蛋白酶的活力测定方法介绍
蛋白酶的种类繁多,不同的蛋白酶的性质和催化反应条件各不相同,无法规定一个统一的测定方法,使用最多的有福林—酚法、紫外分光光度法、甲醛滴定法、DHT-酪蛋白法。1福林酚法蛋白酶催化蛋白质水解成氨基酸,其中含酚基的氨基酸(色氨酸、酪氨酸)与福林试剂反应,生成蓝色复合物,蓝色深浅与含酚基氨基酸的多少成正比,以此来测定酶的活力。2 甲醛滴定法蛋白酶催化蛋白质水解成氨cc基酸,再用甲醛固定氨基酸的氨基,用0.1mol/LNaOH溶液滴定生成的氨基酸,从而测定其酶活。3 DHT-酪蛋白法用5-氨基四唑重氮盐将酪氨酸中部分组氨酸和酪氨酸重氮化,得到黄色的重氮5-氨基四唑酪蛋白(DHT-酪蛋白)。以DHT-酪蛋白为底物,在蛋白酶作用下,水解生成DHT-肽,二价离子可与DHT-蛋白与DHT-肽形成稳定的可溶性红色螯合物,而锌离子可迅速沉淀DHT-酪蛋白,但不沉淀DHT-肽。选用合适浓度的锌离子和镍离子作为沉淀剂和显色剂,利用比色法可测定蛋白酶活力......阅读全文
胃蛋白酶的含量测定方法
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定盐酸溶液取1mol/L盐酸溶液65ml,加水至100ml供试品溶液取本品适量,精密称定,加盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2~0.4单位的溶液。对照品溶液取酪氨酸对照品适量,精密称定,加盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液。测定
胰蛋白酶的含量测定方法
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定底物溶液制成后应在2小时内使用。取N-苯甲酰L精氨酸乙酯盐酸盐85.7mg,加水溶解使成100ml,作为底物原液;取10ml,用磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液13ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液87ml混合,pH值为7.6)稀释成
菠萝蛋白酶的含量测定方法
精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管(15mm×130mm)中，于(37±0.5)℃水浴预热5分钟，精密加入(37±0.5)℃预热的底物溶液(取硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白0.6g，精密称定，置烧杯中，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80ml，水浴中加热溶解，放冷，用1mol/L盐酸调节pH
原生质体的收集、纯化与活力测定介绍
经酶解处理后，得到的混合物是一个由原生质体、细胞团与细胞碎片等组成的混合液，只有将杂质和酶液去掉，使原生质体纯化，才能进行培养。（1）收集：原生质体混合液用滤网（40-100 µm）去掉没有降解的细胞及组织，收集滤液。（2）洗涤：将网下物低速离心，去掉上清液,再加无酶液的CPW液悬起原生质体，再离心
细胞计数及活力的测定
一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用
酶的纯化与活力测定
在酶学和酶工程的生产和研究中，经常需要进行酶活力的测定，以确定酶量的多少以及变化情况。酶活力测定是在一定条件下测定酶所催化的反应速度。在外界条件相同的情况下，反应速度越大，意味着酶的活力越高。1 酶活力测定的方法酶活力测定的方法很多，如化学测定法、光学测定法、气体测定法等。酶活力测定均包括两个阶段：
根系活力的测定[TTC法]
植物 根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。 一、 原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙
酶的纯化与活力测定
酶的纯化与活力测定在酶学和酶工程的生产和研究中，经常需要进行酶活力的测定，以确定酶量的多少以及变化情况。酶活力测定是在一定条件下测定酶所催化的反应速度。在外界条件相同的情况下，反应速度越大，意味着酶的活力越高。1 酶活力测定的方法酶活力测定的方法很多，如化学测定法、光学测定法、气体测定法等。酶活力测
淀粉酶的活力测定
原理淀粉被淀粉水解，切断淀粉链的α-1，4糖苷键，对碘呈蓝紫色的反应消失，这种呈色消逝的速度可以表示水解的程度，因而能衡量酶的活力。操作方法1、取试管1支，加20毫升2%淀粉，混匀，在30℃水浴中，使管内温度达到30℃。2、将淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中，混匀，在30℃水浴中保温，自加入记时
原生质体的活力测定
检验原生质体是活细胞还是死细胞染色法：①二乙酸荧光素（FDA）法：FDA本来没有荧光，当其进入细胞后被脂酶分解为具有荧光的极性物，不能透过质膜，而是留在细胞内发出荧光。因此能发出荧光的是具有活性的原生质体。②酚藏花红染料法:具有活性的原生质体均不着色，而死去的原生质体立即染成红色。③伊文思蓝染色法：
酶活力测定的影响因素
影响酶活性的因素包括底物的浓度、酶浓度、酶反应的最适pH、最适温度、酶的激活剂、抑制作用，另外还包括试剂中表面活性剂的作用等因素。1.反应速度：大多数酶促反应是可逆反应，其速度既受底物浓度的影响，也受产物生成量的影响。酶反应动力学中所指速度是反应的初速度。当底物浓度较高时，在反应的初期，其浓度变化甚
植物组织中脂肪氧化酶活力的测定方法
脂肪氧化酶(LOX)是一种含非血红素铁的蛋白质，专一催化具有顺、顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸加氧反应，氧化生成具有共轭双键的过氧化氢物。它广泛存在于高等植物 体内，与植物的生长发育、植物的衰老、脂质过氧化作用和光合作用、伤反应及其他胁迫反应等有关。 【原理】 根据基质浓度一
角蛋白酶的活性测定方法
活性测定方法角蛋白不溶于水及大部分有机溶剂，使得角蛋白酶活性测定比一般蛋白酶困难。常用测定角蛋白酶的原理是以底物水解后释放的氨基酸的量来确定角蛋白酶的活性。目前测定角蛋白酶的方法主要有三种。一种是直接用角蛋白粉作为底物进行测定，涂国全等（1998）曾以羽毛粉作为测定角蛋白酶的底物。第二种是使用经过修
细胞计数及活力测定
一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。计算细胞数目可用血球计数盘或是 Coulter counter 粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个 chambers，每个 chamber 中细刻
细胞计数及活力测定
一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用
细胞计数及活力测定
实验方法原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有
琥珀酸脱氢酶活力测定方法简介
1、硫酸甲酯吩嗪（PMS）反应法 琥珀酸脱氢酶能通过一系列人工电子受体，如与PMS（吩嗪二甲酯硫酸盐），DCPIP（2，6-二氯酚靛酚）等发生反应催化琥珀酸的氧化，而借助这些中间产物的颜色变化，通过分光光度计检测即可加以定量反映，其反应式为：①Succinate+PMS→Fumarate+PM
细胞活力的鉴定方法
染色排除法（最常用） 台盼蓝法：死细胞染成蓝色，活细胞不着色 苯胺黑法：死细胞染成黑色，活细胞不着色 伊红Y法： 荧光排除法： 生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光；生活力弱的细胞发出荧光也较弱；死亡细胞无荧光。 细胞内酶与特定试剂的显色反应： MTT比色实验：琥珀酸脱氢酶可使MT
关于菠萝蛋白酶的含量测定介绍
菠萝蛋白酶的含量测定：精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管(15mm×130mm)中，于(37±0.5)℃水浴预热5分钟，精密加入(37±0.5)℃预热的底物溶液(取硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白0.6g，精密称定，置烧杯中，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80ml，水浴中加热溶解，放冷，
细胞活力检测方法
细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标，如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种，如台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、、ATP含量测定法、荧光染色法、比色法（MTT法）等。 一、ATP含量测定法---生物发光检测 有
细胞活力检测方法
细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标，如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种，如台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、、ATP含量测定法、荧光染色法、比色法（MTT法）等。一、ATP含量测定法---生物发光检测有研究表明内源性三磷酸腺苷 (AT
药用植物种子生活力的测定方法
种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。药用植物种子寿命长短各异，很多种子休眠期较长，为了在短期内了解种子的品质，一般采用生物化学的方法测定种子的牛活力，以确定种子是否能用并估算播种量。测定种子生活力的方法常见的有红四氮唑染色法、靛红染色法、剥胚法、荧光法等。日前应用较为广泛的是红四氮唑
酶活力测定的注意事项
（1）酶促反应过程中，要用初速度表示酶促反应速度。（2）要规定时间、温度、pH等反应条件，并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定。（3）配制的底物浓度应准确且足够大，底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中，以防止底物被分解。（4）标本要新鲜，应保存于冰箱中。用血浆时，应考虑到抗凝剂对酶反
TTC法根系活力的测定实验
实验方法原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质。溶于水中为无色溶液，但还原后通过下列反应，生成红色而不溶于水的三苯基甲臢。反应式如下： 生成的甲臜呈稳定的红色，不会被空气中的氧自动氧化。所以TTC被广泛地用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延
TTC法根系活力的测定实验
实验方法原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质。溶于水中为无色溶液，但还原后通过下列反应，生成红色而不溶于水的三苯基甲臢。反应式如下： 生成的甲臜呈稳定的红色，不会被空气中的氧自动氧化。所以TTC被广泛地用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延
植物根系活力的测定（TTC法）
实验概要植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲瓒，生
TTC法根系活力的测定实验
实验方法原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质。溶于水中为无色溶液，但还原后通过下列反应，生成红色而不溶于水的三苯基甲臢。反应式如下： 生成的甲臜呈稳定的红色，不会被空气中的氧自动氧化。所以TTC被广泛地用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、
胃蛋白酶片的效价测定方法
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。供试品溶液取本品5片,置研钵中,加盐酸溶液适量研磨均匀,全量转移至250m量瓶中,用盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取适量,用盐酸溶液定量稀释制成每1ml中约含0.2~0.4单位的溶液。盐酸溶液、对照品溶液与测定法见胃蛋白酶效价测定项下
木瓜蛋白酶的酶活测定方法
25℃恒温条件下，取25mL烧杯装在pH自动滴定仪上，加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化钠溶液2.50mL、重蒸馏水1.25mL，混合后加入待测酶液后立即计时，用0.1mol/L氢氧化钠在电磁搅拌下连续滴定以保持pH6.2，记下每分钟所耗0.01mol/L氢氧化钠毫升数。同时进行空白校正。
琥珀酸脱氢酶活力测定方法MTT法
MTT法MTT是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazana)，经异丙醇作用颗粒溶解显色。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度570nm处OD值推测出活细胞的数目。