免疫组化的操作步骤

石蜡切片(paraffin－sections)免疫组化染色步骤

1、载玻片的处理：抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：（1）APES：现用现配。将洗净的玻片

免疫组化技术要点与常见问题

在免疫组化过程中，为了更好的说明问题和查找原因，最好设置阳性对照片（已知的高表达相应抗原的组织）和阴性对照组织片（不加一抗但是加二抗系统/不加任何 抗体两组），所有操作过程应完全一致。 染色弱或者没有染色（按照先后顺序，先排除一些简单的原因）:

免疫组化技术典型实验案例学习1

案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比

免疫组化方法免疫酶标方法简介

　　免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。该方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准

免疫组化Elivison二步法

1、石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。2、取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中

怎么看免疫组化结果检查单

1、CK-P(-)—不是癌。2、LCA（-）、CD3（肿瘤细胞一）、CD2（肿瘤细胞一）—不是淋巴瘤（恶性肿瘤）。3、Syn（-）、CgA（-）、CD56（-）—不是神经内分泌来源的肿瘤。4、Ki67(+)>80%—增殖指数很高，提示是恶性肿瘤。延展回答：做免疫组化的主要目的还是为了定位，以确定其与

免疫组化技术典型实验案例学习3

6、以上原因，都是针对实际中常见原因来进行分析的，前提是排除操作者的操作错误而引起阴性结果，这就需要新手还是要设置阳性对照以排除方法的问题。还有抗体稀释液的PH值过低等其它原因的干扰。总之，要想把免疫组化做好，可能每一个环节都很重要，但也存在主次之分，出现问题了，需要通过先排除主要的，再依次排除次要

免疫组化实验结果的分析和判断

⒈ 必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。

免疫组化SP（streptavidinperosidase）法步骤

SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二

免疫组化实验中DAB显色的原理

DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一，能被催化生成水不溶性的棕黄色产物，能直观地观察到，适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒，试剂盒里的选色液都是配置好直接用的，可以根据实验需要选择不同的颜色

免疫组化染色具体操作步骤

　　免疫组化染色具体操作步骤介绍 　　 （以美国ZYMED公司SP试剂盒为例） 　　 1、石蜡切片脱蜡至水。 　　 2、3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 　　 4、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）。 　　 5、 5~10%正

神经母细胞瘤的免疫组化学检查

　　显微镜下，神经母细胞瘤呈现为蓝染的小圆形细胞，菊花形排列。肿瘤细胞围绕神经毡（neuropil）呈菊花形排列，与其他的肿瘤（如视神经母细胞瘤）围绕血管呈菊花形排列有所不同。其他还有一些神经母细胞瘤所特异的免疫组化染色，用以与其他肿瘤（尤因肉瘤，淋巴瘤等）进行鉴别诊断。

免疫组化染色具体操作步骤

   免疫组化染色具体操作步骤介绍    （以美国ZYMED公司SP试剂盒为例）    1、石蜡切片脱蜡至水。    2、3%H2O2室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。    4、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）。    5、 5~10%正常山羊血

免疫组化技术的原理、分类和优点

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半

细胞爬片的免疫组化染色鉴定

实验概要本实验介绍了细胞爬片的免疫组化染色鉴定操作流程及注意事项。主要试剂PBS，0.5%Triton X-100(DPBS配)，3%H2O2，封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液)，一抗(PBS配，滴度1：200，湿盒)，二抗工作液(湿盒)，C液(湿盒)，DAB显色液，苏木素，树胶主要设备20m

免疫组化实验DAB显色时间如何把握

DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；

免疫组化方法免疫荧光方法简介

　　是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏

免疫组化方法的具体实验流程步骤

实验流程简介一、SP三步法1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2)0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：

免疫组化的实验试剂及实验步骤

一、试剂（1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。（2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。（3）0.

免疫组化技术典型实验案例学习2

7、我做了两张切片：一张用老试剂盒内还剩下一点的血清而另一张用新试剂盒内的封闭血清，其余试剂（二抗、SP）均用新试剂盒提供的，结果是前一张效果很好，而后一张能够看到特异性染色，但背景太深，拍照效果不佳。--看来封闭血清也是罪会祸首之一。结果分析显示：抗体稀释液的PH值偏低和封闭血清的失效导致了我的免

免疫组化Elivison二步法

1、石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。2、取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中

细胞爬片的免疫组化染色鉴定

实验概要本实验介绍了细胞爬片的免疫组化染色鉴定操作流程及注意事项。主要试剂PBS，0.5%Triton X-100(DPBS配)，3%H2O2，封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液)，一抗(PBS配，滴度1：200，湿盒)，二抗工作液(湿盒)，C液(湿盒)，DAB显色液，苏木素，树胶主要设备20m

免疫组化技术的原理、分类和优点

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半

免疫组化试剂盒实验操作步骤

仪器、设备：移液器、免疫组化笔、微波炉或高压锅、计时器、孵育湿盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。溶液配制：PBS溶液配制；EDTA组织抗原修复液及DAB显色液使用详见免疫组化试剂盒产品说明书操作步骤。实验温度：15-28℃ 实验步骤：1. 脱蜡水化1) 石蜡切片置于新鲜的二甲苯中，浸泡15 m

免疫组化检测技术共识【完整版】（五）

做好免疫组化染色必须注意的问题（一）

一、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的

做好免疫组化染色必须注意的问题（四）

九、选择合适的抗体至今为止，应用于临床的常用抗体有几十种，在这当中又可分为两种类型。1.浓缩型抗体根据近几年来使用的情况认为，它有许多优点，但也有许多不足之处：①可作为各种疾病检测的常备抗体。在各单位的常规活检诊断中，有常见的病例，也有罕见的病例，尤其是后者，有时很长时间才遇到一例，这就给抗体的应用

免疫组化染色方法（SP法和SABC法）

SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；6）PBS洗2～3次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者

双重免疫组化实验原理及注意事项

  双重免疫组化是科研中的较好的一种免疫组化方法，其原理就是根据阳性表达部位和阳性表达区域不同所建立的一种直观的多色定位的染色方法。其标记的对象是两种或两种以上的细胞部位。主要标记部位如下：    1.膜+浆型    2.膜+核型    3.浆+核型    切不可膜+膜，核+核，以免影响效果和颜色重

免疫组化技术的原理、分类和优点介绍

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半