免疫组化的操作步骤
1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行2.缓冲液洗 3min/2 次。3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。4. 缓冲液洗 5min/2 次。5. 滴加 Ultra V Block ， 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。(注:孵育不要超过 10 分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清，这一步可以省略。)6. 缓冲液洗 5min/2 次。7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)8. 缓冲液洗 5min/2 次。9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子)，在室温下孵育 20 分钟。10 .缓冲液洗 5min/2 次。11 .滴加 HRP Polymer(酶标二抗) ，在......阅读全文
SPA－在免疫组化中的应用——间接法
实验方法原理由于 SPA 能结合 IgG 的 Fc 段，因此就成为天然的抗 IgG，酶标记的 SPA 可代替酶标记的 IgG 抗血清，从而测定和定位组织内的 IgG 或免疫复合物。实验材料石蜡切片试剂、试剂盒H2O2TBS第一抗体SPA-HRPDAB二甲苯乙醇树胶实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水。
酶免疫组化技术的优缺点有哪些
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特
酶标记抗体免疫组化染色知识点
（一）直接法：将酶直接标记在特异性抗体上，与组织细胞内相应的抗原进行特异性反应，形成抗原-抗体-酶复合物，最后用酶底物显色。直接法的优点在于操作简便及特异性强，缺点是敏感性低，制备的抗体种类有限。 （二）间接法：将酶标记在第二抗体上，先将第一抗体（特异性抗体）与相应的组织抗原结合，形成抗原抗体
免疫组化技术在病理诊断中的应用
由于免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确等特点，且能将形态研究与功能研究有机地结合在一起，所以，这门新技术已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域。在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义更为重要。以肿瘤研究为例，在免疫组化技术出现以前，对肿瘤的诊断和分类还局限于细胞水平，而引入免疫组化技术后
SPA－在免疫组化中的应用——PAP－法
SPA 可为多种示踪物（如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白）所标记，应用较广泛的为酶标记 SPA 和金标记 SPA 技术。标记 SPA 常用的酶为 HRP，可应用于间接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替桥抗体。实验方法原理SPA 除与标记物结合后用于代替第二抗体外，其本身可作为桥抗体用于 PAP 染色
做好免疫组化染色必须注意的问题（二）
四、切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂。免疫组织化学染色前的前期准备工作，就是必须对新的载玻片进行处理，新的载玻片表面看起来很干净，有人认为不需要进行任何的处理，都能够适合使用，这是一种错误的想法。新出厂的载玻片，表面复盖着开一层油脂样的物质，如果不加以处理，对切片的附贴是极为不利的。我们的做
酶免疫组化的关键环节相关介绍
1）标本固定 固定的目的是①防止标本从玻片上脱落； ②除去妨碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果； ③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用4%多聚甲醛，但睾丸组织、眼可能要选用Bouin’s液或mDF液效果较好。 2）脱水、石蜡包埋和制片 脱水用梯度乙醇（由
免疫组化没有任何着色的解决办法
DAB是否有效，可通过DAB直接与二抗反应，若不显色，则是DAB有问题或是二抗有问题， 是否DAB失效或是二抗浓度太低，可更换DAB或提高二抗浓度。排除这两者原因，再摸索最佳条件。首先要弄明白，所谓的DAB染色是怎样来的，DAB和过氧化氢是HRP的底物，可以说有三个环节1：DAB是否在有效期，和是否
做免疫组化用奶粉封闭后要洗吗
常见有商品化的封闭液或者5%BSA直接稀释抗体，原则上来讲：脱脂奶粉的话，肯定是要洗的，可以稍微洗一下。
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？ 一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法： 1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然
免疫组化实验防脱片的处理方法
脱片是免疫组织化学中经常遇到的问题(尤其是脑组织冰冻切片)，一般来说脱片主要有以下几种原因：1. 组织固定、脱水、透明不充分2．组织切片过厚3．组织切片有折叠4．过度的热抗原修复(高压、微波、水煮)处理或抗原修复液的pH偏高5．操作过程中，冲洗方法不正确等在实际操作的过程中，除了要注意以上几点之外，
做好免疫组化染色必须注意的问题（五）
十、连接抗体的选用必须正确，否则可造成假阴性的现象。免疫组化染色方法较多，如ABC法，SP法和EV二步法等，如果使用的是SP法，或者ABC法，这时就必须要仔细地选择好连接抗体，第一抗体有单克和多克隆炎分，连接抗体则要根据选用的抗体来进行，例如：第一抗体选用的是单克隆鼠抗人**抗体，连接抗体也要选择相
免疫组化试验抗体选择及常用染色方法
一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性
免疫组化常见问题及解决方法
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗
免疫组化常见问题及其解决办法
1、 一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）
做好免疫组化染色必须注意的问题（三）
七、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶，尤其在红细胞，中性粒细胞，单核细胞嗜酸性细胞，出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制，它们将会在DAB底物的显色时，与HRP一样催化底样，使之显色，使之生
免疫组化技术与Western－blotting、ELISA的异同
1）Western blotting 蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反
酶免疫组化技术的优缺点有哪些
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特
免疫组化技术全程原理剖析以及案例解答
1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞
免疫组化实验中常用的抗体是什么？
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
免疫组化检测技术共识【完整版】（一）
免疫组化检测技术共识【完整版】
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法：1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴
双重免疫组化实验原理及注意事项
双重免疫组化是科研中的较好的一种免疫组化方法，其原理就是根据阳性表达部位和阳性表达区域不同所建立的一种直观的多色定位的染色方法。其标记的对象是两种或两种以上的细胞部位。主要标记部位如下： 1.膜+浆型 2.膜+核型 3.浆+核型 切不可膜+膜，核+核，以免影响效
免疫组化实验过程中的要点和技巧
1．固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好
免疫组化检测试剂盒试验所需时间
近日，有位免疫组化检测试剂盒试验菜鸟试验的所需时刻，因为ELISA办法不一样，故而所用的时刻也会不一样。那么一次ELISA试剂盒试验需求多长时刻呢？技术员介绍：双抗体夹心ELISA法一次试验需求4-4.5小时，竞赛ELISA法一次试验需求2-2.5小时。酶生机的测定实际上就是测定酶促反响的速率。酶生