GSTpulldownassay的基本原理
基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液与之孵育,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。 GST：谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase)......阅读全文
GST－pulldown－assay的基本原理
基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液与之孵育,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析
GST－pulldown－assay实验操作流程
实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，
GST－Activity－Fluorometric－Assay
实验概要The experiment provides a simple, fluorescence-based in vitro assay for detecting the GST activity using a fluorescence plate reader. The assay
为什么要做gstpulldown实验
因为此方法简单易行,操作方便。GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的
免疫共沉淀和GST－pull－down技术各有何优势
免疫共沉淀的话蛋白质是处于天然状态，可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。GST pull-down是将GST融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上，与溶液中的目的蛋白结合。可以用来确定融合（或探针）蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用。一、免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋
GST融合蛋白（GST－fusion－protein－purification）的表达与纯化
原理GST 纯化系统是利用GST （glutathione-S-transferase ）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷） 2
GST融合蛋白的准备
Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva Foxx Chase Cancer Center, Philadelphia, PA 19
Protease－assay
实验概要 In certain fruits, such as pineapples and mangoes, the flesh contains protein-digesting enzymes (proteases). These may play a part in
Polygalacturonase－assay
This enzyme is famous for being involved in the development of the GMO tomatoes (more information from the link at the foot of this page). The cells o
Pectinase－assay
Pectinases are actually a mixture of enzymes, which, along with others such as cellulase, are widely used in the fruit juice industry where they are w
DGK－Assay
Buffers:- 2X buffer10 ml 0.5 M imidazol, pH 6.60.21 g LiCl1.25 ml 1 M MgCl21.0 ml 0.1 M EGTA, pH 6.6--> Bring volume up to 50 ml with distilled water.
Chemotaxis－Assay
PurposeThe purpose of a chemotaxis assay is to determine whether your protein or small molecule of interest has chemotactic activity on a specific cel
Phosphate－Assay
1. Make standards using sodium phosphate at the following uM concentrations: 0, 2, 5, 7, 10, 20, 40, 60, and 80. Use the screw top glass tubes.2. Dry
Aspartate－Assay
实验概要The Aspartate Assay Kit provides a simple, convenient assay to measure aspartate in a variety of samples. In the assay, aspartate is converted
Bradford－Assay
The bradford dye-binding assay is a colorimetric assay for measuring total protein concentration. It involves the binding of Coomassie Brilliant blue
Protease－assay
In certain fruits, such as pineapples and mangoes, the flesh contains protein-digesting enzymes (proteases). These may play a part in helping to softe
Motility－Assay
DescriptionVarious phenotypic characteristics are requiredfor a cancer cell to successfully complete the metastaticcascade. Among these, acquisition o
Bradford－Assay
Bradford AssayThe bradford dye-binding assay is a colorimetric assay for measuring total protein concentration. It involves the binding of Coomassie B
MTT－Assay
This procedure is for cells in 96 well plates, if larger plates are used then adjust volumes accordingly.1 Make a solution of 5mg/ml MTT dissolved in
TUNEL－assay
PROTOCOL:•Deparaffinize and rehydrate slides:3 x 3´ Xylene3 x 2´ 100% ethanol1 x 2´ 95%, 80%, 70% ethanol (each)1 x 5´ 1x PBS•Microwave antigen retrie
GST标签抗体GST标签与IFIP等多种应用
近年来在原核表达体系中，谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍，它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。G
Purification－of－GST－Fused－Proteins
Day 1Set up an overnight culture in 100 ml LMM broth or 100 ml terrific broth containing 100ul 100 mg/mlAmpDay 2Add 40-50 ml o/n culture to 1 lt terri
GST蛋白纯化步骤
制备细胞裂解物：1.每100ml培养物的细胞沉淀悬于4mlPBS；2.加入溶菌酶至终浓度1mg/ml，冰上放置30min；3.用针筒将10ml 0.2%Triton X-100强行注入细胞裂解物中，剧烈震动数次混匀；4.加入DNase和RNase至终浓度5μg/ml，4℃震动温育10min；5.4℃
磁珠法RNA－pulldown－的经典操作流程
采用链霉亲和素磁珠（PuriMag G-strep 货号PMG015）进行RNA pull-down RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1. RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA1）前期准备：取出Pie
GST融合蛋白纯化的原理
GST纯化系统其实就是凝胶亲和层析系统。该纯化柱中，凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（即GST）之间酶和底物的特异性作用力，使得带GST标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合，从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。
如何选择合适的GST抗体？
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到，也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
如何选择合适的GST抗体？
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到，也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛应用
如何选择合适的GST抗体？
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到，也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
Noble－Agar－Assay
DescriptionCancer cells do not show anchorage and contact inhibition of growth. To assess the anchorage and contact independent growth of cells, noble
Migration－Assay－Protocol
Materials to be prepared beforehand:1) FBS free medium2) 10% FBS medium3) Cell migration filter insert ( Transwell®, 12mm Diameter, 12 μm Pore Size.)P