蛋白质印迹法实验的要点
1、样品质量。 所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2、凝胶质量。 不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为这个PH条件是保证电泳液中的甘氨酸不电离的必要条件，也是保证能充分压缩样品的前提。因此，制备凝胶的时候所用Tris-HCl缓冲液的PH值是否稳定是很重要的。 3、点样。 样品尽量不要与电泳液混合，这样能提高浓缩的效果，因为电泳液PH值为8.3，而样品为7.5，混合后会影响到样品的PH值，进而影响浓缩效果。因此，建议点样最好用**头，或者加样器，轻轻的将样品加到孔的底部。 4、电泳缓冲液。 尽量用新鲜配制的。这样能保证PH值和离子强度的稳定。 5、电压条件。......阅读全文
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的结果分析
可能出现的问题如下。1．背景过高①封闭不充分，应更换封闭液或延长封闭时间；②抗体浓度过高，应适当增加抗体稀释倍数；③洗膜不充分，应增加洗涤次数或洗涤时间；④膜质量较差，应选择高质量的NC膜，并且整个实验过程中保持膜的湿润。1．背景高可能原因验证或解决办法膜没有完全均匀湿透使用100%甲醇浸膜5~10
蛋白质印迹法试剂准备
1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。 2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。 3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定
什么是蛋白质印迹法？
蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的测定蛋白质含量
1、制作标准曲线（1 ）从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。（2） 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各种试剂。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0
DNA印迹法实验凝胶处理
1)凝胶照相后切去包括标记带在内的多余部分。将凝胶的一角(·点第一个样品的一侧)切去作为标记 以便于定位。精确测量凝胶大小然后将凝胶放入一个方形瓷盘中 。 2)变性：将凝胶浸泡于适量的碱变性液中，室温下变性30分钟。期间更换变性液一次，不断地轻轻摇动。如果先进行酸变性酸变性，则凝胶中溴酚兰的颜
印迹法植物气孔检测实验
实验方法原理把有机溶胶涂在植物的表面，胶体风干后就凝成薄膜，这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹，从而显示出气孔的开闭情况，此法除用来观测气孔外，还可用于观测表皮组织上的细胞，茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料植物叶片
印迹法植物气孔检测实验
实验方法原理把有机溶胶涂在植物的表面，胶体风干后就凝成薄膜，这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹，从而显示出气孔的开闭情况，此法除用来观测气孔外，还可用于观测表皮组织上的细胞，茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料植物叶片试剂、试剂盒脱脂棉牛皮胶甲苯石蜡仪器、耗材显微镜目镜测微尺载玻片盖玻片磨口玻璃
印迹法植物气孔检测实验
实验方法原理 把有机溶胶涂在植物的表面，胶体风干后就凝成薄膜，这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹，从而显示出气孔的开闭情况，此法除用来观测气孔外，还可用于观测表皮组织上的细胞，茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料 植物叶片试剂、试剂盒 脱脂棉牛皮胶甲苯石蜡仪器、耗材 显微镜目镜测微尺载玻片盖玻片
关于蛋白质印迹法的分类介绍
Western Blot显色的方法主要有以下几种： 1、放射自显影 2、底物化学发光ECL 3、底物荧光ECF 4、底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简
蛋白质印迹法的用途及原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法的研究与应用
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为West
蛋白质印迹法的起源和应用
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所(Friedrich Miescher Institute)的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为West
蛋白质印迹法的目的和原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法的研究和应用
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为West
蛋白质印迹法的概念和原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法速成知识ABC
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。 蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔
蛋白质印迹法含量测定介绍
1、制作标准曲线 （1 ）从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 （2） 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。 （3 ）在各管中加入各种试剂。 （4）混匀后，室温放置2min。在生物分光光
蛋白质印迹法有什么缺点？
蛋白质印迹是生化实验室中最常见的程序之一。基本上,它从大小上将蛋白质与样品分开,然后使用抗体进行测试以确定是否存在给定的蛋白质。它不仅在研究中有用,而且在医学或诊断实验室中也有用。例如,针对HIV和莱姆病的检测均包括酶联免疫吸附测定(ELISA)检测,如果ELISA检测呈阳性,则进行蛋白质印迹分析。
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPERFILM或柯达 X 光底片缓冲液 A实验步骤 材料与设备样品，由各步纯化操作所得硝酸纤维素膜 (0.
量蛋白质斑点印迹实验
蛋白质印迹法，它是用免疫学方法来测量某一蛋白质的量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPER
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体 辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 G ECLTM#1 和#2 试剂 十二烷基肌氨酸钠 Tris-缓冲盐溶液
蛋白质印迹法的显色的方法介绍
Western Blot显色的方法主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理
DNA印迹法的实验器材和试剂
器材 1、电热真空干燥箱 2、硝酸纤维素滤膜或尼龙膜 3、大方瓷盘、带盖方盘、玻璃板 4、滤纸、吸水纸、保鲜膜、蜡膜Parafilm、一次性手套等 5、刀片、刻度吸管、镊子、剪刀、lkg重物 二、材料 电泳分离DNA的琼脂糖凝胶 试剂 1、酸变性液:0.25mol/L HCl， 用
DNA印迹法实验膜处理的介绍
1)剪下一张与凝胶面积相同的硝酸纤维素膜(NCP)或尼龙膜,NL,。注意NCP也要剪去一角且不可用手触摸,粘有油腻的膜不能被湿润,也不能结合DNA。同时剪8,10张与NCP等大的干净滤纸 2)将NCP与3,4张滤纸依次漂浮于盛有双蒸馏水的带盖方盘中,使水自然从NCP的下面向上浸润,待其完全浸湿
免疫印迹法实验的试剂准备
1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。 2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。 3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定
免疫印迹法实验的操作步骤
一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。三转移：（半干式转移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平
蛋白质印迹法的基本原理
与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附
DNA蛋白质印迹法的技术应用
中文名称DNA-蛋白质印迹法英文名称Southwestern blotting定 义将经过电泳分离的蛋白质转移到膜上再与某些特定序列的DNA片段相互作用，是研究蛋白质与DNA特异结合的技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）