PCR仪关于引物的问题及解决办法？
1. 应该选择哪种纯化方法? 取决于实验目的和引物的长度 2. 为什么我订购了50nmol,但是收到却只有40nmol? 50nmol是起始量 3. 怎样制备100μM的储液? 体积(μl)=质检报告上的nmol数目×10 4. 怎样设计引物? *一般长度20-30bp； *至少50%的GC含量； *避免引物二聚体和二级结构； *引物对的Tm值应该接近。 5. 引物序列有插入或缺失? *使用上游和下游引物多测几个克隆。 *请选择正确的纯化方法。 6. PCR无结果? *请检查引物设计是否正确； *请检测OD读数是否正确； *做一个阳性对照和一个阴性对照......阅读全文
PCR仪关于引物的问题及解决办法？
1. 应该选择哪种纯化方法? 取决于实验目的和引物的长度 2. 为什么我订购了50nmol,但是收到却只有40nmol? 50nmol是起始量 3. 怎样制备100μM的储液? 体积(μl)=质检报告上的nmol数目×10 4. 怎样设计引物? *一般长度20-30bp； *至少
引物TM值和PCR程序问题
tm值和引物中的GC含量有关 只要相差不是太大就行 设定时取平均值就可以；你可以根据引物的长度和GC的百分比来确定一下哪个更准确。不知道你用的那个公司的机器，一般是的在退火温度后面的空格里，输入你每个循环升或降的温度，后面还有加减号代表升或降。
PCR扩增失败是引物的问题吗？
基本不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出，扩增效率低的问题。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。有些重复片段的扩增, GC含量高的片段，非要采用特殊扩增手段才能扩增出了。
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或
PCR仪引物设计原则
引物长度要满足特异性需要,一般可在18~25个碱基之间；扩增长片段时最好在24~30个碱基之间； · 当引入克隆位点时,引物末端应额外增加3个以上碱基； · (G+C)%含量应尽量控制在40~60%,两条引物的(G+C)%含量应尽量接近； · 引物中GC碱基分布均匀； · 尽量避免相同碱
解决荧光定量PCR引物探针问题
荧光实时定量 PCR 技术 (real-time quantitative PCR，qPCR) 几乎是现代分子生物学技术中最重要、应用最广泛的核酸定量检测技术。成功的定量 PCR 实验离不开精准的实验设计和操作流程。 实时荧光定量 PCR 分析的部分实施需要经过优化以确保所有反应参数均设置精确
PCR的引物
特异性的引物决定了所扩增的DNA片段，引物（primer）本质上是人工合成的小片段寡聚核苷酸片段，一般不超过50个碱基（通常18－25个），它们与所要扩增的DNA片段的正链与负链的末端完全互补。在“退火”时引物结合于DNA模板的起始和终止点，DNA聚合酶结合到这两个位置，开始合成新的DNA链。
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detail
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detail
PCR引物设计及评价实验
实验方法原理聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法，故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多，最广泛的手段之一，而引物设计是PCR技术中至关重要的一环，使用不合适的PCR引物容易导致实
PCR引物设计及评价实验
实验方法原理 聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法，故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多，最广泛的手段之一，而引
定量PCR仪引物长度设定
① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
定量PCR仪引物长度设定
① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
关于逆转录PCR引物的选择
对靶序列中潜在的引物位点进行分析， 这些位点应该不会形成同源多聚体结构，也没有明显的形成二级结构的趋势，不会自身互补，与基因组中的其他序列无显著的同源性。 （1）依据寡核苷酸引物与其靶序列形成杂合分子的熔解度的计算中提供的公式计算各引物的熔解温度。 （2）选择一对匹配完好的正向和反向引物。两
引物合成及各种问题总结
1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的
PCR引物设计及软件使用技巧
PCR引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Prem
PCR引物设计及评价实验（一）
实验方法原理聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法，故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多，最广泛的手段之一，而引物设计是PCR技术中至关重要的一环，使用不合适的PCR引物容
PCR引物设计及评价实验（二）
5. 按照搜寻结果显示，在主窗口中检查该引物对的二级结构情况，逐条分析，依次筛选。下面进行序列筛选：点击其中一对引物，如第21#引物，在“Peimer Premier”主窗口，如图所示：该图分三部分，最上面是图示PCR模板及产物位置，中间是所选的上下游引物的一些性质，最下面是四种重
pcr扩出目的片段及引物二聚体，哪出了问题
只要目的片段位置正确 无需去管引物及其二聚体的，结果可靠。究竟是不是引物二聚体 你从理论上就可以分析判断。一般常见情况是引物加过量了，在溴酚蓝位置常见亮带，在这中情况下，你不需要理他，若需要漂亮图片（发论文），2办法：可以减少引物加入量，同时稍微降低镁离子浓度；或者在保证底物不缺乏情况下，增加几个循
旋转蒸发仪常见问题及解决办法
旋转蒸发仪是我们实验室最常用的设备，那么使用过程中出现问题如何解决呢，看到以下几段话，想必大家都能快速了解是哪方便面出现故障以及如何解决它们！一.电机飞车（只有最高速）故障现象1.检查测速发电机线圈是否断路，用万用表量七芯插头“1、2”脚（插头对正槽两边）正常电阻400Ω左右。2.发电机线圈与外壳短
旋转蒸发仪常见问题及解决办法
旋转蒸发仪是我们实验室zui常用的设备，那么使用过程中出现问题如何解决呢，看到以下几段话，想必大家都能快速了解是哪方便面出现故障以及如何解决它们！一.电机飞车（只有zui高速）故障现象1.检查测速发电机线圈是否断路，用万用表量七芯插头“1、2”脚（插头对正槽两边）正常电阻400Ω左右。2.发电机线圈
PCR仪常见问题及回答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系＊
PCR仪常见问题及解答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PCR仪常见问题及回答
PCR仪常见问题及回答1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是R
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别
一、方法不同1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度二、原理不同1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的核
引物合成及各种问题总结（2）
1.如何测定引物的OD值？ 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所
液相色谱仪的常见问题及解决办法
液相色谱仪作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中zui常见的就是柱压问题、漂移问题和峰型异常问题。本文主要说明柱压问题。一、柱压问题柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压