测定酶活性浓度测试——固定时间法
固定时间法(取样法、终点法、两点法) 先让酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间,然后停止酶反应,加入试剂进入化学反应呈色测出底物和产物的变化。 用这类方法测酶活性浓度,必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要很精确,否则将引起较大误差。 该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或产物的变化。......阅读全文
豆粕中尿素酶活性的测定_尿素酶解法
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30min后,尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨,再用氢氧化标准溶液回滴。实验材料大豆试剂、试剂盒尿素缓冲溶液盐酸氢氧化钠蒸馏水仪器、耗材样品筛酸度计恒温水浴锅试管精密计时器粉碎机分析天平移液管一、实验目的掌握测定尿素酶
测定酶催化活性存在的缺陷
测定酶催化活性存在的问题是关于医学检验职称的生化检验知识,医学|教育网搜集整理了相关内容与考生分享,希望给予大家帮助!测定酶的催化活性虽然是临床上最常用的方法,但由于酶的催化活性不仅决定于酶的含量,还受多种因素的影响,如所用底物的性质及浓度、反应介质PH、温度、离子强度、激活或抑制因子等,因此具有方
谷胱甘肽S转移酶活性测定
比色法 实验材料 肝微粒体蛋白 试剂、试剂盒 二硝基氯苯 乙醇
钠,钾三磷酸腺苷酶活性测定
ATP酶,又称为三磷酸腺苷酶,是一类能将三磷酸腺苷(ATP)催化水解为二磷酸腺苷(ADP)和磷酸根离子的酶,这是一个释放能量的反应。在大多数情况下,能量可以通过传递而被用于驱动另一个需要能量的化学反应。这一过程被所有已知的生命形式广泛利用。部分ATP酶是内在膜蛋白(Integral membra
酶活性测定样品的贮存及处理
测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低,无论所用的仪器如何先进,也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活,因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性,最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点: 1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性,如E
谷胱甘肽S转移酶活性测定
谷胱甘肽S-转移酶是指催化具有亲电取代基的外源性化合物与内源的还原谷胱甘肽(GSH)反应的酶。 可催化多种反应包括烃基、芳基、芳烃基、烯基和氧基的转移反应。 谷胱甘肽S-转移酶是谷胱甘肽结合反应的关键酶,催化谷胱甘肽结合反应的起始步骤,主要存在于胞液中。谷胱甘肽S-转移酶有多种形式,根据作用底物 不
钠,钾三磷酸腺苷酶活性测定
ATP酶,又称为三磷酸腺苷酶,是一类能将三磷酸腺苷(ATP)催化水解为二磷酸腺苷(ADP)和磷酸根离子的酶,这是一个释放能量的反应。在大多数情况下,能量可以通过传递而被用于驱动另一个需要能量的化学反应。这一过程被所有已知的生命形式广泛利用。部分ATP酶是内在膜蛋白(Integral membrane
胆碱酯酶活性的测定方法
.胆碱酯酶(ChE或CHE) 正常范围:比色法:130~310U/L; 酶法:儿童和成人男性、女性(40岁以上)5410~32000U/L;女性(16~39岁)4300~ 11500U/L。 2.检查介绍:胆碱酯酶有两类,它们都能水解乙酸胆碱。一类是乙酰胆碱酯酶。另一类是羟基胆碱酯 酶。3.临床意义
硝酸还原酶活性的测定实验
实验方法原理硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键酶,与作物吸收和利用硝态氮的能力相关。它催化NO3-还原为NO2-的反应:NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O反应产生的NO2-可从组织内渗透到外界溶液中,定时测定一定的反应溶液中NO2-含量的变化情况则可了解此酶的活性大小。NO2-的
概述脂肪酶的活性测定内容
1、粗酶液的制备 用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、实验设计 本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定
脂肪酶的活性测定方法介绍
方法:⒈粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。⒉实验设计本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最
硝酸还原酶活性的测定实验
实验方法原理:硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键酶,与作物吸收和利用硝态氮的能力相关。它催化NO3-还原为NO2-的反应:NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O反应产生的NO2-可从组织内渗透到外界溶液中,定时测定一定的反应溶液中NO2-含量的变化情况则可了解此酶的活性大小。NO2-
血浆抗凝血酶Ⅲ活性测定
原理:发色底物法:受检血浆中加入过量凝血酶,使AT-Ⅲ与凝血酶形成1:1复合物,剩余的凝血酶作用于发色底物S-2238,释出显色基因对硝基苯胺(PNA),显色的深浅与剩余凝血酶呈正相关,而与AT-Ⅲ呈负相关。根据标准曲线计算出AT:A的含量。 血浆抗凝血酶Ⅲ抗原(AT:Ag)检测 1.原理:
关于溶酶体酶活性的测定方法介绍
溶酶体贮积症的诊断是通过酶活性测定或测代谢产物进行的。过去测酶活性的方法与步骤比较复杂,底物用量较大。1980年后荷兰 Erasmus大学遗传代谢病试验室应用微量酶活性测定法获得成功。它使用了新的人工合成底物,提高了实验的灵敏度及准确性, 简化了实验步骤。1990年中国医学科学院基础医学研究所医
吲哚乙酸氧化酶活性的测定
原理 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 仪器药品 721型分光光度
谷胱甘肽S转移酶活性测定
谷胱甘肽S-转移酶是指催化具有亲电取代基的外源性化合物与内源的还原谷胱甘肽(GSH)反应的酶。 可催化多种反应包括烃基、芳基、芳烃基、烯基和氧基的转移反应。谷胱甘肽S-转移酶是谷胱甘肽结合反应的关键酶,催化谷胱甘肽结合反应的起始步骤,主要存在于胞液中。谷胱甘肽S-转移酶有多种形式,根据作用底物 不同
酶活性和质量测定方法及其评价
1.酶活性测定方法 (1)按反应时间分类法:20世纪50年代以前大都使用固定时间法。这种方法是以酶催化反应的平均速度来计算酶的活性,现多已不用。20世纪50年代中期开始采用连续监测法。这种方法在自动生化分析仪上完成,可以测酶反应的初速度,其结果比固定时间法准确,在高浓度标本尤为明显,但本法也受
酶的提取、分离、纯化及其活性测定
原理 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质,植物体内的生化反应,一般都是在酶的作用下进行的,没有酶的催化反应,植物的生命也就停止了,因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。 为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来,加以分离、纯化,不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也
固定化α淀粉酶及活性测定
一、实验目的和原理目的:学会交联法制备固定化酶的操作技术内容:制备固定化酶的方法很多,利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间,酶分子与惰性蛋白间,或酶分子与载体间进行交联反应,以共价键制备固定化酶的方法称为交联法,本实验即采用这种方法。交联剂为戊二醛,载体为甲壳素。 二、实验器材 1.恒
尿海藻糖酶的酶活性的测定
1. 原理利用海藻糖酶水解一分子海藻糖生成两分子葡萄糖,然后测定生成的葡萄糖浓度作为海藻糖酶的活性浓度。2. 步骤将尿液标本0.5mL通过5mmol/LpH为6.2的磷酸盐缓冲液平衡的SephadexG-25柱,以除去内源性葡萄糖。收集含蛋白的部分,将体积调整到1.5ml。将洗脱下来的标本0.9mI
酶活性和质量测定方法及其评价
酶测定包括酶量测定和酶活性测定。酶在体液中含量极微,因此临床上大都采用酶活性测定,以酶活性间接表示酶量。酶活性的概念:酶活性指酶催化反应的能力即酶促反应速度。反应速度是指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。1.酶活性测定方法(1)按反应时间分类法1)定时法:(两点法) 通过测定酶反应开
酶活性测定的常见方法总结
(1)定时法:(两点法)通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间,通过加入强酸、强碱、蛋白医学教育网整理沉淀剂等,使反应完全停止(也叫中止反应法)。加入试剂进入化学反应呈色测出
酶活性测定样品的贮存及处理
1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸盐抑制LDH,肝素对CK及某些其他酶有轻微的抑制作用,故一般样品以血清为佳 2.多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。 3.光照对CK活性有
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多,常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定, 方法简单、反应快速、反应活性大,所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多
酶活性测定条件的选择和限定
仅在一定条件下酶反应速度v才和酶量成正比例。一定条件是什么?这些条件之间有无主次关系?如何选择合适的测定条件?这些都是实验室工作者在设计或选择测酶活性浓度方法时必须面对的问题。 首先可从理论上探讨在什么特定情况下的反应速度才可能与酶量成正比例。酶的整个反应过程可简化如下: 式中Kp可看成为ES的
酶活性测定样品的贮存与处理
如果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低,无论所用的仪器如何先进,也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活,因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性,最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点: 1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活
硝酸还原酶活性的测定实验
实验方法原理 硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键酶,与作物吸收和利用硝态氮的能力相关。它催化NO3-还原为NO2-的反应:NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O反应产生的NO2-可从组织内渗透到外界溶液中,定时测定一定的反应溶液中NO2-含量的变化情况则可了解此酶的活性大小。NO2-
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多,常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定, 方法简单、反应快速、反应活性大,所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多,
土壤纤维素酶活性测定
一、原理 纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下,它的初水解产物是纤维二糖,在纤二糖酶作用下,纤维二糖分解成葡萄糖。所以,纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还
溶血、黄疸对酶活性测定的影响实验
实验方法原理L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+实验材料黄疸血清试剂、试剂盒ALT/GPT试剂仪器、耗材半自动生化分析仪试管加样器实验步骤1、稀释试剂.2、开机预温达37度.3、选取测定程序.4、测试:5、结果分析: