Westernblot的基本流程
1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置于振荡器上，直**鼻涕状液体消失）。冰上放置**少半小时。 2.煮蛋白：12000rpm，15min离心，吸取上清，加入Loading buffer后于沸水中煮5min后,放于-80保存。 3.清水洗玻璃板，无水酒精擦洗干净，夹胶圈，防止漏胶。 4.配制10%分离胶，加入垂直板中，再加入1ml水液封（加入TEMED立即摇匀加入，加水液封时要缓慢些，防止把胶冲变形）。 5.20分钟后，把上清水倒掉，用滤纸把剩余的水吸干。配制5%浓缩胶（按1.5倍体积配液，保证足量），立即加入分离胶上层（**不能出现空泡），立即插梳子。10-20......阅读全文
Westernblot的基本流程
1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置
Westernblot
实验概要免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原—抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而定量或定性地确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blot还可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA
Westernblot法的应用
Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法,并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。蛋白质分析中应用的
什么是Westernblot法？
Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
Westernblot法的起源和发展
生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术,其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。生物大分子印迹法始创于1975年,内苏格兰爱丁堡大学E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳,把一张硝酸纤维素纸放在
分子诊断的基本流程
多年来，大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用
Westernblot法实验所需仪器
伯乐生命bio-rad-Trans-Blot 转印槽是一种多功能仪器,适用于多种Westernblot法应用。功能和优点:能进行多胶转印多组参数灵活可设,可调节的电压设置(从30V的过夜转印到到 200 V的1 小时快速实验)。电极间距设置为8cm可用于标准转印,设置为4cm用于高强度转印。采用特级
WesternBlot目的带很弱如何加强？
1）可以加大抗原上样量，这是最主要的；2）也可以将一抗稀释比例降低；3）还可以延长曝光时间。
气相色谱的基本流程
从图中可以看出，气相色谱仪通常由以下五个部分组成：1)气源和载气的控制和测量(1)气源气源多采用高压瓶(氢、氮、氩等)做高纯气的储存器，并装有减压阀，使高压气体减压 成低压气体(0．1-O．5MPa)以供使用。钢瓶供给的气体称为流动相，又称载气。载气的作用 主要是把样品输送到色谱柱和检测器中
纸电泳的基本操作流程
(1) 电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH3.0) 取枸橼酸 (C6H8O7·H2O)39.04g与枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g，加水4000ml，使溶解。(2) 滤纸 取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干，备用。
射线探伤基本操作流程
透照操作应严格遵守工艺规定，操作程序、内容及有关要求简述如下：试件检查及清理试件上如有妨碍穿透或妨碍贴片的附加物，如设备附件、保温材料等，应尽可能去除。事件表面质量应经外观检查合格，如表面不规则状态可能在底片上产生掩盖焊缝中缺陷的图像时，应对表面进行打磨休整。 划线按照工艺文件规定的检查部位、比
Westernblot实验步骤及注意事项
Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃4. 加入PMSF（每克组织30μ
WesternBlot有很多杂带原因分析
1）目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作3）杂蛋白多，建议处理目的蛋白4）抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体5）抗体孵育
水浴锅的使用基本流程
（1） 水浴锅使用时必须先加适量的洁净自来水于锅内，也可按需要的温度加入热水，以缩短加热时间。 （2）接通电源，选择温度。 配备电子式恒温器时，将“温度旋钮”顺时针调节到所需要的温度，此时为加热状态，绿色指示灯亮。当加热到所需温度时，红色指示灯亮，此时为恒温状态。 配备数显表头时，计数器
浓缩蒸发器基本流程
浓缩蒸发器的蒸发过程需要有蒸发器、冷凝器、换热器等组成。即两个组成部分，加热溶剂使水蒸气汽化和不断除去汽化的水蒸气，前一部分在蒸发器内进行，后一部分在冷凝器完成。浓缩蒸发器实质上是一个换热器，由加热室的分离室两部分组成。加热室通常用饱和水蒸气加热，从溶液中蒸发出来的水蒸汽在分离室内分离后从蒸发器
WesternBlot实验方法及注意事项
实验原理：WesternBlot印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经辣根过氧化
液相色谱仪的基本操作流程
液相色谱仪操作流程1、开机：依次打开脱气机、色谱泵、检测器、计算机电源；待各设备自检正常后，启动色谱管理系统。2、流动相准备：过滤，脱气。3、色谱泵排气4、安装色谱柱5、平衡流动相（有机溶剂与缓冲盐溶液切换时等易产生沉淀，需先使用90%超纯水/10%甲醇作为流动相冲洗系统）6、数据采集、进样7、冲洗
加压溶气气浮法的基本流程
加压溶气气浮分三种流程：全溶气流程、部分溶气流程和回流加压溶气流程。全溶气流程是将被处理的废水全部进行加压溶气，然后再经释放器进入气浮池，进行固液分离，如图1（a）所示。部分溶气流程是将被处理废水的一部分进行加压溶气，其余废水直接进入浮选池。由于是部分水加压溶气，所以相对于全溶气流程，气泡量较少。如
免疫吸附疗法的基本操作流程
免疫吸附疗法的基本操作流程是将患者血液引出体外,建立体外循环并抗凝,血液流经血浆分离器分离出血浆,将血浆引入免疫吸附器与免疫吸附剂接触,以选择性吸附的方式清除致病物质,然后将净化的血浆回输患者体内,达到治疗目的。有的免疫吸附装置不需要分离血浆,而可直接进行血液灌流式免疫吸附治疗。
简介活性污泥法的基本流程
典型的活性污泥法是由曝气池、沉淀池、污泥回流系统和剩余污泥排除系统组成。污水和回流的活性污泥一起进入曝气池形成混合液。从空气压缩机站送来的压缩空气，通过铺设在曝气池底部的空气扩散装置，以细小气泡的形式进入污水中，目的是增加污水中的溶解氧含量，还使混合液处于剧烈搅动的状态，呈悬浮状态。溶解氧、活性
单克隆抗体技术的基本流程
单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加入HAT选择培养基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故
WesternBlot蛋白条带位置（大小）不对如何整？
胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度。抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间。1）酶失活，建议直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。2）目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体，建议查询相关文献确定。3）标本中不含靶蛋白或靶
WesternBlot为啥条带形状不好看原因分析
1）胶凝的不均匀或聚合不好，建议灌胶前将溶液充分混匀2）某些样品盐浓度较高，建议除盐或将样品盐浓度调成一致3) 缓冲液陈旧，成分改变,可以重配4) 凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走5）电泳时温度过高，可以降低电流或电压6）样品中含有不溶性颗粒，建议样品充分搅拌混匀
PCR的基本原理是什么？其基本流程如何？
一、基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可
实验室检测业务基本流程
1.检测申请人负责填写《化学检测申请单》并提供检测用的样品和相关的技术资料、信息。实验室样品管理员进行收样并有技术负责人进行复核确认。2检测受理本实验室受理检测业务，均由实验室样品管理员统一接收，其它人员不得擅自接收检测样品。样品的检查和管理应按照《样品管理程序》执行。对于例行、重复性和其它简单的检
全自动数字熔点仪的基本操作流程
全自动数字熔点仪工作原理是物质在洁净状态时反射光线，在熔化状态时透射光线。因此物质在熔化过程中随着温度的升高会产生透光度的约变。熔点测定仪采用光电方式自动检测熔化过程。当温度达到初熔点和终容点时，显示初熔温度和终容温度，并保存到检测下一样品。 1.开启电源开关，屏幕显示“欢迎使用****”等内
离子交换色谱实验的基本流程介绍
预处理和装柱 1. 将超纯水与沉降胶按1:3 比例悬浮，轻轻搅匀； 2. 将色谱柱固定到设备支架上，链接出口管道，从柱底端进口反向泵入超纯水，排除管道及筛板中的气泡，停泵，然后从出口端放出部分超纯水，保留1~2cm 高度超纯水，封死出口端，然后正向冲洗进口端管道和适配器，排除筛板和管道中气泡
全自动数字熔点仪的基本操作流程
全自动数字熔点仪工作原理是物质在洁净状态时反射光线，在熔化状态时透射光线。因此物质在熔化过程中随着温度的升高会产生透光度的约变。熔点测定仪采用光电方式自动检测熔化过程。当温度达到初熔点和终容点时，显示初熔温度和终容温度，并保存到检测下一样品。 1.开启电源开关，屏幕显示“欢迎使用***
基因组DNA文库构建的基本流程
基因组 DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DN
全自动数字熔点仪的基本操作流程
全自动数字熔点仪工作原理是物质在洁净状态时反射光线，在熔化状态时透射光线。因此物质在熔化过程中随着温度的升高会产生透光度的约变。熔点测定仪采用光电方式自动检测熔化过程。当温度达到初熔点和终容点时，显示初熔温度和终容温度，并保存到检测下一样品。 1.开启电源开关，屏幕显示“欢迎使用****”等