单克隆抗体技术的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
单克隆抗体技术的特点简介
一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。 二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。 三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需