分光光度(紫外吸收)法检测DNA及RNA的纯度及浓度

1、预热 预热紫外分光光度计10~20min。 2、狭缝石英比色杯 取两只 1mL 的狭缝石英比色杯,一只装入 1mL 蒸馏水,作为空白溶液,用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。 3、DNA纯度及浓度测定 (1)取5μL DNA 待测样品或4μL RNA 样品加入另一只比色杯中,加蒸馏水至1000μL,用无菌石蜡膜堵住杯口,倒转混匀。 (2)将两只比色杯置分光光度计中,调入射光波长,分别用空白溶液调整零点(T 为100,OD 为0),测定持测样品液在260nm,280nm,230nm 的 OD 值。 (3)计算浓度:对于双链 DNA 1.0 OD260=50μg/mL,DNA 样品浓度(μg/μL)为OD260×N(样品稀释倍数)×50/1000。按①方式稀释被测 DNA 样品的浓度为其 OD260值的10倍,即 OD260=0.1时,其浓度为1μg/L。对于单链 RNA 1.0 0D260=40μg/......阅读全文

分光光度(紫外吸收)法检测-DNA-及-RNA-的纯度及浓度

  1、预热  预热紫外分光光度计10~20min。  2、狭缝石英比色杯  取两只 1mL 的狭缝石英比色杯,一只装入 1mL 蒸馏水,作为空白溶液,用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。  3、DNA纯度及浓度测定  (1)取5μL DNA 待测样品或4μL RNA 样品加入另一只比色杯中

琼脂糖凝胶电泳法检测-DNA-及-RNA-的纯度及浓度

  1、DNA 的琼脂糖凝胶电泳检测  (1)配制琼脂糖凝胶  ①称取适量琼脂糖,放入100mL锥形瓶中按胶浓度加入1倍 TAE 或 TBE 缓冲液,于微波炉或水浴中溶解。  ②熔化的琼脂糖冷却至60℃,加入终浓度为0.5μg/mL 的 EB,混匀。  ③将凝胶床水平放置,插入两端的挡板,用滴管吸取

DNA浓度和纯度的测定(分光光度法和溴化乙锭法)

Ⅰ 分光光度法 一、目的 熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。 二、原理 DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收,其吸收峰在 260nm处。波长为260nm时,DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关,也随构型而有差异。 对

紫外分光光度法测DNA浓度怎么算

这个,我测DNA浓度的时候只关注两个数值。一,A260/A280,如果在1.8+—0.2范围内,这就说明提取的DNA还比较纯净。最好是1.8二,浓度,37ug/ml就是37ng/ul,如果你是用1ml菌液小提的话,这个是低了很多。一般小提在100-200ng/ul吧

使用分光光度法检测DNA纯度和计算DNA含量

DNA在260nm处吸收强烈,OD260值为1的溶液相当于大约50μg/mL双链DNA,而蛋白质的特征吸收在280nm处,测定DNA提取物中260nm处和280nm处的吸收值OD260和OD280,可大致判断所提取的DNA的纯度。OD260/OD280的值在1.7~1.9之间,说明提纯度较好,低于1

核酸纯度、浓度与分子量测定实验——紫外分光光度法

核酸纯度、浓度与分子量测定可应用于:(1)分析核酸;(2)为进一步实验提供样品。实验方法原理溴化乙锭是一种荧光染料,在凝胶电泳中,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm,在此波长下,吸光度1 A相当于一定浓度的核酸,可以

紫外吸收法测定核酸浓度与纯度

实验概要学习测定DNA或RNA的浓度与纯度。实验原理核酸分子中的碱基集团含有共轭双键,它们对紫外光有强烈的吸收。核酸的最大吸收波长在260 nm,吸收低峰在230 nm。可以利用核酸的这一特性对其浓度进行测定。在波长260 nm下,A260=1时,双链DNA的含量为50 µg/ml,单链DN

微量紫外分光光度法

  检测原理  微量紫外分光光度法检测的是核酸的纯度和含量,DNA和RNA在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。因此,可以用260nm波长的吸光度测定DNA或RNA浓度,其吸收强度与DNA和RNA的浓度成正比。  对于一个核酸样品,建议先电

紫外分光光度计测DNA浓度的方法

将待测DNA溶液作适当稀释,选用光程为0.5cm的石英比色杯,在紫外分光光度计上测定OD260和OD280的值,按以下公式计算DNA浓度。DNA浓度(ng /µL)=OD260×50×稀释倍数当OD260/OD280 2.0,表示RNA含量较高当OD260/OD280=1.8~2.0,表示DNA较纯

DNA的定量实验原理和步骤

一、 实验原理核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键,在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸的浓度成正比,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。1 OD260相当于dsDNA 50 ug/ml,ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。可以

测定DNA含量用什么方法

组成核酸分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间.核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础.在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml.可以次来计算核酸样品

原子吸收分光光度法检测原子吸收分光光度法

利用原子吸收分光光度法问接测定维生素C的含量,是利用维生素C可以与一些金属离子发生氧化还原反应,通过测定反应掉的金属离子的量,进而间接计算出维生素c的含量。1.1以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法,是利用维生素C分子中的有二烯醇基具强还原性,可被硝酸

使用QuickDrop分光光度计进行核酸定量和分析

产品特点:最小样品量低至0.5 μL 从1.0 ng/μL到2,500 ng/μL的精确DNA定量 LCD触摸屏可独立完成实验及数据分析 比色皿法可进行动力学法和波长扫描 背景介绍:分光光度测定法是一项定量和分析生物成分的成熟技术。其中,核酸是生物实验室最常检测的生物成分之一。确定这

紫外分光光度法检测物质的纯度-乙醇中微量苯的测定

一、实验目的: 1、学习利用紫外可见分光光度计检查物质纯度的原理和方法。2、熟练紫外可见分光光度计的操作。三、实验原理 紫外吸收光谱法是有机分析中一种常用的方法,具有仪器设备简单、操作方便、灵敏度高的特点,已广泛应用于有机化合物的定性、定量和结构鉴定。由于紫外吸收光谱的吸收峰通常很宽,峰的数目也很少

DNA的定量

一、 实验原理核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键,在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸的浓度成正比,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。1 OD260相当于dsDNA 50 ug/ml,ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。可以

如何用紫外分光光度计测DNA浓度

首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。

GB原子吸收法或紫外分光光度法

(一)紫外-可见分光光度法ultravioletvisible absorption spectroscopy根据被测量物质分子对紫外-可见波段范围(150~800纳米)单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定性、定量或结构分析的一种方法.分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度

紫外线吸收法检测臭氧浓度的原理

原理为臭氧对波长 λ=254nm紫外光具有最大吸收稀疏,在此波长下紫外光通过臭氧层会产生衰减,符合兰波特-比尔(Lambert--Beer)定律: I=Ioe-klc :Io-无臭氧存在时入射光强度;I-光束穿透臭氧后的光强度;L-臭氧样品池光程长度;C-臭氧浓度;K-臭氧对光波长吸收系数。根据该公

如何判断提取质粒DNA的纯度

可以通过紫外吸收检测。因为核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值,估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.

如何判断提取质粒DNA的纯度

可以通过紫外吸收检测。因为核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值,估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.

原子吸收分光光度法背景吸收干扰及消除

  原子化器中非原子吸收的光谱干扰。   ①分子吸收(火焰中难熔盐分子和气体分子)   ②固体或液体微粒对光的散射和折射作用  有关因素:l、基体元素的浓度、火焰条件、原子化方法(石墨炉法大于火焰法)等  减小方法: ①氘灯自动扣背景校正装置(190~350 nm)   两个光源——空心阴极灯和 D

电泳法和紫外分光光度法检测DNA,哪种方法更好

两种方法各有优劣。电泳法更直观,如果你有DNAMaker,并且知道Maker的浓度,就可以使用一维条带分析软件如QuantityOne分析样品中DNA的含量,而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性。但是,由于电泳中染色特异性很强,对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测。紫外法可对样品

红外分光光度法与紫外荧光法检测水中石油浓度

水环境中石油类主要来自工业废水和生活污 水的污染。工业废水中石油类(各种烃类的混合物)污染物主要来自原油的开采、加工、运输以及各种炼制油的使用等行业。石油类碳氢化合物漂浮于水体表面,将影响空气与水体界面氧的交换;分散于水中以及吸附于悬浮微粒上或以乳化状态存在于水中的油,它们被微生物氧化分解,将消耗水

nanodrop-one*微量光度计技术特点

  Nanodrop是实验室中常见的分光光度计。与传统需要比色皿的分光光度计相比,Nanodrop所需样品的体积大大减少,只需要2 μL,同时也大大降低了实验准备以及清洗的时间。这些优势使得科研人员能够在一分钟内检测多个样品。当然如果你有更多的样品,还嫌效率不够高,你可以选择应用Nanodrop 8

原子吸收分光光度法干扰及消除

  一. 光谱干扰    1. 在测定波长附近有单色器不能分离的待测元素的邻近线 ——减小狭缝宽度    2. 灯内有单色器不能分离的非待测元素的辐射 ——高纯元素灯    3. 待测元素分析线可能与共存元素吸收线十分接近——另选分析线或化学分离   二. 电离干扰   待测元素在高温原子

核酸、蛋白质等微量紫外吸光度测量的应用方案

引言核酸(DNA、RNA)、蛋白质等生物样品的微量紫外吸光度及浓度的检测,有助于基因测序、基因筛查、分子育种和动物克隆等生命科学的研究。多家生命科学领域的实验设备供应商已将海洋光学的微型光纤光谱仪应用在了其微量或者超微量紫外分光光度计设备中,并实现了全波段200-850nm,或

超微量紫外/荧光全功能分光光度计在RNA质控的应用

小编心里话:RNA质控是个技术活儿! 对于每天泡在实验室的人来说,qPCR已是家常便饭。毫无疑问浓度高,纯度好,片段完整,才是我们理想中的RNA样品。然而,RNA总是娇气的存在!室温或4度极易降解,提取的时候容易有污染物残留。因此完整的RNA质控包含了三个方面:浓度质控,纯度质控,片段完整性质控。 

紫外分光光度法测量聚合物的浓度

可以用紫外分光光度法测量聚合物的浓度,但一般需要加显色剂,可以用一些有色的有机指示剂,起到吸光作用,原理是朗伯比尔定律。具体用何种显色剂还要结合待测物质的结构和性质

cDNA的合成实验原理和操作步骤

一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子

紫外可见分光光度法和原子吸收分光光度法的关系

相同点: 二者都为吸收光谱,吸收有选择性,主要测量溶液,定量公式:A=kc,仪器结构具有相似性.不同点:原子吸收光谱法      紫外――可见分光光度法(1) 原子吸收        分子吸收(2) 线性光源        连续光源(3) 吸收线窄,光栅作色散元件   吸收带宽,光栅或棱镜作色散元件