Science挑战传统认知,剪接的多样性
大多数的哺乳动物蛋白编码基因都可能有许多种转录物,它们是由纳入外显子变化所导致。过去人们认为所谓的选择性剪接(alternative splicing)事件在物种间有可能是保守的,然而发表在12月20日《科学》(Science)杂志上的两项研究表明大多数并非如此。研究人员甚至认为,高度的选择性剪接差异或许是物种分化的一个驱动力。 凯斯西储大学RNA分子生物学家Donny Licatalosi 教授说“过去人们普遍认为,在小鼠大脑和肌肉之间看到剪切差异与在人类中看到的相似。然而,两项研究表明情况并非如此。有大量物种特异性的选择性剪接存在。” 其中一项研究的领导者、多伦多大学细胞和分子生物学教授Ben Blencowe说:“在脊椎动物进化生物学中有一个重要的问题:如果我们与小鼠、鸡或青蛙具有非常相似的一组基因,那么身体和行为的差异是如何产生的?”基因表达水平变化是一个经常讨论的机制,然而第二篇论文的主要作......阅读全文
蛋白质是如何表达的
不是蛋白质是如何表达的,而是细胞如何表达出蛋白质的。蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程,转录是以DNA为模板合成RNA,mRNA从细胞内出来,和核糖体结合,再在tRNA的帮助和酶、ATP的帮助下,合成蛋白质分子。
杆状病毒系统蛋白质表达实验——小规模表达
实验方法原理分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料草地夜蛾(Sf9)细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材含 10% 胎牛血清(FBS)的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱(湿度可选)15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7 水平转
组蛋白修饰分工调控基因表达水平和基因表达噪音
基因表达过程依赖于转录因子、染色质调控因子和染色质等生物大分子在布朗运动过程中的随机碰撞,因此,即使是基因型和分化类型完全相同的细胞在相同环境下也存在基因表达的差异,被称为基因表达噪音。研究基因表达噪音,对研究干细胞增殖分化、个体发育、病原菌的抗药性以及农作物的稳产有着重要的意义,而其在人类早期
蛋白质磷酸化位点怎么确定
鉴定了磷酸化肽后,还要进一步确定磷酸化肽中修饰了磷酸化位点的哪个残基.用于确定磷酸化肽中磷酸化位点的质谱方法基于两种不同原理,第一种方法取决于磷酸酯键的化学稳定性,如在ESI质谱仪的碰撞室或离子源中,或在MALDI-MS的PSD过程中.磷酸化肽可通过磷酸酯键断裂产生的碎片离子鉴定.第二种方法基于肽段
蛋白质磷酸化位点怎么确定
鉴定了磷酸化肽后,还要进一步确定磷酸化肽中修饰了磷酸化位点的哪个残基.用于确定磷酸化肽中磷酸化位点的质谱方法基于两种不同原理,第一种方法取决于磷酸酯键的化学稳定性,如在ESI质谱仪的碰撞室或离子源中,或在MALDI-MS的PSD过程中.磷酸化肽可通过磷酸酯键断裂产生的碎片离子鉴定.第二种方法基于肽段
蛋白质磷酸化位点怎么确定
鉴定了磷酸化肽后,还要进一步确定磷酸化肽中修饰了磷酸化位点的哪个残基.用于确定磷酸化肽中磷酸化位点的质谱方法基于两种不同原理,第一种方法取决于磷酸酯键的化学稳定性,如在ESI质谱仪的碰撞室或离子源中,或在MALDI-MS的PSD过程中.磷酸化肽可通过磷酸酯键断裂产生的碎片离子鉴定.第二种方法基于肽段
Western-Blot蛋白质磷酸化操作小贴士
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法,然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做!WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候,会特别沮丧。 Azure君在此给大家列出几点小建议,希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达: 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置:
Western-Blot蛋白质磷酸化操作小贴士
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法,然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做!WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候,会特别沮丧。在此给大家列出几点小建议,希望能帮助您改善一下实验结果。1、样本是否表达:查阅资料或通过预实验确定。2、对照设置:阳性和阴性对照。总蛋白抗体对照,对于特定时间的特定样
蛋白质磷酸化最重要的机制
蛋白质磷酸化是调节和控制蛋白质活力和功能的最基本、最普遍,也是最重要的机制。蛋白质磷酸化主要发生在两种氨基酸上,一种是丝氨酸(包括苏氨酸),另一种是酪氨酸。这两类酸磷酸化的酶不一样,功能也不一样,但也有少数双功能的酶可以同时作用于这两类氨基酸,如MEK(促丝裂原活化蛋白激酶激酶mitogen-a
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、 青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于10
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2
基因和蛋白质研究为蜘蛛生物学开启新时代
在展示大自然魔鬼般的创造力方面,很难有什么能打败蜘蛛。以隐居的鬼面蜘蛛为例,它们长着很大的尖牙以及凸起且超大的中眼。在整个热带地区,这些八条腿的怪兽挂在树枝上,并在前腿中间撑起一张可伸展的丝网,以便它们能以闪电般的速度将网罩在猎物上。相比之下,艳丽的孔雀蜘蛛到处炫耀彩虹色的腹部以吸引异性,而它
杆状病毒表达系统的影响蛋白质表达的因素
在杆状病毒系统中,要获得蛋白质的有效表达,首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型,选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素:①该目的基因应不含内含子;②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列;③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间(如Kozak 序列)
表达基因的克隆策略与分离表达基因序列的技术方法
人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中,发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3~5%。基因组中绝大部
计算生物学所揭示汉族和日本人之间的基因表达谱差异
记者获悉,由全国人大常委会副委员长沈跃跃带领的全国人大检查执法组近日在江苏多个省辖市对《可再生能源法》贯彻实施情况进行执法检查。 作为可再生能源起步早、规模大、企业多、产业链齐全的省份,江苏当下在这一领域的企业正面临着严重的全面亏损状态。 《可再生能源法》于2006年实施,2009年
细菌表达蛋白质和样本制备
一般直接用SDS凝胶加样缓冲液裂解,具体方法如下:[试剂与设备](1)表达待检测蛋白质的细菌。(2)50mmoL/LTris-HCl(pH7.4)。(3)2xSDS凝胶加样缓冲液:100mmol/L Tris—HCl(pH6.8)200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT)4% SDS(电泳级)0.2%
蛋白质的表达、分离、纯化实验
实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在 37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程
蛋白质的表达、分离和纯化
目的要求(1)了解克隆基因表达的方法和意义。(2)了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系
用于蛋白质表达的标签实验
实验步骤 一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素 亲和力和可溶性的选择 在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启
用于蛋白质表达的标签实验
实验步骤一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正
蛋白质的表达、分离、纯化实验
基因重组—层析法 实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在 37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转
基因表达度的概念
中文名称表达度英文名称expressivity定 义个体基因表达的变化程度。同一基因型的不同个体在性状或疾病的表现程度上的差异。可以因环境因子的差异、其他基因的影响或者个体遗传背景的不同等引起。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)
基因表达调控主要表现
基因表达调控主要表现在以下几个方面:①转录水平上的调控;②mRNA加工、成熟水平上的调控;③翻译水平上的调控;
基因表达的系列分析
中文名称基因表达的系列分析英文名称serial analysis of gene expression;SAGE定 义通过构建较短的表达序列标签规模化地检测基因表达种类及其丰度的实验技术。应用学科遗传学(一级学科),基因组学(二级学科)
融合基因的表达物
融合基因的表达产物为融合蛋白。
基因表达调控的概念
基因表达调控是生物体内基因表达的调节控制,使细胞中基因表达的过程在时间、空间上处于有序状态,并对环境条件的变化作出反应的复杂过程。基因表达的调控可在多个层次上进行,包括基因水平、转录水平、转录后水平、翻译水平和翻译后水平的调控。基因表达调控是生物体内细胞分化、形态发生和个体发育的分子基础。
基因共表达的定义
共表达质粒就是指那些可以同核DNA一起表达的质粒DNA。
基因超表达的概念
超表达是指目的基因的全长序列与高活性组成型启动子或组织特异性启动子融合,通过转化,获得该基因产物大量积累的植株。
基因超表达的定义
超表达是指目的基因的全长序列与高活性组成型启动子或组织特异性启动子融合,通过转化,获得该基因产物大量积累的植株。