免疫组化实验中DAB显色的原理

DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一,能被催化生成水不溶性的棕黄色产物,能直观地观察到,适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒,试剂盒里的选色液都是配置好直接用的,可以根据实验需要选择不同的颜色......阅读全文

DAB显色时间如何把握

2. �0�2DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间。 3. �0�2此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间。

DAB染色的原理,方法

DAB显色中,DAB与跟过氧化物反应生成棕色不溶于水,不溶于酒精等有机溶剂的产物,易于看到的颜色,在WB和IHC中都是常用的显色方法。

DAB显色时间如何把握?

(1)DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗; (2)DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间; (3)此外,若很短时间就出现背景很深,

免疫组化实验中DAB显色的原理

DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一,能被催化生成水不溶性的棕黄色产物,能直观地观察到,适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒,试剂盒里的选色液都是配置好直接用的,可以根据实验需要选择不同的颜色

免疫组化实验DAB显色时间如何把握

DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;

免疫组织化学(HRPDAB系统)

1. 溶液准备:PBS ( pH7.4 ) :10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl封闭缓冲液:3%BSA-PBS2. 程序:1 ) 对石蜡切片进行脱蜡和水化:3×10min 二甲苯,5min 100%乙醇,5min 95%乙醇,5min

DAB染色液的使用方法及注意事项

DAB染色液用于免疫组化染色,应用在Dako 自动染色系统上。 DAB染色液的使用方法 1.DAB显色液配制 10mM Tris-HCl (pH7.6)   9mL  +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V)  NiCl2 或CoCl2

深圳威固特DAB模块超声波清洗机

  2020-06-11作者:威固特浏览次数:80 来源:深圳市威固特超声波科技开发有限公司   一、高精度清洗   因为超声波的能量能够穿透细微的空隙和小孔,故可用于任何形状、复杂程度线路板的清洗。被清洗线路板如果比较复杂时,一些普通方法难于清洗的空隙和小孔。超声波清洗往往成为能满足其特殊技

Nature子刊:癌症蛋白Dab2怪异的“双重生活”

  生物通报道:有时候蛋白质发挥的作用比我们预期的要多得多。例如,Dab2,一直都被认为与癌症有关。这个分子与一系列的信号蛋白(称为Ras-MAPK通路)相关。在许多癌症中,Ras-MAPK的元件发生突变并开始告诉细胞失控生长。  美国Sylvester综合癌症中心的研究员、迈阿密大学米勒医学院细胞

DAB显色,碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶显色原理是什么?

DAB显色在辣根过氧化物酶的作用能形成一种灰褐色的终末产物,该产物难溶于醇和其他有机溶剂,DAB的氧化还能引起聚合作用,导致与四氧化锇反应而增加其染色强度和电子密度。

Sci-Rep:癌蛋白Dab2的双面人生,也在脂肪储存中发挥作用

  蛋白有时做的事情比我们期望中的更多。比如,Dab2长期以来与癌症存在关联。这种蛋白分子与Ras-MAPK通路中的一系列信号蛋白相关。在很多癌症中,Ras-MAPK通路中的信号蛋白发生突变,因而开始让细胞发生不受控制地生长。  美国迈阿密大学米勒医学院西尔维斯特综合癌症中心研究员Xiang-Xi

辣根过氧化物酶标记试剂的使用

实验概要本实验介绍了辣根过氧化物酶标记试剂对三种底物的使用方法。辣根过氧化物酶标记试剂底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑(AEC)等。实验原理1. DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属

HRP底物分类及其操作步骤

底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。二氨基联苯胺/金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑

免疫组化没有任何着色的解决办法

DAB是否有效,可通过DAB直接与二抗反应,若不显色,则是DAB有问题或是二抗有问题, 是否DAB失效或是二抗浓度太低,可更换DAB或提高二抗浓度。排除这两者原因,再摸索最佳条件。首先要弄明白,所谓的DAB染色是怎样来的,DAB和过氧化氢是HRP的底物,可以说有三个环节1:DAB是否在有效期,和是否

背景染色较深的原因

(1)抗体浓度过高:一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是,每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色。(2)抗体孵育时间过长或温度较高:解决办法是,严格执行操作规程,最好随身佩带报时表或报

辣根过氧化物酶标记的试剂

底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产

免疫组化二抗和显色时间过长会怎样

血清封闭时间过长会降低阳性率,过短非特异性染色易于出现。增强阳性率的表达,最主要的是抗原修复方法、一抗二抗浓度的恰当选择而不是楼主所说的盲目增加一抗浓度。DAB的浓度与阳性率没有明确的关系,但是低浓度的DAB有助于确定恰当的终止时间。当然,对于组织抗原降低或者一抗敏感性太差,可考虑选择增强型DAB显

HRP底物归类以及操作流程

  二氨基联苯胺/金属盐   DAB是辣根过氧化物酶最比较敏感、常见的底物。它造成明显的深棕色物质,在水和醇中不融解。大部分状况下,强烈推荐在DAB中添加不一样的金属正离子。当添加金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶能够更为比较敏感。该类反映物质呈暗灰蓝色至灰黑色,且在水及醇中平稳。DAB/金

Brdu免疫组织化学染色分析-BrdU-incorporation-assay

Enzyme Immunostaining for BrdU:Wash frozen sections with PBS 2x.Put them in 0.1% Pepsin in 0.1N HCL (in PBS) at 37�C for 50min.Then in 0.3% hydrogen p

免疫染色法检定蛋白质

实验概要转印到纸上的蛋白质抗原,可与其专一性抗体结合,再以二次抗体-酶结合体(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色;可在一群转印色带中,专一性地挑出目标蛋白质,是最有用的检定工具。主要试剂1. 抗体溶液:可用传统抗血清或单株抗体,其最适使用浓度,随抗体效价不同而异,以下为一般适

免疫染色法检定蛋白质

实验概要转印到纸上的蛋白质抗原,可与其专一性抗体结合,再以二次抗体-酶结合体(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色;可在一群转印色带中,专一性地挑出目标蛋白质,是最有用的检定工具。主要试剂1. 抗体溶液:可用传统抗血清或单株抗体,其最适使用浓度,随抗体效价不同而异,以下为一般适

Factor-VIII-相关抗原的免疫组织化学染色

Immunostaining for Factor VIII Related Antigen (endothelium):Deparaffinize and rehydrate tissue sections. Rinse 3 times with PBS.0.1%Pepsin in 0.1N HC

凋亡相关基因-Bax的表达产物的检测

操作: 1、 培养细胞(96孔板,每组3正常、3损伤、3损伤恢复) 2、 PBS洗,5min X 3次 (小心) 3、 甲醇固定10min 4、 PBS洗,5min X 3次 5、 加入封闭液(1:10) 25µl,37 ℃,30min,吸去上清液,滤纸吸干 6、 加一抗(1

免疫酶标技术

1) 直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色

细胞免疫化学:免疫酶标技术

1) 直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色

免疫酶标技术

免疫酶标技术1)  直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟

Preparation-and-Staining-of-Frozen-Tissue-Sections

I. Preparation of Frozen Sections for SectioningMaterials neeed:2-methylbutane (isopentane)Liquid NitrogenDry icePeel-Away?/sup> base moldsFrozen tiss

石蜡切片免疫组化染色实验操作流程

1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。① 二甲苯 、II,各 10 分钟。② 梯度酒精:100%,2 分钟 95%,2 分钟 80%,2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分

免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)

一、直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结

Reelin-Signaling-Pathway

Reelin is an extracellular protein secreted by neurons. Reeler mice with a defective Reelin gene exhibit neuronal abnormalities in development. Mice t