实验室分析仪器液相色谱仪常见问题HPLC柱压过高
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因:①拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查。②把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查。③将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下降,再检查。只用于使用过的柱子。④更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十三
填料方法的前三种都是湿法吗,能不能对四种填充方法做一个简短的说明?资料显示:在正常条件下,填料粒度>20µm 时,干法填充制备柱较为合适;颗粒
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十九
C18 柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph 在 2 左右。答:pH2 左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失,包括 C18 和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐,如果不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,也不必过份
实验室分析仪器液相色谱仪常见问题分析色谱柱维护
①建议检测前样品和流动相进行过滤。②建议每天做完样品后及时进行清洗。③常规检测测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。④使用缓冲盐条件:a等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。b梯度条件:使用缓冲盐之前与初始流
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十六
CN 柱的保存需要在低温条件,但是又不能太低,使固定相冻结,怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?答:所谓低温储存,就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水,冰点都比较低,纯甲醇的冰点是零下 90 度以下了。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十八
色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?还有所谓的死体积怎么测定呢?答:色谱柱安装技巧不多,只要接头和柱头匹配,确实拧紧不漏就可以了,但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积,一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十一
做多肽药物时遇到下列问题:1)基线不稳定波动大,流动相 A :1%TFA 水溶液 B:1%TFA 乙腈溶液检测波长 210nm 流速 1.0ml/ml 什么原因?怎么解决?TFA 有什么作用?流动相中不加 TFA 见不到主峰,基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗 C18 比较好;3)药典上
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了,请问一般达到多高,用甲醇和乙腈是不是不一样?答:柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素,分离度才是最重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步,例如超过 300bar,就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高,同样状况的柱子,如果用甲醇做流动相,柱压可能超了,换用乙腈会
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
新出厂液相色谱柱,保护溶剂一般是什么?怎样进行平衡清洗比较好,一般要平衡多长时间比较好?答:柱子类型不同,保存溶剂也会不一样吧,具体要看说明书的说明。对于反相柱,一般用甲醇(乙腈)保存,也有用 80% 左右甲醇浓度的甲醇 / 水保存的。一般用流动相平衡冲洗 10-20 个柱体积即可(注意:柱体积不等
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十三
同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?答:长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十八
在梯度洗脱的时候,如果整个时间程序越长,保留时间的重现性越差,尤其是后出的峰重现性差更明显,我猜估计是流量本身的误差引起的,但是怎么尽量避免这种情况的出现,使保留时间重现性更好?答:这个要控制好环境温度和柱温,易挥发的流动相要适当密封,同时保留时间的漂移与仪器的精度也有关系。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十二
色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等,这些技术在应用时都体现在哪里?答:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十五
对于一根常用的 c18 柱,拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?答:新柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十五
“水相” 指的是什么?纯水?CN 基柱保存在 40% 的乙腈里面,这个有不良后果吗?答:水相就是纯水。CN 基不适合保存在中等极性的溶剂中,除了可以低温保存在极性较大的纯水中外,还有可以保存在非极性溶剂如正己烷中。40% 乙腈水,属于中等极性溶剂,短期过夜保存可能问题不大,长期保存不太好,后果就是可
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十三
色谱柱的接头,出口处用的是 peek 接头,请问都用 peek 接头不行么,为什么?答:都用 PEEK 接头我认为都可以的,当然 PEEK 接头的质量要过关。有人认为 PEEK 接头不耐压,估计是针对品质不好的产品说的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十四
CN 基柱应该怎样维护才好呢?比如做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等等。答:CN 可作正相柱,也可作反相柱用,除了保存溶剂有特殊要求外,其它维护办法和一般正相和反相柱没有多大区别。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十二
为了节约成本我们自己填保护柱,用废的同型号柱子填。但填完以后做标样定量分析有所改变。请问其原因。答:不建议自己填保护柱柱芯,填得不好的柱芯会影响分离效果,也会影响定量分析结果。你不知道废柱子里的填料是不是受了污染,另外你填的柱芯肯定没有厂商填得好,如果影响到峰形,峰面积积分结果有所改变是可能的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十六
用乙腈和水作为流动相, 在调整梯度的时候发现, 刚开始用 60% 乙腈, RT 为 2.5 分钟,调到 40% 乙腈,RT 没有变化,30% 也没有变化, 一直调到 20% 的时候,RT 突然变到了约 13 分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交柱。答:离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十九
磷酸盐缓冲盐渗透力强,为什么,是因为与醋酸盐,枸椽酸盐相比,基团小吗,使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比,会使色谱柱寿命缩短多少?答:经常用磷酸盐,在其它条件差不多一样的情况下,柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧,否则不可能现在大部分人还在用。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十五
HPLC 柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生,适用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优缺点?答:色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十八
反相离子对色谱法中,离子对是如何起作用的,是离子对试剂的非极性端溶解在填料的非极性端里,解离端伸向流动相,对含胺化合起离子交换作用,还是样品与离子对生成紧密的结合物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团,还是这种结合物是在解离与结合的动态平衡之中? 答:首先离子对试剂的解离端和目标离子形成离子缔合物,降
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十二
新的 C18 柱,在进样之前我用 100% 的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的?不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢?答:不是所有的测定,都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方法程序进样几针,观察到峰面积保留时间不再有明显变化,再开始正式测定,这是一
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十五
“样品与离子对生成紧密的结合物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团” 这句话是什么意思?离子对怎么样掩蔽化合物中极性基团?不就是通过静电引力的作用形成离子缔合物,来降低其极性的吗?答:离子对色谱是解决强极性物质在反相色谱中保留能力不足的一个有效的途径。有些碱性极性物质,即使用 100% 水相做流动相,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十五
多个样品不好不离的时候,请问该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度?答:提高分离度可从三个主要影响因素来考虑,柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效;选择性和固定相选择以及 pH 条件有关,通过选择合适的色谱柱和合适的 pH,可以提高选择性;有时候适当延长出峰时间增加保留因子,也
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十四
测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的 TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子?答:分子量不高的多肽一般选用常规 C18 柱就能测定,也有用离子交换柱、水性 C18 柱和 Hilic 亲水作用柱的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十九
如果液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题?波长越小的越大,270nm 的还不怎么能看出来,230nm 的就非常厉害了,有可能是什么原因造成的?答:有可能是你的流动相的问题,230 可能已经快到你流动相的截止波长了,当然紫外吸收强,基线漂移厉害。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十一
色谱柱技术的技术要点在哪里?答:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验积累。国内和国外想比
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十三
氨基柱在进酸性样品时,很伤柱子,如使用一段时间后,柱效降低,峰形改变,如何恢复?答:氨基柱测酸性样品,应该是用氨基柱的 HILIC 模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议:用 5-10 倍的柱体积的含 0.5-1
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十三
采用国标用 C18 柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对 C18 柱是否有影响?答:乳化剂和离子对试剂类似,有极性端和非极性端,肯定会对 C18 柱有影响。不过如果辣椒精是极性物质,乳化剂的存在到可以提高其在 C18 柱上的保留能力。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十七
做农药残留分析的,用的是 UV2487 检测器,想问一下,C18 色谱柱用什么缓冲液比较好,我以前做三聚氰胺是用柠檬酸,辛烷磺酸钠,也用农药检测行不行?还有用 HLB 柱能不能去除蔬菜和水果中的杂质?答:C18 色谱柱用用磷酸盐,醋酸盐就比较好啊,离子对试剂不是个好东东,你要慎用。我们做三聚氰胺用三
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十一
通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂,无法考察组分的 PKa 值,哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢?答:如果天然产物中没有易电离的极性基团,就不需要用缓冲盐调节 pH。如果天然产物中既有酸性基团,也有碱性基团,譬如有 pKa=6.2 的羧基和 pKa=9.0 的氨基的两性物质